鸡新城疫免疫血清学监测

刘金玲/河北省卢龙县潘庄动物防疫站

鸡新城疫（ND）俗称鸡瘟，是由鸡新城疫病毒引起的鸡的一种高度接触性、急性、烈性传染病。最早发生于印度尼西亚的爪哇和英国的新城（Newcastle），1927年Doyle首次分离病原，并将该病命名为新城疫。目前，该病已广泛流行与我国所有养鸡地区，在家禽病毒病中，它的流行和危害性占首位。鸡患新城疫常呈现败血症经过，主要特征是呼吸困难，下痢，神经机能紊乱，黏膜和浆膜出血。

鸡新城疫抗体水平较低或未经免疫接种的鸡群，发病率和死亡率可达80%～100%，免疫鸡群的抗体水平中等时，发病率和死亡率的变化较大，低者只有2%～7%，稍高者可达20%～40%。在大中型养鸡场，鸡群有一定的抵抗力的情况下，鸡新城疫主要是以一种非典型的形式出现，应引起重视。

本次实验调查采用的是兽医实验室常用的方法，血凝实验(HA)和血凝抑制实验(HI)，新城疫抗体水平检测使用该方法特异性好，操作方便，可同时进行大量的样品检测，对实验环境要求不高等特点。

血凝实验(HA)和血凝抑制实验(HI)是兽医实验室常用的方法之一，新城疫抗体水平检测使用该方法特异性好，操作方便，可同时进行大量的样品检测，对实验环境要求不高等特点。但是，血凝实验（HA）与血凝抑制实验（HI）实验也受很多因素的影响，由于影响因素复杂，不可能完全排除，但是，本次实验结果数据都是每个样品进行反复多次实验得出的数据。

一、材料和方法

（一）被检血清

从4个乡镇的养殖户场里或农户家里20个养鸡场（户）共计140只鸡进行血液采集，其中合同肉鸡20只，规模场蛋鸡20只，圈养土鸡20只，林下放养土鸡50只，农户散养土鸡30只。采集后的血液样品静置凝固后自然析出血清，析出血清少的，用离心机进行离心后把血清离心出来。

（二）检测材料

标准抗原(HA抗原)、1%鸡红细胞悬液、生理盐水、96孔V型板、微量移液器

本次实验方法是使用已知抗原检测未知抗体，通过血凝实验（HA）和血凝抑制实验（HI）测出被检血清中的抗体滴度。

1.血凝实验（HA）。先用血凝实验（HA），测出标准抗原的血凝价单位。25μl生理盐水→标准抗原25为微升→25μl生理盐水→1% RBC悬液25μl→震荡后在37℃恒温箱静置30 min等待结果。

结果显示抗原血凝价为1∶256

2.配制4 HAU抗原。通过血凝实验（HA）测定，标准抗原为8 log，那么配制4 HAU抗原需要稀释倍数为6倍。

3.血凝抑制试验（HI）。接着血凝实验（HA），继续做下一检测步骤。生理盐水25μl(12孔50μl)→第一孔加入25μl，反复吸取6～8次，取25μl加入第二孔，第二孔反复吸取6～8次，取25μl加入第三孔，如此依次至10孔，10孔取25μl丢弃。→加入4 HAU抗原25μl，从第一孔加至11孔。→震荡1 min，静置培养20 min。→加入1%鸡红细胞悬液25μl，加至12孔，震荡20 s，静置培养等待结果。

二、结果

（一）不同鸡场新城疫血清阳性率

通过HA和HI实验对不同鸡场采集的血清进行检测，结果表明，在被检测的140个血清样品中，共检出阳性数为129份，阳性率为92.14%，其中合同肉鸡阳性率100%，规模场蛋鸡阳性率100%，圈养土鸡阳性率100%，林下放养土鸡阳性率100%，农户散养土鸡阳性率63.3%。

（二）不同日龄鸡群的抗体水平

在被检测的140个血清样品中，共检出阳性129份。抗体水平滴度高的达到12 log2，低的为0，大多数都在6～10 log2之间。0～2 log2占7.3%，3～5 log2占10%，6 ～ 10 log2占 77.3% ，10 log2以上的占 5.4%。

表1 样品抗体分布情况统计表

表2 样品抗体滴度统计表

三、讨论与分析

分析检测结果，发现这些鸡场鸡新城疫抗体水平不整齐，特别是农户散养土鸡，抗体滴度差距大，抗体保护力高低不等。圈养土鸡抗体滴度明显过高，经询问养户，得知该鸡群采取的免疫是饮水免疫（C30）和颈部皮下（新城疫油乳灭火苗Lasota株）注射同时做，所以抗体水平处于高位水平也属正常，但是同群鸡只之间存在个体差异，可能存在野毒感染或者免疫过程存在缺陷。林下放养土鸡，存在抗体水平高低不齐的状态，近36%的鸡只抗体水平属于偏低，不具有足够的保护力。合同肉鸡由于其养殖周期比较短，抗体水平基本处于中等水平，但是其保护力还是存在缺陷。经养户同意，随机解剖两只发病鸡只，其临床表现为鸡冠变薄，萎缩，精神呆滞，食欲较差，轻微咳嗽，拉黄绿色粪便。解剖病变为肝脏肿大，腺胃变薄、变软，乳头之间有出血，刀刮后出血明显，气囊轻微浑浊，表现为气囊炎症状，腹腔有纤维样分泌物，盲肠扁桃体肿胀出血，气管粘膜充血，有粘液性分泌物。初步诊断为鸡新城疫感染继发大肠杆菌病。

参考文献（略）