ELISA法检测血液HBsAg灰区区间问题的探讨

李丽平 ，杨堃 ，彭小华 ，吴青莲

(1、新余市中心血站，江西 新余 338000；2、新余市渝水区珠珊卫生院，江西 新余 338033)

当前血液筛查以ELISA法和核酸两种方法同时检测，通过ELISA法检测血液中的病毒特异性抗原或抗体，核酸则同时检测HBV－DNA、HCVRNA和HIV－RNA。ELISA法以标本OD值/临界值即S/CO值作为判断标本阴阳性的标准，试剂说明书规定标本S/CO值≥1为阳性，S/CO值＜1为阴性，在实际工作中常出现标本S/CO值＜1，而核酸检测为HBV－DNA阳性的情况，说明在试剂说明书规定的S/CO值＜1的某个区间设置一个范围判定标本结果为阳性或待检，可以最大程度减少低浓度标本漏检的可能。现报告如下。

1 材料与方法

1．1 标本来源与处理 2012年3月1日至2017年12月6日本站ELISA法检测HBsAg结果S/CO值在0．5～4范围内的标本195例，留取2管标本，其中一管用于核酸检测，另一管用于血清学检测。

1．2 仪器 Uranus－AE－100全自动酶免分析仪、Hamilton STAR全自动混样仪、Ezbead System－32提取仪、7500型实时荧光定量PCR扩增仪。

1．3 试剂 HBsAg检测试剂由厦门新创、北京万泰用两个厂家提供，核酸检测试剂由上海浩源生物科技有限公司提供。

1．4 方法 用两种 ELISA法试剂进行 HBsAg检测，S/CO值在0．5～4范围内的标本，取相同的试剂进行再检，同时对HBsAg单试剂阳性标本和阴性标本进行核酸检测，核酸结果判定：Ct＞45为阴性，Ct≤45为阳性。

2 结果

2．1 S/CO 值在 0．5－4 范围内的 HBsAg 检测结果2012年3月1日至2017年12月6日，本站共检测标本46122例，其中ELISA法HBsAg检测结果S/CO值在0．5～4范围内的标本195例，初检阳性结果 S/CO 值 0．5＜S/C≤0．8标本 13 例， 核酸检测阳性 1 例；结果 0．8＜S/C≤1．0 标本 45 例，再检阳性 7 例，核酸检测阳性 8 例；结果 1．0＜S/C≤4．0 标本137例，再检阳性33例，核酸检测阳性4例。见表1。

2．2 HBV－DNA阳性标本中两种试剂初检结果HBsAg初检阳性标本中，HBV－DNA检测阳性的13例标本有8例为一种试剂结果阳性，另一试剂显弱色，5例为单试剂初检阳性，其中S/CO值≤1．0范围的标本HBV－DNA阳性9例。见表2。

2．3 4 例HBV－DNA阳性标本ELISA法结果 4例双试剂均呈弱色，S/CO值在0．5以下，核酸检测HBV－DNA阳性。见表3。

3 讨论

2012年3 月1 日至2017年12月6日共检测无偿献血者血液标本46122例，其中HBsAg阳性441（0．96%）例，HBV－DNA 阳性 81（0．18%）例，核酸阳性率高于其他地区[1－3]。HBsAg单试剂阳性182（S/CO≥0．8）例，再检阳性 40 例，ELISA 法检测影响因素很多[4]，可能是慢性乙肝感染者病毒S区或X区基因突变影响[5]，也可能是HBV感染的早期窗口期，HBsAg病毒处于低水平状态，或是ELISA方法的局限性和血液标本本身的影响，导致大部分标本初检结果为非特异性反应。ELISA法HBsAg单试剂阳性核酸检测阳性12例，其中检测结果在0．7≤S/CO 值≤1．0范围的标本 HBV－DNA 阳性有9例，8例HBV－DNA阳性的ELISA法检测结果一种试剂结果阳性，另一试剂显弱色，4例HBVDNA阳性的ELISA法检测结果S/CO值均在0．5以下。

表1 S/CO值在0.5-4范围内的HBsAg检测结果

表2 HBV-DNA阳性标本中两种试剂初检结果（S/CO值）

表3 4例HBV-DNA阳性标本ELISA法结果

ELISA法再检阳性集中在 S/CO大于 0．8，为40例，核酸阳性集中在S/CO值大于0．7，为13例，有文献显示单试剂阳性而核酸阴性，中和试验阳性的情况[6]，说明核酸结果为阴性，而单试剂再检仍为阳性的标本仍存在一定的风险。

ELISA法检测HBsAg的试剂说明书规定标本S/CO值≥1为阳性，S/CO值＜1为阴性。在表1中0．5＜S/CO值≤1．0的标本数为58例， 其中结果在0．7≤S/CO值≤1．0的标本45例，再检阳性7例，核酸阳9例，占HBsAg单试剂阳性标本核酸检测阳性的69．2%，而这部分标本按试剂说明书结果判定要求为阴性，说明ELISA法检测试剂在结果S/CO值小于1．0的标本判定上应该设定一个范围，才能减少HBsAg的漏检，这个范围设置多少才合适，没有文献报道[7－10]。

从表 1、 表 2中数据看出 0．8≤S/CO 值≤1．0标本ELISA法再检阳性和核酸检测阳性最多，表3中4例核酸阳性的标本其S/CO值均在0．5以下且两种试剂都不同程度的显色，说明核酸检测可以最大限度降低风险，同时弥补ELISA法的不足[11－14]，从以上实验数据可以看出ELISA法检测HBsAg结果S/CO在1．0以下的设置灰区是非常有必要的，笔者建议使用国产ELISA法试剂检测HBsAg，且还没有开展核酸检测的实验室应设置一个灰区，灰区范围在0．7≤S/CO值≤1．0是比较合适的，既降低了低浓度HBsAg的漏检，又减少了标本再检导致的试剂浪费，同时使用两个不同厂家试剂检测的，两种试剂结果均出现弱色，该标本应该考虑淘汰。