UPLC法同时测定饮料中甜味剂和防腐剂的研究

赵耀　赵卉　张婷婷

摘要：为快速分离饮料中的6种甜味剂和防腐剂（安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸、阿斯巴甜），采用超高效液相色谱方法，选用PDA检测器在230 nm和210 nm进行检测。试验结果表明：防腐剂在0.5～10.0 mg/L浓度范围内线性关系良好，安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸定量限为2 mg/kg，阿斯巴甜定量限为10 mg/kg，回收率95.2%～102.2%。

关键词：UPLC；防腐剂；试验；甜味剂；分离

中图分类号：TS207.5 文献标识码：A 文章编号：1674-1161（2018）01-0059-03

防腐剂和甜味剂在食品中的应用广泛，其中安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸、阿斯巴甜的应用非常普遍。为保障食品安全，我国《GB2760-2014食品安全国家标准食品添加剂使用标准》中对防腐剂、甜味剂等添加剂的使用限量有明确规定。目前，国内外的防腐剂多组分检测方法主要有高效液相色谱法、液相色谱-质谱法、离子色谱法、气相色谱法，部分防腐剂因前处理条件不同而分析效率较低。为改善分析速度及分离度，采用超高效液相色谱方法，通过改变试验条件分离赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸、阿斯巴甜等6种添加剂，为快速准确检测上述添加剂提供技术依据。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

Waters ACQUITY H-class UPLC超高效液相色谱仪（配二极管阵列检测器）：美国waters公司；色谱柱：Waters Symetry RP18 （2.1 mm ×100 mm，1.7 μm）；电子天平：北京赛多利斯仪器系统有限公司；超纯水制备系统：美国Milli-Q公司。

安赛蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸、阿斯巴甜标准品由中国计量科学研究院生产；甲醇（质谱纯）由美国麦克林公司生产；乙酸铵（色谱纯）由国药集团有限公司生产；色谱用水为符合《GB/T6682-2008》规定的一级水。

1.2 试验方法

1.2.1 样品前处理 准确称取样品2 g（精确至0.01g），置于离心管中，加水25 mL，涡旋混匀后于50 ℃水浴超声20 min。冷却至室温后加入亚铁氰化钾溶液2 mL和乙酸锌溶液2 mL，涡旋混匀后于8 000 r/min离心5 min，将水相转移至50 mL容量瓶中。残渣加水20 mL溶解，涡旋后超声5 min，离心后将水相转移至同一容量瓶，用水定容，混匀。取适量上清液过0.22 μm的GHP滤膜，待测定。

1.2.2 色谱条件 流动相：乙腈及水（含有20 mm乙酸铵和0.1%乙酸溶液）梯度洗脱，流速：0.3 mL/min，柱温：35 ℃。检测波长：在190～400 nm 之间进行全波长扫描，确定安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸检测波长为230 nm，阿斯巴甜检测波长为210 nm。

为实现6种添加剂完全分离，梯度洗脱设计如表1所示。

在以上色谱条件下进样0.8 μL，以色谱峰面积外标法定量，测得6种添加剂的色谱图，如图1所示。

1.2.3 标准曲线 防腐剂标准溶液均为中国计量科学研究院生产，浓度为1 000 mg/L，扩展不确定度为

±1%～±2%，符合配制要求。标准样品储存条件满足证书要求，且在有效期范围内。

分别吸取上述标准溶液0.05，0.10，0.20，0.40，

1.00 mL于100 mL容量瓶中，用水定容至刻度，配成浓度为0.5，1.0，2.0，4.0，10.0 mg/L的混合标准工作溶液。经Waters GHP 0.22 μm滤膜过滤，在1.2.2色谱条件下进样0.8 μL，根据浓度与峰面积的关系绘制标准曲线。

1.2.4 方法回收率及精密度 为考察方法的可靠性，对6种添加剂进行加标回收率试验。将加标量定为10 mg/kg及20 mg/kg的样品按照1.2.1 提取方法提取6份，计算回收率及精密度。

2 结果与分析

2.1 线性范围及检出限

检测结果中，色谱峰高为噪声高3倍（S/N=3）相对应的浓度为检出限。线性方程、相关系数、线性范围及检出限见表2。

从表2可以看出，6种添加剂在线性范围内的线性关系良好。

2.2 方法回收率及精密度

以饮料用品为例，通过加标回收率试验，对方法进行回收率和精密度测定，结果见表3。

由表3可知：6种添加剂的平均回收率为95.2%～102.2%，相对标准偏差为1.25%～3.74%（n=6）。表明该方法精密度、准确度均能满足分析要求。

3 结论

在国家标准中，对安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸、阿斯巴甜共6种添加剂的检测需要4种方法（GB 5009.28-2016、GB5009.121-2016、GB5009.263-2016、GB5009.140-2016），而该方法可一次完成6种食品中添加剂的检测，且在0.5～10.0 mg/L线性范围内，相关系数R2>0.999。安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸的方法定量限为2 mg/kg，阿斯巴甜的定量限为10 mg/kg，回收率为95.2%～102.2%，相对标准偏差为1.25%～3.74%。另外，方法操作简便、分析速度快，仅需2.8min即可将6种添加剂全部分离，基线分离明显，且回收率及精密度满足《GB/T 27404-2008 实验室质量控制规范 食品理化检测》要求。

参考文献

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