二羟基乙酸盐比色法测定饲料中色氨酸的含量

2018-12-08李永才

农业科技与装备 2018年4期

李永才

摘要：采用二羟基乙酸盐比色法测定饲料中色氨酸的含量。测得色氨酸的RSD为1.89%～3.23%，平均回收率为92.50%～93.40%。该方法所需仪器简单，操作方便，灵敏度较高，测定结果准确，可用于饲料中色氨酸含量的测定。

关键词：二羟基乙酸盐；比色法；色氨酸；饲料

中图分类号：S816.17 文献标识码：A 文章编号：1674-1161（2018）04-0043-02

饲料中的色氨酸是动物维持生命和生长所必需的氨基酸，其含量被用作评价饲料营养品质的重要指标。目前主要采用氨基酸自动分析仪、高效液相色谱、离子交换层析、荧光等方法测定饲料中色氨酸的含量，但上述方法均存在仪器价格昂贵的问题，使其应用受到一定限制。而比色法所需仪器简单、价格便宜，便于普及推广。

1 材料与方法

1.1 原理

在浓硫酸存在下，三价铁离子可将乙酸氧化成二羟基乙酸，二羟基乙酸又与经木瓜蛋白酶水解后从蛋白质中解离出来的色氨酸的吲哚环反应，生成红紫色化合物，其颜色深浅与色氨酸的含量成正比。

1.2 仪器

日立U-3010紫外分光光度计：日本日立公司。

1.3 试剂

1.3.1 0.1 mol/L HAC—NaAC缓冲液（pH 7.0）将0.1 mol/L HAC与NaAC溶液按1∶178混合。

1.3.2 木瓜酶水解液称取400 mg木瓜蛋白酶，放入小研钵中，加少量0.1 mol/L HAC—NaAC缓冲液，充分研磨使其呈匀浆状，转移到100 mL容量瓶中，用HAC—NaAC缓冲溶液冲洗研钵并倒入容量瓶中，最后用HAC—NaAC缓冲液稀释至刻度。

1.3.3 混合显色液将0.03%氯化铁乙酸液与15 mol/L硫酸液于使用前1～2 h等体积混合。

1.3.4 色氨酸标准贮备液准确称取20 mg DL-色氨酸（经105 ℃恒重），加几滴0.1 mol/L氢氧化钠及少量水溶解后，定量转移到200 mL容量瓶中，加水至刻度，混匀，贮于冰箱中。

1.3.5 色氨酸标准工作液分别吸取2.50，3.75，5.00，

6.25，7.50，10.00 mL色氨酸标准贮备液置于25 mL容量瓶中，用pH 7.0的HAC—NaAC緩冲液稀释至刻度，配制成的标准工作液浓度分别为10，15，20，25，30，40 μg/mL。

1.4 测定方法

1.4.1 标准曲线绘制分别精密吸取1 mL各浓度色氨酸标准工作液和1 mL pH 7.0的HAC—NaAC缓冲液（作空白）置于试管中，向各试管中加入5 mL混合显色液，摇匀，放入65 ℃恒温水浴中保温15 min，冷却至室温，于545 nm处测定吸收值，得回归方程为：A=-0.001 39+0.009 45 C，r=0.999 2。

1.4.2 样品测定称取磨碎、混匀的样品100 mg置于试管中，加入5 mL木瓜酶水解液，小心振荡，使样品完全浸湿又无颗粒粘于管壁，放入65 ℃恒温箱中过夜。取出振摇，冷至室温，离心，取1 mL上清夜，加5 mL混合显色液，之后步骤同标准曲线绘制方法，计算得出样品中色氨酸含量。

2 结果与讨论

2.1 样品中色氨酸含量测定结果

8种样品中色氨酸含量的测定结果见表1。

2.2 精密度试验结果

分别对3种样品进行6次重复测定，考察方法的精密度，结果见表2。

由表2可知：该方法测定色氨酸含量的RSD为1.89%～3.23%。

2.3 回收率试验结果

采用加样回收法进行回收率试验，结果见表3。

由表3可知：该方法平均回收率为92.50%～93.40%。

3 结论与讨论

二羟基乙酸盐比色法具有所需仪器简单、操作方便、灵敏度较高、测定结果准确等特点，可用于测定饲料中色氨酸的含量。冰乙酸纯度对该方法测定结果影响较大，宜用优级纯或冰乙酸加高锰酸钾进行蒸馏；色氨酸标准贮备液可用1周，而色氨酸标准工作液应现用现配；脂肪含量大于5%的样品应脱脂，否则测定结果偏低且不规则。