弥漫性大B细胞淋巴瘤组织中IL-11、IL-10 mRNA表达变化及意义

谢瑜，黎承平，谭琳，武坤

(昆明医科大学第一附属医院，昆明650032)

弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)属于侵袭性较强的成人非霍奇金淋巴瘤(NHL)，病死率极高，且个体预后差异较大。DLBCL的治疗和预后重点在于分期评价，尽管国际预后指数为NHL的危险分级和制定治疗方案提供了广泛认可的标准，但是对于NHL的预后仍无法明确[1]。因而，探寻准确的DLBCL评价和预后指标已成为现临床研究的重要方向。白细胞介素11(IL-11)由骨髓基质细胞分泌，具有调控造血功能的生物学活性，可直接刺激巨核系组细胞和骨髓造血干细胞的增殖并诱导巨核细胞的分化和成熟。研究发现，IL-11与肿瘤的发生及发展关系密切[2]。IL-10对机体的免疫应答抑制具有重要作用，对淋巴瘤具有一定的调节作用[3]。但是，目前关于IL-10、IL-11与DLBCL的相关研究较少。因此，我们观察了DLBCL组织中IL-11、IL-10 mRNA表达变化，并探讨其意义。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取我院2015年1月～2017年7月确诊的DLBCL患者80例(DLBCL组)[4]、反应性淋巴增生患者40例(对照组)。DLBCL组，男48例、女32例，年龄(49.8±16.2)岁;临床分期：Ⅰ期20例、Ⅱ期27例、Ⅲ期27例、Ⅳ期6例；病理学分型：生发中心(GC)型53例，非GC型27例；有B细胞症状50例，无B细胞症状30例；淋巴瘤国际预后指数(IPI)：0～2分39例，3～5分41例;检测前未行放化疗、免疫治疗。对照组男26例、女14例，年龄(48.0±14.9)岁。两组性别、年龄比较，差异无统计学意义。两组均排除其他血液系统疾病、其他部位的恶性肿瘤、全身感染性疾病、精神及认知功能疾病、风湿性疾病、结缔组织疾病。本研究获得医学伦理委员会的批准，受试者均签署知情同意书。

1.2 淋巴结组织中IL-11、IL-10 mRNA检测方法 采用qPCR法。用TRIzol试剂盒提取淋巴组织标本总RNA，于20 μL体系添加总RNA 2 μg合成cDNA；qPCR反应使用2×SYBR GREEN PCR MASTER Mix试剂盒(北京中杉生物有限公司)进行，适量cDNA为模板，15 μL体系扩增，0.4 μmol/L引物浓度，每个待测样本均设置平行样本3个并根据IL-11和IL-10具体引物行PCR扩增，GAPDH为内参，具体反应于PCR仪进行。引物序列：IL-11上游5′-AGTCGAATTCATGAGCAGCAGCTGCTCAGGGG-3′，下游5′-AGTCCTCGAGTAGGACTGTCTTCTTCCTGTA-3′；IL-10上游5′-ACCTGCCTAACATGCTTC-3′，下游5′-AGTCCCACCGCTGAGATA-3′。PCR反应条件：10 min 95 ℃；15 s 95 ℃；30 s 60 ℃；30 s 72 ℃，共计40个循环。实验重复3次，以2-ΔΔCt计算目的基因的相对表达量。

2 结果

2.1 两组IL-11、IL-10 mRNA表达比较 DLBCL组IL-11、IL-10 mRNA表达均高于对照组(P均<0.05)。见表1。

表1 两组IL-11、IL-10 mRNA表达比较

2.2 不同临床病理因素DLBCL患者肿瘤组织中IL-11、IL-10 mRNA表达比较 Ⅲ～Ⅳ期、非GC型、有B细胞症状、IPI指数3～5分DLBCL患者肿瘤组织中IL-11 mRNA表达高于Ⅰ～Ⅱ期、GC型、无B细胞症状、IPI指数0～2分者(P均<0.05)，有B细胞症状、IPI指数3～5分DLBCL患者肿瘤组织中IL-10 mRNA高于无B细胞症状、IPI指数0～2分者(P均<0.05)。见表2。

2.3 DLBCL肿瘤组织中IL-11、IL-10 mRNA表达的关系 相关性分析显示，DLBCL肿瘤组织中IL-11、IL-10 mRNA表达呈正相关(r=0.577，P<0.01)。

表2 不同临床病理因素DLBCL患者肿瘤组织中IL-11、IL-10 mRNA表达比较

3 讨论

DLBCL是最常见的NHL，约占30%。在我国DLBCL发病率更高，可达50%左右[5]。DLBCL没有特殊的临床表现，也没有特征性的生物学特点，多以无痛性淋巴结肿大起病，但也有以淋巴结以外器官侵犯为主要表现起病，如胸、腹腔积液、中枢侵犯、生殖系统侵犯等[6,7]。因此，本研究探寻DLBCL患者的评价和预后的有效指标，旨在提高DLBCL的治疗效果。

IL-11属于新发现的细胞因子，具有多种生物学功能。研究提示，乳腺癌组织具有分泌IL-11的功能，乳腺癌的骨转移和预后与IL-11的表达水平关系密切[8，9]。文献提示，IL-11与肿瘤的发生、发展亦具有密切联系，已成为临床恶性肿瘤研究的重要方向[10]。IL-10能够对细胞的生长与分化进行调节，参与炎性反应和免疫反应，是一类多细胞来源、多功能的细胞因子，亦是现阶段公认的炎症与免疫抑制因子，在肿瘤、感染、器官移植、造血系统及心血管系统中发挥重要作用[11～13]。此外，研究发现IL-10可作为强效免疫抑制剂调节B淋巴细胞的功能，进而影响HIV相关性NHL的发生发展过程[14,15]。

本研究结果显示，DLBCL组肿瘤组织中IL-11、IL-10 mRNA表达均高于对照组淋巴结组织，差异具有统计学意义。上述结果提示，DLBCL患者肿瘤组织中IL-11、IL-10 mRNA表达水平高于淋巴增生患者，证实IL-11、IL-10水平与DLBCL肿瘤的发生发展关系密切，结果与上述研究一致。IL-11、IL-10属于机体诱导免疫耐受抑制细胞，由于肿瘤抗原的封闭和装饰作用，加上自身免疫原性较弱，进而导致机体无法识别肿瘤抗原而出现免疫逃逸现象，上述原因可能是导致DLBCL患者机体IL-11、IL-10表达过高的主要原因。

本研究发现，Ⅲ～Ⅳ期、非GC型、有B细胞症状、IPI指数3～5分的DLBCL肿瘤组织中IL-11 mRNA表达均高于Ⅰ～Ⅱ期、GC型、无B细胞症状、IPI指数0～2分的DLBCL肿瘤组织，差异有统计学意义。这提示IL-11 mRNA具有作为DLBCL的临床分期、病理分型及预后评估指标的潜力，可作为评价和评估DLBCL预后的独立指标之一。针对IL-10 mRNA的研究结果显示，不同临床分期、不同病理学分型DLBCL肿瘤组织中IL-10 mRNA差异无统计学意义，有B细胞症状、IPI指数3～5分DLBCL肿瘤组织中IL-10 mRNA表达高于无B细胞症状、IPI指数0～2分的DLBCL肿瘤组织。IL-10 mRNA对DLBCL的临床分期和病理分型并不具有重要意义，但可作为DLBCL预后的重要指标。IL-10属于重要炎症因子，但炎症因子与多种影响因素有关，因此IL-10 mRNA对DLBCL的临床分期和病理分型并不具有重要意义。这提示DLBCL的病理分期介导机制复杂，不仅仅与炎症因子有关；但炎症因子参与了本病的发生发展过程，因而IL-10 mRNA可作为DLBCL预后重要评估指标。因此，我们认为IL-11、IL-10 mRNA在DLBCL肿瘤组织中高表达，可作为DLBCL预后判断的重要指标。