IFA法对病原体IgM联合检测在成人呼吸道感染中的诊断价值

高 莹

(湖北省武汉市中医医院检验科 430000)

呼吸道感染是一种最常见的感染性疾病，根据其感染部位可将其分为上呼吸道感染及下呼吸道感染[1]。呼吸道感染患者多有咳嗽、咳痰等呼吸道症状，但患者临床表现仍具有个体差异性，且不同病原体感染的患者临床表现亦不同。目前研究表明，呼吸道感染主要以病毒感染为主，支原体和细菌感染亦可导致其发生感染[2-3]。因此，感染病原体多样性导致该病的临床治疗具有难度，及早有效地诊断将为患者的治疗赢取时间，降低患者疾病进展的可能性。且近年来不断有文献报道[4-6]，我国抗菌药物滥用情况严重，耐药情况严峻，临床治疗中须提高抗感染用药的针对性。有研究表明，呼吸道感染病原体主要有：腺病毒(ADV)、肺炎衣原体(CPn)、甲型流感病毒(IFVA)、乙型流感病毒(IFVB)、肺军团菌(LP1)、肺炎支原体(MP)、副流感病毒(PIVs)、Q热立克次体(QFR)及呼吸道合胞病毒(RSV)[7-8]。本研究采用间接免疫荧光法(IFA)进行病原体IgM联合检测，旨在探讨其在成人呼吸道感染诊断中的应用价值，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2014年7月至2017年8月在本院检验科行呼吸道感染全套检查的成年患者594例。其中男260例，女334例；年龄19～98岁，平均(59.39±7.84)岁；患者送检前均进行抗菌及抗病原体治疗，且本研究经本院医学伦理委员会批准进行。

1.2方法 所有研究对象均抽肘静脉血2～3 mL，常规离心后取血清25 μL，并用25 μL磷酸盐缓冲液(PBS)进行稀释待用。检测前先将取150 μL吸附剂于离心管，加入30 μL稀释后的血清后用移液枪吹打混匀，而后进行高速离心后待用，13 000 r/min，离心10 min。取高速离心后血清15 μL于载玻片孔中，而后将其放入湿盒中固定90 min，温度控制为37 ℃。固定完成后将玻片放入PBS浸润的容器中，并放于摇床摇动10 min。而后用蒸馏水缓慢冲洗并风干，加入异硫氰酸荧光素(FITC)15 μL后再次放入湿盒中，湿盒条件不变，时间控制为30 min。再次重复PBS冲洗操作后风干并封闭玻片，用荧光显微镜观察染色情况，视野调至400倍。记录每个患者感染病原体类型并进行统计分析。

1.3观察指标 所有患者呼吸道病原体检测结果；呼吸道病原体合并感染发生情况；易感染病原体在不同年龄段患者中的感染情况。

1.4统计学处理 采用SPSS23.0软件进行分析。计数资料采用百分数表示，组间比较采用χ2检验；以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1呼吸道病原体检测结果 呼吸道病原体检测显示，594例研究对象中共有208例呼吸道病原体阳性表达，总阳性率为35.02%。MP、IFVB、PIVs和IFVA的阳性率明显较高，分别为16.16%(96/594)、13.13%(78/594)、9.60%(57/594)、7.07%(42/594)，其他病原体感染率由高到低分别为RSV[2.36%(14/594)]、ADV[1.35%(8/594)]、LP1[0.67%(4/594)]、CPn[0.17%(1/594)]、QFR[0.00%(0/594)]。

2.2两种呼吸道病原体合并感染发生情况 对伴有两种呼吸道病原体感染的患者数进行统计显示，合并两种呼吸道病原体感染共53例，阳性率为8.92%，在所有研究对象中所占比例为25.48%；其中“IFA+IFB”“IFB+PIV”“IFB+MP”和“MP+PIV”阳性率明显高于合并其他两种呼吸道病原体感染率，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表1。

2.33种呼吸道病原体合并感染发生情况 对合并有3种呼吸道病原体感染的患者数进行统计显示，合并3种呼吸道病原体感染共25例，阳性率为4.21%，在所有研究对象中所占比例为12.02%；其中“IFA+IFB+MP”“IFA+IF+PIV”“IFB+MP+PIV”阳性率明显高于合并其他3种呼吸道病原体感染阳性率，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表2。

2.4易感染病原体在不同年龄组患者中的感染情况 通过对各年龄段主要呼吸道病原体IFVA、IFVB、MP及PIVs的统计分析显示，随着年龄的增长，这4种病原体的感染率增加，且>18～30、>30～40岁年龄组的患者IFVB、MP及PIVs的感染率明显更高，>18～30岁年龄组患者IFVA感染率高于其他各组感染率，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表3。

表1 两种呼吸道病原体合并感染发生情况(%)

注：与IFVA+IFVB比较，*P<0.05；与IFVB+PIV比较，#P<0.05；与IFVB+MP比较，&P<0.05；与MP+PIV比较，△P<0.05

表2 3种呼吸道病原体合并感染发生情况(%)

注：与IFVA+IFVB+MP比较，★P<0.05；与IFVA+IFVB+PIV比较，◆P<0.05；与IFVB+MP+PIV比较，□P<0.05

表3 易感染病原体在不同年龄段患者中的感染情况[n(%)]

注：与>18～30岁年龄组比较，☆P<0.05；与>30～40岁年龄组比较，◎P<0.05

3 讨 论

呼吸道作为人体与外界进行气体交换的重要场所，是人体生命活动的基本保证，当其发生炎症时可刺激炎症部位组织分泌炎性介质而产生咳痰等相应症状，且患者呼吸功能可受到显著影响，若不能得到及时治疗患者病情可进一步加重[9-10]。呼吸道感染的主要病原体为病毒和支原体，其主要传播途径为飞沫传播或污染物接触传播。有文献报道，随着我国人口的不断增加和城市人口的密集化，呼吸道感染疾病的发病率呈明显上升的趋势[11-12]。由于其传播速度较快，及早预防和有效地诊断治疗对疾病传播情况的控制和患者疾病治疗均有重要意义。且近年来不断有文献报道，MP、CPn等非典型性病原体引起的呼吸道感染发病率逐年上升，患者可在无明显诱因情况下出现高热[13-15]。既往我国对抗菌药物用药限制较小，临床对非典型性呼吸道感染患者的用药主要是多种药物联合治疗，使得抗菌药物使用频率大大增加，加剧了病原体耐药的发展。因此，及早诊断呼吸道感染患者的病原体类型将有利于对患者进行针对性的抗感染治疗，一方面降低了抗菌药物耐药发生的可能性，另一方面也减少了患者经济压力，提高患者临床治疗效果。

目前，临床上主要诊断呼吸道感染病原体的方法有病原体分离培养、电镜检测、PCR及免疫荧光检测，其中病原体分离培养是既往诊断的金标准，但是其检测时间过长且检测率较低；电镜检查的准确度较高，但是其检测条件较高，且检测费用昂贵；PCR检测是一种新型的检测方式，但是由于其对检测实验室具有较高要求，且目前尚不能全部检测常见的几种病原体。免疫荧光检测是一种借助荧光显微镜对病原体进行观察检测方法，免疫荧光技术最早在临床上应用是直接在镜下观察病原体形态，并对结果进行诊断，但此种方法与常规镜下观察的区别度不大，对呼吸道病毒的诊断具有较大难度。采用IFA法进行病原体IgM检测是将病原体抗体IgM进行荧光素分子偶联后再进行细胞孵育，当检测物中含有某病原体时，荧光标记的IgM抗体可特异性结合抗原，利用荧光显微镜进行镜下观察即可通过其偶联荧光蛋白的颜色进行病原体类型的判断。由于抗原抗体的反应具有特异性，IFA法检测病原体IgM的准确度可大大提升，通过联合多种病原体IgM进行检测即可有效诊断呼吸道病原体的类型。

本研究利用IFA法进行病原体联合检测，对呼吸道感染最常见的ADV、CPn、IFVA、IFVB、LP1、MP、PIVs、QFR及RSV共9种病原体进行联合检测，研究结果显示，594例检查对象中呼吸道病原体阳性表达率高达35.02%，且MP、IFVA、IFVB和PIVs的阳性率明显较高。合并两种呼吸道病原体感染共53例，阳性率为8.92%，在所有阳性患者中占比25.48%；“IFA+IFB”“IFB+PIV”“IFB+MP”及“MP+PIV”阳性率明显高于合并其他两种呼吸道病原体的阳性率，差异均有统计学意义(P<0.05)。合并3种呼吸道病原体感染共25例，阳性率为4.21%，在所有阳性患者中占比12.02%；其中“IFA+IFB+MP”“IFA+IFB+PIV”及“IFB+MP+PIV”阳性率明显高于合并其他3种呼吸道病原体感染的阳性率，差异均有统计学意义(P<0.05)。通过对患者临床资料分析显示，随着年龄的增长，IFVA、IFVB、MP及PIVs 4种病原体的感染率增加，且IFVB、MP及PIVs的感染率在>18～30、>30～40岁年龄组患者中较高，IFVA感染率在>18～30年龄段患者中最高，与既往成人呼吸道感染诊断情况相符[16-17]。

综上所述，采用IFA法对病原体IgM进行联合检测能有效诊断成人呼吸道感染类型，有利于临床对成人呼吸道感染病原体的分析，值得在临床推广应用。