青藤碱注射液关节内注射治疗痛风性关节炎的实验研究※

李元耿 孙 刚 丁 羽 时华南 金盛年

痛风性关节炎主要由于尿酸过多、嘌呤代谢紊乱、排泄障碍等因素引起尿酸浓度升高所致，尿酸浓度升高引起尿酸盐在关节处沉积，造成关节疼痛、肿胀、畸形等。目前，临床上治疗痛风性关节炎主要采用别嘌呤、秋水仙碱、非甾体类消炎药等。尽管上述药物可有效降低患者血液中的尿酸浓度，减轻痛风性关节炎的相关临床症状，但药物副作用较大，限制了其临床应用和推广[1-2]。本实验应用尿酸盐结晶建立家兔痛风性关节炎模型，关节内注射青藤碱注射液等，观察用药后48 h的关节液、炎症细胞计数、关节及周围软组织中白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响、滑膜组织炎症程度，并行软骨病理学检查。筛选疗效最佳的药物，为临床关节镜手术后辅助用药提供指导，现报道如下。

1 材料与方法

1.1实验动物选取健康3个月龄2.2～2.5 kg雄性大耳白兔50只，留空白对照A组10只，剩余兔随机平均分为B、C、D、E实验组，每组10只。实验组建立痛风性关节炎模型，A、B组给予0.2 ml无菌0.9%氯化钠注射液关节腔注射，C组给予0.2 ml玻璃酸钠关节腔内注射，D组给予0.2 ml青藤碱关节腔内注射，E组给予0.2 ml威灵仙关节腔内注射。

1.2痛风性关节炎模型建立大白兔于实验室适应性饲养1周，1周后行以下实验。20%乌拉坦（按5 ml/kg）麻醉大白兔，每只兔双侧膝关节脱毛消毒，各组每只兔右膝关节腔内注射尿酸钠（Sigma公司提供，型号：T0211）、0.9%氯化钠注射液混悬液0.6 ml致炎，观察5 h，5 h后建立急性痛风性关节炎兔模型。

1.3治疗方法A、B组兔给予0.2 ml无菌0.9%氯化钠注射液（四川科伦药业股份有限公司生产，批准文号：国药准字H51021157）关节腔注射；C组兔给予0.2 ml玻璃酸钠（昆明贝克诺顿药品销售有限公司生产，批号：5HD26Z）关节腔内注射；D组兔给予0.2 ml青藤碱（湖南正清制药股份有限公司生产，批准文号：国药准字Z43020279，批号：1706406）关节腔内注射；E组兔给予0.2 ml威灵仙注射液（瓦房店市中心医院中医科配置，含生药为2 g/ml）关节腔内注射。

1.4检测方法药物注射48 h后处死所有大白兔，进行兔膝关节形态学、生化、免疫学及病理学检查。

1.4.1 IL-1β及TNF-α水平检测取兔关节滑膜及周围软组织样本，采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）试剂盒及相关试剂检测大白兔膝关节滑膜及周围软组织IL-1β及TNF-α水平，取关节滑膜、关节周围软组织作为标本，冰浴中将所取标本制作成匀浆，以1∶9与0.9%氯化钠注射液混合，离心机旋转离心（转速每分钟3000 r，离心半径6 cm，离心10 min），取上清液，采用ELISA 法检测IL-1β、TNF-α 水平。

1.4.2病理学检查用手术刀切开兔膝关节，取滑膜和周围软组织为标本，福尔马林固定标本，进行病理学检查。关节软骨病理学检查：完整取出软骨，行HE、Sanfranin-O染色，以光镜观察并行Mankin,s评分，每组各取2份软骨标本，行透射电镜观察。

1.5观察指标观察每组兔关节肿胀程度、关节液白细胞计数（WBC）、膝关节及周围软组织中IL-1β、TNF-α水平。采用Mankin，s评分评估每组兔的病理学组织检查情况[3]，包括软骨结构、软骨细胞、HE染色以及潮线完整性。软骨结构0～3分，软骨细胞0～3分，HE染色0～4分，潮线完整性0～2分，评分越高，病理学情况越差。

1.6统计学分析采用 SPSS 18.0统计软件进行数据处理，计量资料以±s表示，组间比较采用t检验，多组间比较采用方差分析，计数资料以百分率表示，组间比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1各组兔关节肿胀程度、关节液白细胞计数比较B组兔关节肿胀程度及关节液白细胞计数大于C、E组，C、E组大于A、D组，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。见表1。

表1 各组兔关节肿胀程度及关节液白细胞计数情况比较(±s)

表1 各组兔关节肿胀程度及关节液白细胞计数情况比较(±s)

组别 关节肿胀程度(cm) 白细胞计数(×106/L)A组(n=10) 0.2±0.1 1.0±0.1 B组(n=10) 3.0±0.3 5.6±0.1 C组(n=10) 1.7±0.2 2.8±0.2 D组(n=10) 1.3±0.2 2.4±0.1 E组(n=10) 2.0±0.2 3.0±0.1 F值 237.05 1742.50 P值 ＜0.05 ＜0.05

2.2 各组兔膝关节及周围软组织IL-1β、TNF-α水平比较B组兔关节和周围软组织中IL-1β、TNF-α水平高于C、E组，C、E组高于A、D两组，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。见表2。

表2 各组兔膝关节及周围软组织IL-1β、TNF-α水平比较(pg/mgprot,±s)

表2 各组兔膝关节及周围软组织IL-1β、TNF-α水平比较(pg/mgprot,±s)

膝关节 周围软组织组别IL-1β TNF-α IL-1β TNF-α A 组(n=10) 22.6±1.4 38.6±2.5 21.9±1.2 38.2±2.0 B 组(n=10) 94.8±3.2 152.8±6.3 94.2±3.0 151.9±6.0 C 组(n=10) 43.8±2.5 78.9±4.5 43.1±2.1 78.2±4.1 D 组(n=10) 37.5±1.6 69.5±3.8 36.8±1.4 68.5±3.4 E 组(n=10) 54.8±2.3 90.4±4.2 54.0±2.1 89.7±4.0 F值 1413.06 896.89 1756.07 1037.98 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

2.3各组兔病理学组织检查比较A、D组兔软骨结构、软骨细胞、HE染色以及潮线完整性评分比较，差异均无统计学意义（均P＞0.05）；C、E组上述评分比较，差异均无统计学意义（均P＞0.05）；B组兔上述评分明显高于C、E组，C、E组高于A、D组，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。见表3。

表3 各组兔病理学组织检查比较(±s,分)

表3 各组兔病理学组织检查比较(±s,分)

组别 软骨结构 软骨细胞 HE染色 潮线完整性A 组(n=10) 0.4±0.1 0.3±0.1 0.6±0.2 0.3±0.1 B 组(n=10) 2.2±0.5 2.4±0.4 2.6±0.6 1.4±0.3 C 组(n=10) 1.7±0.5 1.5±0.3 1.8±0.5 0.9±0.2 D 组(n=10) 0.6±0.1 0.4±0.1 0.8±0.2 0.4±0.1 E 组(n=10) 1.6±0.4 1.4±0.2 1.8±0.4 0.8±0.2 F值 43.38 121.77 39.53 50.79 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

3 讨论

随着医学的不断发展，显微技术在医学中广泛应用，其中以关节镜为代表的微创技术在临床外科介入治疗中有较好的治疗效果，在治疗痛风性关节炎中起到重要作用。痛风性关节炎患者病变严重时常伴软骨、软组织破溃，单纯药物治疗无法逆转病理过程，适当的外科介入治疗是逆转关节病变的重要措施[4]。然而，关节镜手术有时不能完全清除痛风结石，术后需辅助关节内注射药物以减轻水肿，清除结石，缓解疼痛。目前，临床上治疗急性痛风性关节炎的效果并不理想，缺乏迅速有效的治疗方式[5]。常用药物为玻璃酸钠，部分重症患者可同时采用关节内注射皮质类固醇药物以增强疗效。对痛风性关节炎的理想治疗策略是局部给药，西药目前尚无更好的治疗方法[6]。玻璃酸钠与蛋白质构成软骨表面的不定结构，可减少组织摩擦，起到缓冲作用，防止软骨损伤。此外，关节内补充玻璃酸钠可以改善关节腔内液体环境，形成屏障保护作用，减少疼痛，打破恶性循环。威灵仙具有通利关节宣痹止痛的效果，能促进尿酸排泄，减少膝关节中尿酸盐的沉积，改善关节内环境。尽管玻璃酸钠或威灵仙能改善关节腔内环境，但对于已经发生病变的软骨组织治疗效果并不明显。

中医中痛风的概念不同于西医，中医认为痛风以趾、指关节红肿疼痛，或伴有发热等为主要表现。由于中医中药治疗痛风历史悠久，方法多样，辨证灵活，临床疗效肯定，一般无明显毒副作用。加之我国中药资源丰富，价格低廉。多数学者将疼痛的治疗转向中药上以寻找突破[7-9]。但中药种类繁多、成分复杂，中药治疗痛风性关节炎的研究仍然相对缺乏，治疗作用机制尚未完全明确。

青藤碱是一种中药制剂，临床上主要以盐酸盐的形式入药，具有明显抗炎、降血压、免疫抑制以及抗心律失常等作用[8]。现代药理学研究表明，青藤碱中含有活性生物碱，可起到祛风镇痛、抗炎降压的作用，主要通过丘脑-垂体-肾上腺系统增强肾上腺皮激素的分泌，发挥非特异性抗炎效果。研究显示，青藤碱可抑制IL-1和TNF-2水平，减轻滑膜炎症；还能抑制A型细胞分泌，发挥抗炎、消肿的作用，从而减少关节液的分泌[9]。因此，本实验采用大耳白兔建立痛风性关节炎模型，使用青藤碱治疗，观察青藤碱对痛风性关节炎的治疗效果。结果发现，使用青藤碱治疗的D组兔在膝关节肿胀程度、关节液白细胞计数、膝关节及周围组织IL-1β、TNF-α水平上明显优于C、E组，C、E组优于未采用治疗的B组，提示采用青藤碱治疗痛风性膝关节炎兔效果显著。分析各组兔病理组织检查结果发现，A、D组大白兔的Mankin，s评分无显著差异，优于C、E组，C、E组优于B组，提示尽管玻璃酸钠和威灵仙也具有一定的治疗效果，但青藤碱的治疗效果更佳，膝关节组织改善更佳。姚茹冰等[10]研究发现，青藤碱不仅可以通过局部静脉注射给药，还能进行关节腔注射给药，均安全可靠，缓解疼痛效果满意，疼痛缓解总有效率达94.7%，可能与青藤碱能迅速改善局部血管、神经及软组织的血液供应，消除炎症、水肿等作用有关。

综上所述，青藤碱能有效降低痛风性关节炎关节滑膜中TNF-α、IL-1β水平，抑制炎症细胞因子的恶性循环，能改善病变关节肿痛症状，从而对痛风性关节炎起到治疗作用，为临床治疗痛风性关节炎、缓解关节肿痛提供较好疗效。