维生素D缺乏性佝偻病患儿血清25-羟维生素D与骨密度和细胞免疫状况的关系探讨

张 玉

(山西省运城市妇幼保健院,山西 运城044000)

维生素D(Vit D)缺乏性佝偻病是儿科常见疾病,是以Vit D缺乏引起机体钙磷代谢紊乱、骨骼钙化异常为主要特征的全身营养性疾病,多见于婴幼儿[1]。Vit D不仅参与机体钙磷代谢,且具有调节细胞增殖、分化及免疫功能等多种生理学功能[2]。研究发现[3-4],Vit D缺乏性佝偻病患儿除了可出现骨密度降低、骨骼异常外,常伴随机体免疫力下降,易出现肺炎、腹泻或贫血等并发症。Vit D代谢与Vit D缺乏性佝偻病病情进展关系密切,但与患儿免疫水平变化的关系研究尚少。血清25-羟维生素D[25(OH)D]能够直接反映机体Vit D的水平。因此,本研究通过检测Vit D缺乏性佝偻病患儿与健康婴幼儿血清25(OH)D及各T淋巴细胞亚群的变化,初步探讨血清25(OH)D水平与细胞免疫水平的关系,以期为临床中Vit D缺乏性佝偻病的病情评估及指导治疗提供依据。

1 临床资料

1.1 一般资料 选取2016年5月至2017年5月运城市妇幼保健院儿保科收治的80例Vit D缺乏性佝偻病患儿为观察组,其中男43例,女37例;年龄0～3周岁;喂养方式:完全母乳20例,母乳+人工21例,完全人工39例;23例伴有“X”或“O”形蹆、肋串珠、乒乓颅等骨骼异常,57例无明显骨骼异常,但均有易惊、多汗等非特异性神经精神症状。选取同期医院体检中心的80例健康婴幼儿为对照组,其中男42例,女38例;年龄0～3周岁;喂养方式:完全母乳18例,母乳+人工41例,完全人工21例。两组一般资料比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。本研究经过医院伦理委员会批准。

1.2 纳入标准 ①符合Vit D缺乏性佝偻病诊断标准[5];②年龄≤3岁;③受试婴幼儿监护人签署知情同意书。

1.3 排除标准 ①健康婴幼儿合并骨骼代谢相关疾病者;②合并消化、呼吸系统疾病者;③合并严重肝肾功能障碍者;④检测前接受饮食、口服Vit D或钙剂治疗者。

2 方法

2.1 血清25(OH)D检测 收集两组受试婴幼儿空腹血2 mL,室温静置60 min后,2 800 r p m离心10 min,取上层血清,采用酶联免疫吸附法(ELISA,IDS公司)检测各组血清25(OH)D水平,严格按照检测程序操作,且保持室内质控结果为“在控”状态。用3550 UV酶标仪(Bio-rad公司)检测450 n m处吸光度值,根据建立的标准曲线计算血清25(OH)D水平。

2.2 骨密度检测 采用OmnisenseTM7000P骨密度B超仪(Sunlight公司)检测两组受试婴幼儿双侧胫骨中段骨密度,环境温度控制在18～24℃。标准体模校正后保证精确性误差和准确性误差分别控制在1%、3%以内,将测量值与亚洲儿童数据库为正常值,计算百分位数P值和标准差的离差Z值。

2.3 T淋巴细胞亚群检测 采用全血免疫法检测各T淋巴细胞亚群水平。采集两组受试婴幼儿清晨空腹乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝静脉全血2 mL,混匀后在50μL全血中滴加荧光素标记的单克隆抗体10μL,混匀后室温避光孵育20 min,滴入500μL溶血素充分混匀,30 min内用流式细胞仪检测CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+占淋巴细胞总数的百分比(体积法),并计算CD4+/CD8+比值(Bri Cyte E6型流式细胞仪及其配套抗体、溶血素、质控物;深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司,单克隆抗体:CD3-FITC/CD8-PE/CD45-per CP/CD4-APC)。

3 疗效观察

3.1 观察指标 ①血清25(OH)D水平、骨密度标准差的离差Z值和百分位数P值对比;②各T淋巴细胞亚群占比及CD4+/CD8+比值对比;③血清25(OH)D水平与骨密度、T淋巴细胞亚群占比的关系分析。

3.2 统计学方法 采用SPSS 23.0统计软件分析处理数据。计量资料以均数±标准差s)表示,采用t检验;血清25(OH)D水平与骨密度标准差的离差Z值、各T淋巴细胞亚群占比采用Pearson相关性检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

3.3 结果

(1)血清25(OH)D水平、骨密度比较 观察组患儿血清25(OH)D水平、骨密度均显著低于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 两组婴幼儿血清25(OH)D、骨密度标准差的离差Z值和百分位数P值比较

表1 两组婴幼儿血清25(OH)D、骨密度标准差的离差Z值和百分位数P值比较

注:与对照组比较,△P＜0.05

?

(2)各T淋巴细胞亚群占比及CD4+/CD8+比值比较 观察组患儿外周血T淋巴细胞亚群(CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+)占比及CD4+/CD8+比值均显著低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05)。见表2。

表2 两组婴幼儿各T淋巴细胞亚群占比及CD4+/CD8+比值比较(%

表2 两组婴幼儿各T淋巴细胞亚群占比及CD4+/CD8+比值比较(%

注:与对照组比较,△P＜0.05

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(3)血清25(OH)D水平与骨密度、T淋巴细胞亚群占比的关系分析 观察组血清25(OH)D水平与骨密度标准差的离差Z值和百分位数P值、CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+占比、CD4+/CD8+比值均呈显著正相关(r=0.933、0.910、0.762、0.835、0.806、0.845,P=0.000、0.000、0.010、0.004、0.008、0.003)。

4 讨论

临床显示,Vit D缺乏性佝偻病1岁以内婴幼儿发病率最高,引起发病的原因主要有户外活动少、喂养方式不当、Vit D补充不及时、家族有佝偻病史等多种因素[6]。Vit D缺乏性佝偻病患儿早期临床表现多不明显,一旦出现明显症状时,已对患儿骨骼发育造成严重影响。该病发病早期Vi D缺乏可引起血钙水平下降,进而引起甲状旁腺功能代谢性亢进,随着血钙水平升高接近正常,而血磷出现显著下降,最终引起特征性骨骼病变。若不采取有效措施补充机体Vi D水平,长期Vi D缺乏可能导致患儿出现免疫性疾病,对患儿的生长发育造成严重影响[7-8]。因此,探讨Vit D缺乏性佝偻病患儿血清25(OH)D水平与机体骨密度、免疫力的关系,对指导营养支持、治疗方案的选择意义重大。

本研究发现,观察组患儿血清25(OH)D水平、骨密度标准差的离差Z值和百分位数P值均显著低于对照组(P＜0.05),经Pearson相关性分析,观察组血清25(OH)D水平与骨密度标准差的离差Z值和百分位数P值呈显著正相关(P＜0.05),提示Vit D缺乏性佝偻病患儿存在血清25(OH)D水平、骨密度异常较低现象,且血清25(OH)D缺乏与骨密度低下有关。Vit D对人体健康尤其是婴幼儿健康发育有重要意义,可参与机体免疫、造血、内分泌等多种系统功能反应,血清25(OH)D是反映机体Vit D营养状态的最佳指标,机体Vit D缺乏时可直接导致血清25(OH)D水平降低[9]。骨密度可直接反映骨骼阶段性发育状况,应用骨密度B超仪可有效辅助婴幼儿Vit D缺乏性佝偻病的诊断。关于早期佝偻病患儿与健康婴幼儿骨密度差异的研究显示[10],不同年龄亚组(0～1周岁、1～2周岁、2～3周岁)患儿骨密度Z值和P值均显著低于健康患儿,与本研究结果相似。研究表明[11],青少年及中老年人群的Vit D水平与骨密度呈明显正相关,说明Vit D缺乏与低骨密度关系密切。因此,及时有效补充Vit D对Vit D缺乏性佝偻病患儿骨密度的恢复有积极的促进作用。

本研究结果表明,观察组患儿外周血T淋巴细胞亚群(CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+)占比及 CD4+/CD8+比值均显著低于对照组(P＜0.05),经Pearson相关性分析,观察组血清25(OH)D水平与CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+占比及CD4+/CD8+比值均呈显著正相关(P＜0.05),提示Vit D缺乏性佝偻病患儿存在T淋巴细胞亚群占比异常较低现象,且25(OH)D缺乏与机体细胞免疫水平低下有关。T淋巴细胞是机体外周血中重要的免疫细胞,根据其表面CD分子表达不同存在CD3+、CD4+、CD8+亚群,各亚群处于动态平衡时可维持机体正常细胞免疫水平[12]。研究证实[13],淋巴细胞表面大分子物质的表达与钙磷代谢有关,钙磷代谢异常可导致机体多种生物反应异常,如通过影响氧化磷酸化反应而抑制环磷酸腺苷(c A MP)生成,而c A MP是调节细胞免疫反应的关键物质。研究发现[14],T淋巴细胞表面存在1,25-二羟维生素D3受体,Vit D缺乏可导致1,25-二羟维生素D3供应不足,淋巴细胞表面受体与之结合减少,进而影响相应细胞因子合成和分泌,最终影响机体免疫应答反应。另外,Vit D缺乏可影响锌(Zn)平衡,Vit D缺乏性佝偻病患儿多存在Zn缺乏,因此可导致DNA或RNA代谢相关酶的合成障碍,进而影响淋巴细胞功能[15-16]。因此,血清25(OH)D水平及T淋巴细胞数量在Vit D缺乏性佝偻病患儿疾病发展过程中有重要作用。

综上所述,Vit D缺乏性佝偻病患儿存在血清25(OH)D水平、骨密度及T淋巴细胞亚群占比异常较低现象,且血清25(OH)D缺乏与骨密度和机体细胞免疫水平低下有关。提示临床中可通过检测血清25(OH)D水平综合评估Vit D缺乏性佝偻病患儿的免疫功能,并制定有效干预措施加强预防和保健。