依据CLSl EP9-A2对两种降钙素原检测系统进行方法学比对和偏差分析

郑秀娥 李晋 夏文龙 于素芳

1 山东省食品药品监督管理局审评认证中心 （山东 济南 250014）

2 山东省疾病预防控制中心 （山东 济南 250014）

3 山东大学公共卫生学院 （山东 济南 250012）

内容提要： 目的：通过对两种降钙素原（PCT）检测系统进行方法学比对和预期偏差评估，探讨不同检测系统间PCT检测结果是否具有可比性和检测结果的偏差是否在允许范围内。方法：参照美国临床实验室标准化协会（CLSI）EP9-A2文件要求，Roche-e601全自动电化学发光免疫分析检测系统作为参考方法，Mlabs-m-101型定量免疫荧光检测系统作为比对方法，对患者血清PCT进行检测，计算相关系数和直线回归方程，评估两种检测系统之间的预期偏差。结果：两种检测系统所得的结果相关性良好（r=0.998，P＜0.05），医学决定水平处的系统误差（SE%）为10.8%，在可接受范围内。结论：两种检测系统PCT结果具有可比性，能够满足临床检测要求。

降钙素原（Procalcitonin，PCT）是严重细菌感染/脓毒症鉴别诊断的观察指标之一，可辅助临床快速鉴别细菌感染和病毒感染，判断细菌感染严重程度，是一种新的炎症介质。它是一种无激素活性的降钙素（CT）前肽物质，通常由甲状腺的髓质细胞分泌，其不会降解为降钙素，亦不受体内激素水平的影响，半衰期为25～30h。在细菌内毒素等细胞因子诱导下，随着感染严重程度逐渐增加，PCT水平也明显升高，经抗生素治疗后，PCT水平迅速下降，并与患者的预后相关[1]。近年来，快速检测PCT的仪器得到普遍应用，具有操作简单、不依赖大型设备，快速、即时的特点。但这类快速检测仪器的检测结果与检验科大型仪器能否保持一致性，需要进一步验证。本文对Roche-e601全自动电化学发光免疫分析检测系统和Mlabs-m-101型定量免疫荧光快速检测系统检测人血清PCT的结果进行比较，并进行方法学比对以及偏差评估，探讨两个检测系统是否具有一致性，为临床使用快速检测方法检测PCT提供科学的评估依据。

1.资料与方法

1.1 仪器与试剂

参比系统用仪器：Roche-e601全自动电化学发光免疫分析仪及配套试剂、质控品和校准品；比对系统用仪器：Mlabs-m-101型定量免疫荧光快速检测系统（上海励奥医药咨询有限公司提供）及配套试剂、质控品和校准品。

样本：在Roche-e601全自动电化学发光免疫分析仪进行临床标本检测并得知结果后，分别选取结果分布于不同范围的无溶血、无黄疸的新鲜患者血清，样本个数为40个，各浓度梯度分配比例见表1。

表1.各浓度梯度分配比例

1.2 方法

参照美国临床实验室标准化协会（CLSI）《用患者样本进行方法比对及偏差评估—批准指南》（EP9-A2）[2]的要求，以Roche-e601全自动电化学发光免疫分析系统为参考方法（用Y表示），以Mlabs-m-101型定量免疫荧光快速检测系统为比对方法（用X 表示），按照EP9-A2文件要求测定PCT含量。进行方法学比对以及偏差评估，探讨两个检测系统是否具有一致性。

1.3 数据处理

1.3.1 离群值的检查

①计算每样本双份测定差值的绝对值Dxi和Dyi、差值绝对值的均值Dx’和Dy’、相对差值绝对值Dx，和Dy，和相对差值绝对值的均值（’，和’，），超出上述平均数4倍时为离群值，应剔除。②用两种方法测定分别得出一一对应的2个数值，第1个X与第1个Y的差值记为（Ei1），第2个X与第2个Y的差值记为（Ei2），计算出所有样本总的平均差值（E），以4倍的平均差值作为两仪器间误差的“可接受限”。

1.3.2 数据作图

①以参考方法为Y轴，以比对方法为X轴，以Yi对Xi作图，绘制散点图，目测是否具有线性关系，并计算斜率和截距得出回归方程Y=bX+a；②以Yij对作图，检查两种方法各重复测定结果间的线性关系；③以–对作图，检查两种方法重复测定均值间的差异，反映两种方法间的系统误差；④以Yij–Xij对作图，检查两种方法重复测定均值间的差值。

1.3.3 两方法相关性检验

计算相关系数r，如果r≥0.95，且对r值进行假设检验，P＜0.05则可认为两方法具有良好的相关性。

1.3.4 计算方法间系统误差

根据回归方程，计算得出临床给定PCT的医学决定水平浓度Xc=0.5ng/mL处的预期偏倚，计算参考方法Y与对比方法X 之间的系统误差（SE%）。SE=|Yc-Xc|，SE%=SE/Xc×100%。

1.3.5 判断标准

系统误差SE%＜试剂说明书规定的允许误差T±20%，则临床可接受。

2.结果

2.1 离群值检查结果

Dx’=0.066，控制限为4Dx’，即0.264；Dy’=0.019，控制限为4Dy’，即0.076；，=0.056，控制限为4Dx，即0.226；’=0.05，控制限为4Dy’，即0.2，经比较，无超过控制限的值，故两种方法测定数值均无离群值。

方法间离群点的检查：计算得E为0.185，控制限为4E，即0.74，相对差值E'为0.229，控制限为4E'，即0.916，无超过此范围的值。

2.2 相关性分析和偏倚评估结果

检测结果的相关系数r为0.998，回归方程为Y=1.022X–0.065，从统计图可以看出，Yi始终高于Xi，两方法间结果存在差异，且样本浓度越高，差异越大，但两系统相关性较好。（见图1～4）。

图1.重复测定均值的散点图

2.3 两方法相关性检验

两种方法的相关系数r为0.998，P＜0.05，两系统高度相关。也说明测定范围足够宽，误差的影响可以忽略不计，回归统计的斜率b和截距是可靠的。

图2.各次结果的散点图

图3.重复测定的均值偏差图

图4.各次结果的偏差值

2.4 计算预期偏倚

前述得到的线性回归方程为Y=1.022X-0.065，将PCT的医学决定水平处的浓度值代入回归方程，计算得SE%=10.8%，＜20%，故判定为临床可接受。

3.讨论

本实验参照CLSI EP9-A2的流程对两种检测系统进行了比对，无离群值剔除，且比对结果相关性较好，r=0.998，P＜0.05，SE%＜T±20%，说明两种方法比对结果临床可接受，两个不同系统的检测结果具有一致性。

目前，对不同实验室、不同检测系统检测相同项目进行比对实验非常具有必要性，而比对实验的结果是各实验室、各检测系统间采取整改措施的前提[3]。本实验中两检测系统分别对血清样本进行PCT检测，相关系数＞0.95，P＜0.05，说明两检测系统检测结果具有较好的相关性。本文以靶值±20%作为检测系统可接受性能的评价标准，实验结果显示，Roche-e601全自动电化学发光免疫分析检测系统和mlabs-m-101型定量免疫荧光快速检测系统间，在医学决定水平处的SE%＜20%，能够达到临床性能的要求。另外，快速检测方法由于其不依赖大型设备，快速、即时，临床重症监护室、急诊科、呼吸科、新生儿室等科室经过一定培训之后也可以进行即时检测，这对临床快速诊断有着重要意义。但是方法X （Mlabs-m-101荧光免疫分析仪）测定值普遍略低于方法Y（Roche-e601电化学发光免疫分析仪）测定值，这就需要在临床上判定结果时应参考两系统对应各自试剂的说明书，建立各自的参考值范围，然后做出初步诊断。两种方法间的差异还可能与实验室质量控制情况有关。加强仪器的维护保养、规范实验人员操作、定期进行试剂（包含校准品和质控品）评价等方法有助于减少除方法学差异之外的误差。

近些年，随着人们对抗生素过分的依赖，导致滥用抗生素的现象日益严峻，造成新的多重耐药菌株的产生，这种现象在我国超出国际水平，成为国家风险[4]。如何准确及时诊断感染，抑制抗生素的滥用，减少新的耐药菌株的产生，成为当今世界的热点。血培养作为细菌培养的常用方法，是诊断败血症的金标准，但是血培养的阳性率取决于采血时机、细菌数量的多少等因素；而且检测时间需要3～5d[5]。与血培养相比，PCT检测采用血清进行定量检测，具有快速、简便等优点，可以对细菌、真菌、病毒的早期感染做出及时的辅助诊断、预测，可以在血培养结果之前，为临床早期治疗败血症提供依据。各类研究表明，PCT是细菌感染和脓毒症的良好标记物，PCT浓度的增长反映了从细菌感染前的健康状态到细菌感染的最严重状态（脓毒血症、严重脓毒症、脓毒性休克）的持续发展，呈正相关性。PCT已成为与细菌性感染炎性反应相关的特异性指标，特别成为快速鉴别细菌感染所致的SIRS及脓毒症的重要指标；对于鉴别感染与非感染所致的炎性反应具有重要意义；为指导临床抗菌药物的合理使用，疗效评估及缩短抗菌药物的使用时间带来重要革新[6]。血清PCT具有很高的阴性预测价值，可以减少不必要的抗菌药物使用及抗菌药物耐药性[7]。

本研究结果表明，比对方法Mlabs-m-101型定量免疫荧光快速检测系统能够准确测定血清PCT的含量，同时具有方便、快速的特点，适合POCT开展使用，能够满足临床检测要求且便于在急诊、社区、和基层医疗机构开展，帮助临床科室进行快速诊断与鉴别诊断。