8%呋虫胺·苯醚甲环唑悬浮种衣剂的HPLC分析

郭明程，王晓军，聂东兴，张 楠，何 静，杨 峻

（农业农村部 农药检定所，北京 100125）

呋虫胺是由日本三井化学株式会社研发的第三代新烟碱类杀虫剂。其主要作用于昆虫烟碱乙酰胆碱受体，通过影响昆虫的神经传递系统引起害虫麻痹从而发挥杀虫作用。呋虫胺主要用于水稻、玉米、小麦、蔬菜和果树等多种作物上的飞虱、蚜虫、蝽象、潜叶蝇、粉虱、蓟马等害虫防治[1-3]。苯醚甲环唑是由瑞士汽巴-嘉基公司开发的三唑类内吸性杀菌剂，其通过抑制细胞壁甾醇的生物合成，阻碍半知菌、担子菌和子囊菌等真菌的生长。苯醚甲环唑杀菌广谱，可用于叶面处理或种子处理，能有效提高作物的产量和品质[4-6]。二者复配制得的8%呋虫胺·苯醚甲环唑悬浮种衣剂，适用于水稻、小麦、玉米、花生和大豆等作物种子处理，处理种子时既可机械操作，也可人工拌种。其满足不同生产层次的需要，推广应用前景广阔[7]。目前，有关呋虫胺、苯醚甲环唑复配制剂的高效液相色谱分析方法尚未见报道。本文采用反相高效液相色谱法测定8%呋虫胺·苯醚甲环唑悬浮种衣剂中有效成分，方法快速、简便，准确度和精密度高，适用于该制剂的检测分析。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

1.1.1 仪器

Agilent 1260高效液相色谱，带可变波长紫外检测器和自动控温进样器；色谱柱：Venusil XBP-C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；过滤器：过滤膜孔径约0.45 μm；离心机；超声波清洗器。

1.1.2 试剂

乙腈（色谱纯）；超纯水；呋虫胺标样（99.0%）、苯醚甲环唑标样（99.0%），农业农村部农药检定所提供；8%呋虫胺·苯醚甲环唑悬浮种衣剂（5%呋虫胺＋3%苯醚甲环唑）。

1.2 高效液相色谱操作条件

流动相：V（乙腈）∶V（水）=85∶15；柱温：25℃；流速：0.5 mL/min；紫外吸收波长：270 nm；进样量：20 μL。

以上操作条件系典型操作参数，可根据不同的仪器特点，对给定的操作参数进行适当调整，以期获得最佳的分离效果。

1.3 测定步骤

1.3.1 标样溶液的配制

分别称取呋虫胺标样0.01 g和苯醚甲环唑标样0.01 g（精确至0.000 2 g）于100 mL容量瓶中，用80 mL乙腈溶解，超声助溶10 min，使标样完全溶解。冷却至室温，乙腈定容，摇匀后放于4℃冰箱备用。实验中根据需要用乙腈将储备液稀释为适当浓度的标样溶液。

1.3.2 试样溶液的配制

称取8%呋虫胺·苯醚甲环唑悬浮种衣剂0.01 g（精确至0.000 2 g）于100 mL容量瓶中，用80 mL乙腈溶解，超声助溶10 min。冷却至室温，乙腈定容，摇匀后离心，取上层清液过滤膜。

1.3.3 测定

在上述色谱条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，当相邻2针响应值变化小于1.5%时，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液顺序进样，进行分离与测定。

1.3.4 计算

根据标样溶液和试样溶液中呋虫胺和苯醚甲环唑的峰面积，按下列公式外标法计算试样中呋虫胺和苯醚甲环唑质量分数w（%）。计算公式如下。

式中：A1为标样溶液中呋虫胺或苯醚甲环唑峰面积的平均值；A2为试样溶液中呋虫胺或苯醚甲环唑峰面积的平均值；m1为呋虫胺或苯醚甲环唑标样的质量（g）；m2为试样的质量（g）；P为呋虫胺或苯醚甲环唑标样的质量分数（%）。

2 结果与讨论

2.1 检测波长的选择

呋虫胺和苯醚甲环唑最大吸收波长分别为270 nm和210 nm，在210 nm吸收波长下，样品溶液中的多种杂质均有吸收，产生干扰。因此，为避免杂质干扰和提高检测灵敏度，最终选择270 nm为检测波长。在270 nm波长条件下，呋虫胺、苯醚甲环唑和其他杂质能有效分离，且两组分均有较强的吸收峰。

2.2 流动相的选择

以不同比例的乙腈和水为流动相，采用Venusil XBP-C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）进行分析。当乙腈体积分数降低时，呋虫胺与苯醚甲环唑保留时间延长，色谱峰变宽。经反复测试，乙腈＋水（体积比85∶15）在流速0.4 mL/min时，组分和杂质能较好地分离，且色谱峰对称，分离时间适中，可满足分析需要。在此条件下，呋虫胺保留时间约为3.75 min，苯醚甲环唑保留时间约为5.41 min。典型的呋虫胺、苯醚甲环唑标样及悬浮种衣剂样品的高效液相色谱图见图1、图2。

图1 呋虫胺、苯醚甲环唑标样液相色谱图

图2 8%呋虫胺·苯醚甲环唑FS液相色谱图

2.3 线性相关性测定

将呋虫胺和苯醚甲环唑配制成系列质量浓度的标样溶液，按上述色谱操作条件测定其峰面积，每浓度测定2次，取平均值。以质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标作图，得线性回归方程和相关系数。呋虫胺线性回归方程为y=133.35 x-6.855 8（R2=0.999 7）；苯醚甲环唑线性回归方程为y=254.30 x-0.488 8（R2=0.999 9）。方法的线性关系良好，具有较好的定量线性关系。

2.4 方法的精密度测定

从同一8%呋虫胺·苯醚甲环唑悬浮种衣剂中称取5份试样，测定呋虫胺和苯醚甲环唑的质量分数，考察定量分析方法的精密度，并计算其标准偏差和变异系数（见表1）。结果表明，呋虫胺和苯醚甲环唑的标准偏差分别为0.069和0.036，变异系数分别为1.32%和1.18%，均低于CIPAC（国际农药分析协作委员会）规定的要求（＜1.71%）。

表1 8%呋虫胺·苯醚甲环唑悬浮种衣剂精密度测定结果

2.5 方法的准确度测定

在已知含量的8%呋虫胺·苯醚甲环唑悬浮种衣剂试样中，分别加入一定量呋虫胺和苯醚甲环唑标样溶液，按上述色谱操作条件进行5次重复测定，结果见表2。呋虫胺的回收率为97.75%～102.68%，平均回收率为99.68%；苯醚甲环唑的回收率为98.72%～102.12%，平均回收率为100.76%。

表2 8%呋虫胺·苯醚甲环唑悬浮种衣剂回收率测定结果

3 结论

以Venusil XBP-C18反相柱为分离柱，乙腈＋水（体积比85∶15）为流动相，270 nm为检测波长，测定8%呋虫胺·苯醚甲环唑悬浮种衣剂中有效成分质量分数。方法操作简便，分离度高，线性关系良好，且具有较高的精密度和准确度，适用于该制剂的质量检测。