高效液相色谱仪测定烘培食品中脱氢乙酸

魏富梅 朝阳市疾病预防控制中心理化检测所 （辽宁 朝阳 122000）

内容提要： 目的：分析探讨采用高效液相色谱仪用于测定烘培食品中脱氢乙酸的方法和效果。方法：对面包、蛋糕、桃酥、酥饼、蛋卷、饼干6种烘焙食品中的脱氢乙酸含量采用高效液相色谱仪测定，色谱柱：Diamonsil 5μm，C18(2)4.6mm×250mm，流动相：乙腈：磷酸二氢钾溶液（0.02mol/L）=(40+60)，流速：1mL/min，柱温：40˚C，检测波长：293nm。结果：标准曲线线性方程Y=2.295×104C-0.643×104，测定浓度范围为10～100μg/mL，相关系数0.999，检出限1.80μg/mL。脱氢乙酸平均回收率95.32%～98.49%，标准偏差1.73%～1.22%。同种样品下，本方法下检出的结果明显高于国标法，平均回收率也显著更高（P＜0.05）。结论：采用该方法检测烘焙食品中的脱氢乙酸不仅方便快速，同时检测效果好，线性范围宽，可满足检测要求。

烘焙食品中，脱氢乙酸为常用的一种防腐剂，我国GB2760-2011标准中对其使用量和范围都做出了严格的规定，因此，检测烘焙食品中的脱氢乙酸含量对于保障食品安全具有重要的意义。当前主要采用高效液相色谱法、气相色谱法进行脱氢乙酸含量的检测，首先提取食品样品的脱氢乙酸水溶液，然后采用色谱仪对提取液的分离、定性与定量分析[1]。大量的试验结果显示，由于烘焙食品的基质比较复杂，样品前处理也比较复杂，导致液相色谱法检测时间需要17min左右，灵敏度较低。为了探讨烘焙食品中更好的提取脱氢乙酸的方法，在简化样品前处理的同时保证实验准确度，提高检测灵敏度，本次实验对6种烘焙食品中的脱氢乙酸含量采用高效液相色谱仪测定，并进行相应的优化，现将实验结果报告如下。

1.材料与方法

1.1 主要仪器与试剂

①高效液相色谱（仪），采用日立L-2000型，配有紫外检测器；分析天平，精密度0.1mg；料理机；②乙腈（色谱纯），磷酸二氢钾溶液（分析纯），脱氧乙酸标准品（色谱纯）。磷酸二氢钾溶液：浓度0.02mol/L，配制：称取磷酸二氢钾2.4g，加超纯水至1000mL，溶解完全后采用0.45μm滤膜过滤。

1.2 色谱条件

色谱柱：Diamonsil 5μm，C18(2)4.6mm×250mm；流动相：乙腈：磷酸二氢钾溶液（0.02mol/L）=（40+60）；流速：1mL/min；柱温：40˚C；进样体积：10μL；检测波长：293nm；检测器：紫外检测器L-2400。

1.3 溶液配制

①配制标准贮备液：精密称取100mg脱氢乙酸，并将其置入到容量瓶中（100mL容量瓶），然后加入5mL超纯水+5mL乙腈溶液溶解并稀释，定容至100mL，摇匀，制备获得标准贮备液，浓度为1000μg/mL；②配制标准溶液：精密量取标准贮备液（1mL、2mL、4mL、8mL和10mL），并置入容量瓶中（100mL容量瓶），然后加入5%乙腈稀释贮备液至100mL定容，获得系列标准溶液（浓度依次为10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL、100μg/mL）[2]。吸取10μL各浓度标准液，并采用高效液相色谱仪检测脱氢乙酸含量。

1.4 试验样品的前处理

使用料理机先将面包、蛋糕、桃酥、酥饼、蛋卷、饼干6种烘焙样品粉碎，然后分别称取10g样品，加水溶解并定容至100mL，充分振荡摇匀后静置30min，然后过滤收集到三角瓶中，采用0.45μm滤膜对水溶液再次过滤，检测时，吸取样品溶液10μL加入高效液相色谱仪自动检测分析[3]。

1.5 统计学分析

本方法与国标法检测下的结果采用SPSS19.0软件，进行t检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2.结果

2.1 本方法与国标方法的检测比较

国标法中的样品溶液制备操作步骤较繁琐，必须要经过一系列的净化操作，因此需要较多的时间，并且固相、液液的萃取还将可能对回收率和稳定性造成影响，因此本次研究中，样品贮备液直接采取水充分浸泡后提取，这种方式下可让脱氢乙酸较好的溶解。国标法中流动相为甲醇-0.02mol/L乙酸铵（10:90），本方法采用的是乙腈：磷酸二氢钾溶液（0.02mol/L）=（40+60），流速：1mL/min；柱温：40˚C，适用于面包、蛋糕、桃酥、酥饼、蛋卷、饼干6种烘焙食品中脱氧乙酸的分离。

2.2 标准曲线与最低检出限

实验条件下，以峰面积Y为纵坐标，质量浓度C为横坐标绘制标准曲线，获得线性方程Y=2.295×104C-0.643×104，测定浓度范围为10～100μg/mL，相关系数0.999，检出限1.80μg/mL。

2.3 本试验方法与国标法的精密度、加标回收率比较

将空白样进行加标回收试验，即分别称取样品10g 6种烘焙食品，然后加入1.2mL 100mg/L脱氢乙酸标准液L（即加标量为12mg/kg），提取样品液并重复4次，按照色谱条件测定，计算精密度与回收率，结果见表1。同时按照国标法对6种样品进行回收，计算国标法的精密度与回收率，结果具体见表2。根据检测结果显示，本方法中，6种烘焙食品的脱氢乙酸平均回收率最低为95.32%，最高为98.49%，标准偏差在1.73%～1.22%，结果满足要求。同种样品下，本方法下检出的结果明显高于国标法，平均回收率也显著更高（P＜0.05）。

表1.本方法下6种样品加标回收率

表2.国标方法下加标回收率

3.讨论

烘焙食品中的脱氢乙酸含量检测对于食品安全具有重要的意义，由于烘焙食品中含有大量的淀粉、蛋白质、油脂和糖类，前处理比较复杂，对脱氢乙酸含量的测定造成影响，国标法中对此做出了规定，但实际检测结果显示检测结果仍然存在一定的偏差[4]。本实验建立了高效液相色谱法，流动相采用乙腈：磷酸二氢钾溶液（0.02mol/L）=（40+60），流速：1mL/min；柱温：40˚C，替代了国标法中的甲醇-0.02mol/L乙酸铵（10:90），提高了分离速度，提高了效率，用于烘焙食品脱氢乙酸检测较为适合，脱氢乙酸平均回收率达到95.32%～98.49%，标准偏差1.73%～1.22%，显著优于国标法的平均回收率。在实际检测工作中具有较高的参考价值。