一例鸡新城疫继发大肠杆菌的诊治

唐娟 刘华栋 陆冰洋 李婷婷 王彩先 丁树荣 詹丽娥

摘要：针对山西清徐县某养鸡场发生的雏鸡死亡且死亡率不断升高的情况，笔者通过观察发病鸡的临床症状、病理剖检变化，采集组织样品进行分离培养、鉴定培养、染色镜检、生化试验等，并对分离菌使用K-B试纸扩散法进行药敏试验，采集组织样品使用新城疫的RT-PCR方法进行检测。结果表明分离菌为大肠杆菌，药敏试验可见其对庆大霉素、氧氟沙星、阿米卡星等药物敏感。PCR扩增出特异性的条带，确定有新城疫病毒感染。针对这种情况采用疫苗和敏感药物联合使用，病情得到有效控制。

关键词：新城疫;大肠杆菌;K-B试纸扩散法;RT-PCR

清徐县某鸡场于2018年4月26日发生疫病，42日龄的雏鸡出现死亡情况，而且死亡率迅速升高。该鸡场养殖此日龄的雏鸡200余只。经过3d时间，死亡达到30余只，场主带了4只刚死亡的雏鸡和2只发病的活雏鸡到笔者研究室进行疾病诊断。

1临床症状

病鸡精神沉郁，缩头呆立、闭眼、对刺激反应迟钝，饮食废绝，拉黄绿色的稀便。有一只出现角弓反张的神经症状。

2病理变化

通过对病鸡和死鸡进行剖检，可见肝脏和心脏外边有纤维素性沉淀物，呈现出“包心包肝”的表现;气囊浑浊;腺胃乳头有散在的出血点，乳头略有肿大，腺胃和肌胃的交界处也有出血点;脾脏肿大，表面有白色的坏死点;十二指肠有分布不均的出血点，两侧盲肠扁桃体出血，直肠呈弥漫性出血。

3实验室检测

3.1病原分离培养

从剖检鸡的心脏和肝脏采样，无菌划线接种于营养琼脂。经37℃恒温培养24h，在琼脂上可见有表面光滑、略微隆起的白色圆形的中等大小的菌落。挑取单个菌落接种于S.S琼脂、麦康凯琼脂、伊红美蓝琼脂和三糖铁斜面穿刺。置于37℃恒温培养24h。结果如图1、2、3、4。

由图1、2、3、4结果可见，在S.S琼脂上仅有少量的红色的菌落，麦康凯琼脂上形成红色菌落，伊红美蓝琼脂上形成黑色带金属光泽的菌落，三糖铁斜面产气变色。

3.2病原镜检

挑取单个菌落固定于载玻片上，经革兰氏染色，镜检观察。结果如图5，可见分离菌为红色的短小杆菌。

3.3生化鉴定

将纯培养的病原菌进行生化鉴定，结果可见分离菌能够分解甘露醇、蔗糖、乳糖、麦芽糖、木糖、鼠李糖等，能够分解葡萄糖产酸产气，山梨醇产酸不产气。吲哚试验、M.R.试验、精氨酸脱羧酶、赖氨酸均为阳性，硫化氢、尿素酶、V-P试验、枸橼酸盐、硝酸盐还原等均为阴性，从而可以判定分离菌为大肠杆菌。

3.4药敏实验

试验采用K-B试纸扩散法，使用灭菌后的棉签蘸取纯培养的大肠杆菌菌液，均匀涂布于营养琼脂平板，使用灼烧后的镊子取药敏纸片贴于琼脂表面，纸片相互间隔在24mm。37℃培养24h后观察结果。以标准质控菌株ATCC25922作参照。结果判定参照CLSI手册。本次选用26种常见药物进行试验，结果见表1。

由表1可知，大肠杆菌分离株对粘杆菌素、磷霉素中敏，庆大霉素、氧氟沙星、阿米卡星高敏，其他药物均不敏感。

3.5 PCR鉴定

从发病鸡的肺脏、肝脏、脾脏等器官各取样1g，剪碎混匀后取0.05g研磨，加入1mL生理盐水继续研磨混匀后，8，000rpm离心后取上清进行RNA的提取、反转录和PCR扩增，使用北京世纪元亨公司生产的新城疫病毒通用型RT-PCR检测试剂盒。使用1%的琼脂糖凝胶电泳检测扩增结果，结果如图6。

由图6結果可见，能够在样品中扩增出特异性大小的条带，与阳性对照一致。

4诊断

根据病鸡的临床症状、病理剖检以及实验室检测结果，病鸡可以诊断为新城疫继发大肠杆菌病。5治疗

针对临床分离到的病原和药敏实验结果，鸡群使用新城疫IV系疫苗4倍量饮水紧急免疫。使用高敏感药物庆大霉素拌水治疗大肠杆菌感染，同时对已发病的病鸡予以淘汰并无害化处理。养殖场提高饲养管理水平，加强清扫和消毒工作。经过5d的治疗，未有新发生和死亡病鸡，鸡群恢复正常。

6讨论

随着养殖业的发展，养殖场对新城疫的免疫越来越重视，尤其是在大规模现代化的养殖场，新城疫免疫较好。但是散养户和一些小规模的养殖场还存在免疫不到位的情况，导致新城疫不断地发生。病毒也在不断地变异中，出现强毒株和超强毒株，基因VII型强毒株也逐渐成为当前新城疫流行的主要基因型，严重危害养鸡业的发展。经过与养殖场管理人员的沟通，得知本例鸡场属于农村传统养殖模式下的半散养状态，未免疫过任何疫苗，饲养管理水平低下，缺乏科学的养殖理念，导致此次新城疫感染。

大肠杆菌作为养殖业常见的一种致病菌，能够引起人和多种动物的感染和发病。尤其是在病毒感染后很容易继发感染，增加了鸡的发病率和死亡率。针对大肠杆菌，养殖场通常是定期在饲料中添加一些抗菌药物进行预防和治疗，在使用过程中不进行轮换用药，这是导致大肠杆菌耐药性的一个重要原因。由于不断出现耐药菌株，就需要在临床防治疾病过程中进行药敏试验，本例鸡场在发病后并未进行药敏试验，而自主购买了氟苯尼考进行治疗，没有效果，这与实验室检测中药敏试验结果相同。