ERRα和AROM在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义

卵巢癌是妇科常见的恶性肿瘤，可发生于任何年龄。卵巢癌是女性生殖器常见的三大恶性肿瘤之一，由于卵巢位于盆腔深部，早期病变不易发现，晚期病例也缺乏有效的治疗手段，因此卵巢癌致死率居妇科恶性肿瘤首位，已成为严重威胁妇女生命和健康的主要肿瘤。卵巢癌的病因和治疗仍是尚未解决的难题。流行病学和临床研究均有证据表明雌激素相关因子在卵巢癌的发生、发展中可能起作用[1]。卵巢癌是性激素依赖性肿瘤，雌激素参与了卵巢癌的发生，雌激素受体的研究也日益受到人们的重视。本研究采用免疫组化方法研究上皮性浆液性卵巢癌中 ERRα、AROM的表达情况，以探寻上皮性浆液性卵巢癌中雌激素相关因子表达及内分泌治疗的可行性。

1 材料与方法

1.1 标本来源

收集2016年1—12月赤峰学院附属医院妇科手术切除卵巢组织的蜡块共90例，行HE染色复查诊断及免疫组化研究，临床、随访及病理资料完整。其中50例卵巢上皮性浆液性癌为恶性组，20例卵巢良性肿瘤为良性组，20例正常卵巢组织为正常组。卵巢上皮性浆液性癌患者年龄23～75岁，平均年龄（50.3±14.6）岁；肿瘤大小2～10 cm，平均大小（5.3±2.2）cm；肿瘤TNM临床分期其中Ⅰ期12例，Ⅱ期7例，Ⅲ期26例，Ⅳ期5例；肿瘤病理分级其中G1为14例，G2为8例，G3为28例；淋巴结转移患者23例，无淋巴结转移患者27例，所有患者术前未接受放疗、化疗治疗。卵巢良性肿瘤患者年龄25～73岁，平均年龄（52.5±15.1）岁；肿瘤大小2～8 cm，平均大小（4.8±1.9）cm。正常卵巢组织患者年龄28～73岁，平均年龄（54.2±16.3）岁。

1.2 主要试剂

AROM，兔抗人多克隆抗体，稀释浓度1∶100，购自美国Santa Cruze公司；ERRα，兔抗人多克隆抗体，稀释浓度1∶100，购自美国Santa Cruze公司。

1.3 实验方法

组织以10%甲醛固定，常规脱水，石蜡包埋，4 μm厚连续切片，常规HE染色切片经两位病理医生复诊。免疫组化步骤参照说明书操作，略加改进。石蜡切片常规脱蜡、脱水，暴露抗原、抗原修复，加正常血清，分别滴加一抗ERRα和AROM，PBS冲洗，再滴加生物素标记第二抗体，PBS冲洗，DAB显色，苏木素复染，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。用已知宫颈癌阳性切片作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。

1.4 结果判定

胞浆或胞核表现棕黄色或棕褐色颗粒为阳性细胞。高倍镜下选择5个有代表性视野计数，每个视野100个细胞，计算高倍视野中阳性癌细胞百分数，＜10%为阴性，阳性细胞数10%～25%（+）、25%～50%（++）、＞50%（+++）。

1.5 统计学分析

应用SPSS 20.0软件处理分析数据，计数资料采用n（%）表示，采用χ2检验，采用Spearman等级相关性分析法分析ERRα与AROM相关性，P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 ERRα、AROM在卵巢正常组织、良性肿瘤及卵巢上皮性浆液性癌中的表达

ERRα在恶性组中高表达，表达阳性率78%，高于正常组（30%）及良性组（35%），与正常组比较差异具有统计学意义（χ2=14.34，P＜0.01）；与良性组比较差异具有统计学意义（χ2=11.72，P＜0.01）；正常组与良性组比较差异无统计学意义（χ2=0.114，P＞0.05）。AROM在恶性组中低表达，阳性表达率36%，低于正常组（75%）及良性组（70%），与正常组比较差异具有统计学意义（χ2=8.72，P＜0.01）；与良性组比较差异具有统计学意义（χ2=6.65，P＜0.01）；正常组与良性组比较差异无统计学意义（χ2=0.125，P＞0.05）。见表1。

表1 ERRα、AROM在不同组织中表达情况[n（%）]

2.2 卵巢癌组织中ERRα、AROM表达与肿瘤生物学行为的关系

ERRα、AROM阳性表达情况与上皮性浆液性卵巢癌肿瘤大小、病理分期、病理分级、淋巴结有无转移的关系见表2。T1、T2期卵巢癌组织中ERRα阳性表达率低于T3、T4期（χ2=5.45，P＜0.05）；G1、G2卵巢癌组织中ERRα阳性表达率低于G3（χ2=6.34，P＜0.05）；淋巴结未转移卵巢癌组织中ERRα阳性表达率低于淋巴结有转移（χ2=4.06，P＜0.05）；肿瘤直径≤5 cm卵巢癌组织中ERRα阳性表达率75.0%，而肿瘤直径＞5 cm为80.8%，两组比较，差异无统计学意义（χ2=0.24，P＞0.05）；T1、T2期卵巢癌组织中AROM阳性表达率高于T3、T4期（χ2=18.89，P＜0.05）；G1、G2卵巢癌组织中AROM阳性表达率高于G3（χ2=5.86，P＜0.05）；淋巴结未转移卵巢癌组织中AROM阳性表达率高于淋巴结有转移组（χ2=7.79，P＜0.05）；肿瘤直径≤5 cm卵巢癌组织中AROM阳性表达率41.7%，而肿瘤直径＞5 cm为30.8%，两组比较，差异无统计学意义（χ2=0.64，P＞0.05）。

表2 卵巢癌组织中ERRα、AROM表达情况[n（%）]

2.3 ERRα与AROM在卵巢上皮性浆液性癌中表达的相关性

卵巢上皮性浆液性癌标本ERRα与AROM的表达情况见表3，Spearman等级相关性分析法分析发现两者阳性表达情况存在负相关关系（rs=-0.715，P＜0.05）。

表3 ERRα与AROM表达相关性

3 讨论

卵巢癌死亡率仍高居妇科恶性肿瘤首位，究其原因是难以早期发现且病因不清。AROM是雌激素生物合成过程中最后一步限速酶，国内外多项研究表明AROM在乳腺癌[2-3]、子宫内膜癌[4]、子宫内膜异位症[5]等疾病中有高表达，并对这些疾病的发生发展起重要作用，而且应用芳香化酶抑制剂治疗这些疾病已收到较好疗效，因此有必要对其在卵巢癌组织中的表达情况及作用进行进一步研究，以更深入地了解局部雌激素在卵巢癌的发生、发展中的作用，并为卵巢癌的内分泌治疗提供新的途径[6]。芳香化酶又称为雌激素合成酶，是雌激素合成过程中的最后一步限速酶，生育年龄妇女的卵巢是雌激素合成的主要部位，芳香化酶的主要作用是将睾酮和雄烯二酮转化为雌二醇（E2）和雌酮[7]，绝经后雌激素主要是在脂肪、肌肉和肾上腺等组织中合成的，这些组织中雌激素的合成主要是在芳香化酶和17β羟类固醇脱氢酶的参与下合成[8]。ERR是以雌激素受体DNA结合域（DBD）为探针，采用低严谨杂交技术筛选人cDNA文库得到的一种新的受体[9-10]，对卵巢癌的研究显示ERRα蛋白主要表达于卵巢癌细胞核内[11]。ERRαmRNA高表达与卵巢癌患者的预后差有关，而ERRγmRNA高表达可能提示患者预后较好， 并推测ERRα以及ERRγ可能通过结合ERRE元件而启动效应表达并诱导卵巢细胞过渡增生进而恶性肿瘤样改变[12-13]。

本研究采用免疫组化技术检测正常卵巢组织、卵巢良性肿瘤及卵巢癌组织中ERRα与AROM蛋白的表达水平并进行相关性分析。研究结果发现ERRα在卵巢癌组织中高表达，而在正常卵巢组织及良性肿瘤组织中低表达，卵巢癌组织中表达水平高于正常卵巢及良性肿瘤组织，且比较差异具有统计学意义；ERRα的高表达与肿瘤分期、分级、淋巴结有无转移有关，而与肿瘤直径大小无关；AROM在在卵巢癌组织中低表达，而在正常卵巢组织及良性肿瘤组织中高表达，卵巢癌组织中表达水平明显低于正常卵巢及良性肿瘤组织，且比较差异具有统计学意义（P＜0.05）；AROM的低表达与肿瘤分期、分级、淋巴结有无转移有关，而与肿瘤直径大小无关；ERRα与AROM在卵巢癌组织中之间表达情况差异有统计学意义，且呈负相关。

我们认为上皮性浆液性卵巢癌中ERRα高表达及AROM低表达与卵巢癌的分期、分级、有无淋巴结转移有关，提示ERRα选择性抑制剂可能是防治卵巢癌发生的可行途径之一，而AROM低表达与ERRα高表达可能存在相关因子表达通路，因此进一步研究、探索上皮性浆液性卵巢癌的发病机制和新的治疗手段是非常必要的，通过本研究可以证实ERRα与AROM表达在卵巢癌生物学过程中可能起到重要作用，为治疗卵巢癌提供了新的思路和方法。

我们的研究显示上皮性浆液性卵巢癌中也存在这些雌激素相关因子的变化，这些因子是否能成为卵巢癌内分泌治疗的新靶点还有待进一步研究。