超声波技术替代冰冻切片技术在甲状腺术中快速制片的应用

刘宪军

[摘要] 目的 试验超声波技术在甲状腺手术过程中替代冰冻切片技术快速制出病理切片，探寻适合甲状腺冰冻切片的替代制片技术。 方法 2018年4月23日临床手术送检的活体组织，同一块组织按照1.0 cm×1.0 cm×0.1 cm取材六块，随机等分为三组。分别设置80 min，70 min，55 min每一个程序总的试验时间，观察最终切片与冰冻切片的质量对比。 结果 在取材标准的情况下，采用C组制片质量能够达到快速诊断要求，三组的切片质量均优于冰冻切片质量，差异有统计学意义（P<0.05）。但是A、B两组相对组织处理的时间较长，三组切片质量均势的情况下，C组更能符合替代快速冰冻切片的要求。 结论 超声波快速处理仪可以帮助解决术中的甲状腺手术快速制片的要求。

[关键词] 超声波快速处理仪；甲状腺快速制片；冰冻切片机；苏木素

[中图分类号] R736.1 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2018）27-0141-03

[Abstract] Objective To test ultrasonic technology in the rapid section production of thyroid surgery instead of frozen section technology， and to explore alternative thyroid frozen section production technology. Methods The living tissue submitted for clinical operation on April 23， 2018 was selected as the research object. Six pieces from the same organization were taken according to 1.0 cm×1.0 cm×0.1 cm and randomly divided into three groups. And 80 minutes， 70 minutes， and 55 minutes was set as the total test time of the program， respectively. The quality of the final slice and the frozen slice were observed. Results In the case of the standard of the material， using the group C production quality can achieve rapid diagnostic demand. The slice quality of group A， group B， group C was better than that of the frozen slicer. There was little statistically significant difference（P<0.05）. The experiment was successful and had clinical pathological alternative significance. However， the relative tissue treatment time of the group A and group B was longer. In the case of equal quality of the three groups， group C met the requirements of replacing fast frozen slices better. Conclusion Ultrasonic rapid processing instrument can help solve the requirements of rapid section production of thyroid surgery.

[Key words] Ultrasonic rapid processing instrument； Rapid thyroid section production； Frozen slicer； Hematoxylin

快速冰凍制片技术是普通外科甲状腺手术中明确肿物性质最快的技术手段[1-4]，但由于不可预料的客观因素或者客观条件所限[5]，超声波快速处理仪不失为一种很好的技术支持，对于术中及时了解病变性质，以便确定手术范围，缩短手术创面的暴露时间方面起到了至关重要的指导作用。但是由于时间限制，快速冰冻切片的质量和确诊率往往不如石蜡切片。为了尽可能地降低快速冰冻切片的延迟诊断率和误诊率，提高切片制作质量，需要从多个方面改善制作步骤，其中在手术量不大或者不可预知的客观因素，或者客观条件限制，完全可以以此方法替代冰冻切片机[5]，解决甲状腺手术中的快速制片要求。

1 材料与方法

1.1 标本来源

研究时间：2018年4月23日；组织来源：临床科室手术中的活体组织，在手术室送检病理科甲状腺标本中，选取6块甲状腺新鲜组织需要进行冰冻切片的标本。

1.2 主要仪器与试剂

天津久圣公司的超声波快速组织处理仪[6]，温度控制范围40℃～100℃，超声频率1MHZ，功率500 W。AF液（40%甲醛溶液10 mL加无水乙醇90 mL配比），95%乙醇及无水乙醇，二甲苯，病理科专用石蜡，苏木素染色液，伊红染色液。试剂均使用丹麦DAKO生物试剂公司的染色试剂。

1.3 超声波制片方法

取材，根据手术室送检的新鲜的没有固定的甲状腺组织，放在取材台上，标尺测量甲状腺的体积，以2 mm厚度最大面积逐层切割甲状腺组织，选取甲状腺组织病变部位与正常组织交界处，规格是1 cm×1 cm×0.1 cm，准备用超声波水浴加热处理，首先将快速处理仪调整好水浴温度为70℃，选取的甲状腺组织6块分别标记试验号码A、B、C三组，每个材块规格为1 cm×1 cm，厚度1 mm标准。A组的试验程序（80 min）设置为：AF液脱水固定时间为10 min，95%乙醇时间为15 min，无水乙醇时间为20 min，二甲苯透明15 min，浸蜡20 min；B组的试验程序（70 min）[9]为AF液脱水固定时间为8 min，95%乙醇14 min，无水乙醇18 min，二甲苯透明12 min，浸蜡18 min；C组的试验程序（55 min）为AF液时间为5 min，95%乙醇10 min，无水乙醇15 min，二甲苯10 min，浸蜡15 min。以以上三个程序分别进行超声波水浴加热甲状腺组织处理。组织处理完毕同常规石蜡制片一样包埋、冷冻、切片、烤片、染色、封片，此过程大约20 min符合制片染色效果要求。

1.4冰冻切片制作

按照取材甲状腺冰冻切片的标准进行取材一块，放在-25℃的冰冻切片机冷台上冷冻[14]，冷冻好后进行组织切片，厚度5 μm，选择最好的切片贴附于载玻片磨砂面端对侧1/3中间位置[7]，然后进行甲醇固定5 s，自来水洗5 s，苏木色精染色3 min，40℃自来水洗5 s，0.1%的盐酸酒精分化，40℃自来水洗5 s，0.5%的碳酸氢钠溶液返蓝[15]，40℃自来水洗5 s，伊红染液染色，40℃自来水洗5 s，梯度75%×2，85%×2，95%×2，100%×2乙醇各浓度分别进行脱水4 min，二甲苯透明共计4 min，中性树胶封片。

1.5 评分方法

根据中华医学会病理质控中心评分标准：①组织切面完整；②切片厚度3～5 μm；③切片无刀痕、裂痕、颤痕；④切片平坦、无邹褶折叠；⑤切片无污染；⑥切片无气泡；⑦切片透明度好；⑧细胞核与细胞质染色对比清晰；⑨切片无松散、粘贴位置适当；⑩切片整洁，标签端正粘牢、编号清晰。根据中华医学会病理分会的评分标准C组评分：①组织切面稍不完整减2分，得8分；②切片薄（3～5 μm）且均匀10分；③切片有裂隙，颤痕减去2分，得8分；④切面平坦，无邹褶得10分；⑤切片无污染10分；⑥切片无气泡10分；⑦透明度略差减3分，得7分；⑧细胞核与细胞质染色对比清晰10分；⑨切片不松散10分；⑩切片整洁10分。最终评为甲级93分。A组和B组与C组比较虽然效果也达到了甲级切片标准，但是因为处理组织时间过长，尚不能采用。冰冻切片的评分；①组织切面稍不完整减2分，得8分；②切片较厚（7 μm）减3分，得7分；③切面有颤痕减2分，的8分；④切面不平坦减2分，得8分；⑤切面无污染10分；⑥切片无气泡10分；⑦透明度高10分；⑧细胞核与细胞质染色对比清晰10分；⑨切片松散减3分，得7分；⑩切片整洁10分，最终评分的88分。

1.6 统计学方法

本次试验采用了统计的前瞻性研究，实验设计采用自身配对设计，临床病理试验为第一次试验，主要做法分组为随机，对照，重复，均等.控制重要非试验因素，如水温，处理时间，组织厚度等计量资料，P<0.05为差异有统计意义。

2 结果

A、B、C三组标本在其他条件相同情况下，经过超声波不同时间处理，C组制片染色效果优于A、B两组，C组与冰冻切片比较符合快速诊断的质量要求，胞浆鲜艳，核仁清晰，组织结构完整。

在取材标准的情况下，采用C组制片质量能够达到快速诊断要求，且优于冰冻切片质量，差异有统计学意义（P<0.05）。可以在冰冻切片机出现故障或不具备购买冰冻切片机的病理科应用，虽然出片时间略长（术中冰冻切片质控时间为15～20 min，此實验出片时间为55 min），但可以解决术中甲状腺快速制片要求的难题。见封三图6。

3 讨论

冰冻切片（frozen section）是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度[8]，然后进行切片的病理技术操作方法，因为其制片过程较石蜡切片快捷，简便，而多用于临床手术中的快速病理诊断。在临床外科手术过程中，如妇科的卵巢瘤、畸胎瘤、普通外科的甲状腺肿瘤、乳腺外科的乳腺肿瘤、神经外科的胶质细胞瘤等均可以进行冰冻切片的快速制片，从而进行快速病理诊断定性。减少了石蜡切片长时间的处理时间（从取材到做出常规切片约15 h），又由于冰冻切片机价格昂贵及不可预知的机械故障，对不同组织有着质量较高的切片要求，在实际工作中试验了超声波技术替代冰冻切片技术在甲状腺快速制片中的应用。根据不同设置的程序进行试验，A组的切片处理因为其固定、脱水、透明、浸蜡时间较长，切片相对要容易操作，但是因为其整个处理时间较长，不符合手术中对甲状腺快速诊断的要求，且与C组处理的组织在HE染色结果判读并无明显根本差别[9]，而且C组处理时间更短，符合快速的特点。

冰冻切片诊断技术是临床外科手术定性比较依赖的病理检查方法[11]，近年来，随着人们对医疗技术的要求提高及对疾病快速准确诊断的认可，将需要进行明确诊断的病变组织置于-25℃的条件下进行快速冷冻，避免产生冰晶及使细胞过度膨胀，影响诊断。不同的组织在-20℃左右的情况下，组织的硬度，细胞膨胀的系数，冰冻切片时对刀锋的适应度，切出的切片能否顺利的进入防卷板，如果温度高一点，切片聚堆，无法展片，制片就不成功，影响诊断效果，所以适宜的温度是冰冻切片的关键[10]。甲状腺组织适宜的冰冻温度为-25℃。对不同组织的疾病均有不同的解决方法。高效、快速、准确是我们病理科技术方面面临的挑战和今后不断探索及发展的方向，此项超声波快速处理术中甲状腺的临床诊断要求，其操作过程类似于石蜡切片的组织处理过程，诊断医生根据临床医生送检的甲状腺组织，均等切开组织找出甲状腺非肿瘤组织与病变相邻部位取材试验，经过95%乙醇及无水乙醇脱水，二甲苯透明，生物组织的特殊石蜡浸蜡[15]，在相同的处理试剂的前提下进行了超声波技术及加温组织处理[9]。超声波技术是一项广泛应用于医学各个方面的成熟的技术，临床超声检查，理疗科的超声波物理疗法等，那么超声波技术应用于病理科快速制片技术，就是利用超声波的物理特性，加速组织间的物理交换过程，从而达到病理活体组织快速处理的目的[10]。可以帮助解决临床检验具有传染性疾病又需要进行术中快速诊断的患者或设备不全或突然停电的特殊情况。

综上所述，这是一种低成本，高效益，成熟的尤其解决县级医院的技术难题，值得继续探讨学习发展。

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（收稿日期：2018-06-07）