重楼水提取液对大鼠离体胃肠运动的影响及双向调节作用观察

黄彦峰，韦家河，农生斌

(右江民族医学院，广西百色53000)

中药的多成分性已成为共识，而且在同一味中药中可以含有作用相反的两种成分，因此某些中药对胃肠运动功能的调节表现出既可兴奋低下的胃肠运动，又可抑制过亢的胃肠运动[1]。重楼为百合科植物云南重楼或七叶一枝花的干燥根茎[2]，在我国主要分布于云南、四川、广西等地区[3]，药理作用主要有抗肿瘤、抗菌、抗心肌缺血、抗氧化、免疫调节、止血、驱虫、镇静、镇痛、止咳、平喘等[4，5]。其主要化学成分为甾体皂苷类、黄酮类、三萜类、脂肪酸、多糖、糅质、氨基酸类化学成分以及多种微量元素(如Ca)等，其中甾体皂苷为主要活性成分，可分为螺甾烷醇型、异螺甾烷醇型、呋甾烷醇型和变形螺甾烷醇型[6～10]。本课题组在前期实验研究发现，重楼水提和醇提两种提取液均可抑制在体小鼠胃的运动，而对小鼠小肠的运动则因剂量不同产生不同的效应[11]。2016年5月～2018年6月，我们观察了重楼水提液对不同机能状态(正常、抑制及亢进)大鼠离体胃肠运动的影响，并探讨重楼的双向调节作用。

1 材料与方法

1.1 主要材料 重楼(广西省百色市市售药材，产地为云南，批号：150701)；氯化乙酰胆碱(国药集团化学试剂有限公司，批号：92720018)；硫酸阿托品注射液(河南润弘制药股份有限公司，批号：1606221)。SD大鼠90只，体质量180～220 g，雌雄各半，由右江民族医学院实验动物中心提供，合格证号:SCXK桂2012-0003。BL-420F生物机能实验系统、HW-400E恒温平滑肌槽(成都泰盟科技有限公司)，JH-2型肌张力换能器(北京航天医学工程研究所)。

1.2 实验方法

1.2.1 重楼水提液的制备[11]称取重楼饮片50 g，常温浸泡18 h；加入10倍量水(500 mL)在加热回流的条件下提取2 h，过滤留下滤液；取滤渣再加水400 mL提取2 h，合并两次滤液过滤，隔水蒸发浓缩，定容为50 mL；冰箱冷藏，用时恢复至室温，并将药液pH调至7。

1.2.2 大鼠离体胃、肠平滑肌的制备 取30只大鼠，颈椎脱臼处死后剖腹,立即取出胃和十二指肠，放入盛有室温台氏液的培养皿中；培养皿中持续供应95% O2和5% CO2的混合气体，去除相连的肠系膜，并用注射器连接圆钝的针头小心冲洗肠腔内容物；分别取胃体和十二指肠纵行肌条，每条肌条长约2 cm。

1.2.3 重楼水提液对大鼠正常离体胃肠平滑肌收缩活动的影响观察 分别取胃和小肠平滑肌肌条各30段，随机分为3组。取一段肌条安放在38 ℃台氏液的恒温平滑肌槽内，一端固定在玻璃通气钩上，另一端固定于张力换能器上与生物机能实验系统相连。维持浴槽内台氏液温度(38.0±0.5)℃,并持续均速通入空气(约60个/min气泡)，调节肌条收缩的前负荷为1.5 g，平衡30 min后记录正常胃肠平滑肌活动曲线。低、高剂量组用微量移液器向平滑肌槽中加入终浓度分别为4×10-6、6×10-6g/L重楼水提液，正常对照组给等量台氏液，记录给药前后2 min胃肠运动曲线。每一次药液实验记录结束后，用台氏液冲洗3次，待胃肠管恢复后再进行下一项实验。每个剂量分别进行10次，计算给药前后大鼠胃肠平滑肌收缩幅度和收缩频率。

1.2.4 重楼水提液对阿托品作用后大鼠离体胃肠平滑肌收缩活动的影响观察 分别取胃和小肠平滑肌肌条各60段，随机分为6组。前期处理同1.2.3，低、高剂量组分别加入终浓度为4×10-6、6×10-6g/L重楼水提液，阿托品组、阿托品+低剂量组、阿托品+高剂量组均先加入阿托品(2×10-1g/L)，阿托品+低剂量组、阿托品+高剂量组再分别加入终浓度为4×10-6、6×10-6g/L重楼水提液，正常对照组加入等量的台氏液。记录加入各组药液后2 min离体胃肠平滑肌收缩缩幅度和收缩频率，方法同1.2.3。

1.2.5 重楼水提液对乙酰胆碱作用后大鼠离体胃肠平滑肌收缩活动的影响观察 分别取胃和小肠平滑肌肌条各60段，前期处理同1.2.3，分组方法、实验操作及记录方法同1.2.4，仅操作中将阿托品更换为乙酰胆碱(4×10-6g/L)。

2 结果

2.1 重楼水提液对大鼠离体胃、肠平滑肌收缩活动的影响 与给药前比较，高、低剂量组大鼠离体胃平滑肌收缩幅度减小、收缩频率减慢(P均<0.01)，小肠平滑肌收缩幅度增大(P<0.05或<0.01)；低剂量组大鼠离体小肠平滑肌收缩频率减慢(P均<0.01)，但高剂量组收缩频率无明显变化(P均>0.05)。见表1。

2.2 重楼水提液对阿托品诱导的离体胃肠平滑肌收缩活动的影响 与正常对照组比较，其余各组大鼠离体胃平滑肌收缩幅度减小、收缩频率减慢(P均<0.01)；与阿托品组比较，高剂量组、低剂量组、阿托品+低剂量组胃平滑肌收缩幅度增大、频率加快(P<0.05或<0.01)。与正常对照组比较，高剂量组小肠平滑肌收缩幅度增大(P﹤0.05)，阿托品组收缩幅度减小、频率减慢(P均﹤0.01)，阿托品+

表1 重楼水提液对大鼠离体胃肠平滑肌收缩活动的影响

注：与同组给药前比较，aP<0.05，bP<0.01。低剂量组、阿托品+高剂量组收缩幅度减慢(P均﹤0.01)，阿托品+低剂量组收缩频率减慢(P﹤0.05)；与阿托品组比较，高剂量组、低剂量组、阿托品+低剂量组、阿托品+高剂量组小肠平滑肌收缩幅度增大、频率加快(P<0.05或<0.01)。见表2。

表2 重楼水提液对阿托品诱导的离体胃肠平滑肌收缩活动的影响

注：与正常对照组比较，aP<0.05，bP<0.01；与阿托品组比较，cP<0.05，dP<0.01。

2.3 重楼水提液对乙酰胆碱诱导的离体胃肠平滑肌收缩活动的影响 与正常对照组比较，高、低剂量组胃平滑肌收缩幅度减小、收缩频率减慢(P均﹤0.01)，乙酰胆碱组、乙酰胆碱+低剂量组、乙酰胆碱+高剂量组胃平滑肌收缩幅度增大、收缩频率减慢(P<0.05或<0.01)；与乙酰胆碱组比较，高剂量组、低剂量组、乙酰胆碱+低剂量组、乙酰胆碱+高剂量组胃平滑肌收缩幅度减小(P均﹤0.01)。与正常对照组比较，高剂量组小肠平滑肌收缩幅度增大(P﹤0.05)，乙酰胆碱组收缩幅度增大且收缩频率减慢(P均﹤0.05)，乙酰胆碱+低剂量组、乙酰胆碱+高剂量组收缩幅度减小(P均﹤0.01)；与乙酰胆碱组比较，乙酰胆碱+低剂量组、乙酰胆碱+高剂量组小肠平滑肌收缩幅度减小且收缩频率加快(P<0.05或<0.01)。见表3。

3 讨论

胃肠平滑肌痉挛所致腹痛、腹泻等是临床常见的疾病[12]，西医临床治疗常以抗胆碱能药解除胃痉挛，不良反应比较大，所以应用中药治疗逐渐被人们重视。

表3 重楼水提液对乙酰胆碱诱导的离体胃肠平滑肌收缩活动的影响

注：与正常对照组比较，aP<0.05，bP<0.01；与乙酰胆碱组比较，cP<0.05，dP<0.01。

食物的研磨、排空、消化及吸收均需要胃肠运动来完成，胃肠运动过快或太慢都不利于营养物质的消化和吸收。重楼水提液能使大鼠离体胃平滑肌收缩幅度减小，收缩频率减慢；由此推断，重楼水提液能抑制胃痉挛，缓解胃疼痛，对治疗胃痉挛有一定疗效，其解痉机制可能与重楼主要化学成分甾体皂苷中的呋甾烷苷元结构有关[13]。重楼水提液能使大鼠离体小肠平滑肌收缩幅度增大，提示重楼水提液能增强小肠运动，对治疗便秘、非溃疡性消化不良等疾病有一定疗效；其机制可能与甾体皂苷抑制磷酸二酯酶达到抑制血管扩张有关[13]，是否与其微量元素中Ca的含量有关，尚待进一步研究。

中药双向调节作用，是指同一中药及其组成的方剂，在机体不同状态下以不同的方式应用，可以发挥出趋向相反的作用[14]。阿托品为胆碱能M受体阻断剂，与M受体结合后竞争性拮抗乙酰胆碱的激动作用[15]。乙酰胆碱是平滑肌内兴奋传递的化学物质能,激动M胆碱受体使胞内第二信使三磷酸肌醇和二酰基甘油浓度上升,进而引起Ca2+释放和底物蛋白磷酸化激发平滑肌产生收缩效应[16]。本研究观察到使用M受体阻断剂阿托品干预后，重楼水提液能使大鼠离体胃肠平滑肌收缩幅度增大，收缩频率加快；使用M受体激动剂乙酰胆碱干预后，重楼水提液能使大鼠离体胃肠平滑肌收缩缩幅度减弱；上述结果提示，重楼水提液在机体不同状态下发挥出趋向相反的作用，即中药双向调节作用。刘星等[17]研究发现，重楼皂苷能激活细胞内多种信号传递途径增加细胞内Ca2+浓度，调节子宫平滑肌的节律性收缩。苏佳等[18]研究发现，重楼总皂苷对大鼠子宫平滑肌收缩活动的调节与PLA2/AA信号途径的激活有关。由此推断，使用阿托品干预后,重楼皂苷通过激活细胞内多种信号传递途径增加细胞内Ca2+浓度，来增强大鼠离体胃肠平滑肌收缩幅度和频率。Corea等[19]研究发现，呋甾烷皂苷可以显著抑制乙酰胆碱和组胺诱导的豚鼠离体回肠的强烈痉挛。由此推断，使用乙酰胆碱干预后,呋甾烷皂苷通过直接抑制乙酰胆碱来减弱大鼠离体胃肠平滑肌收缩幅度。

综上所述，重楼水提液对阿托品、乙酰胆碱诱导的离体胃肠运动具有双向调节作用。如今，中药的双向调节作用已广泛应用于临床实践。在临床应用此类中药时，应根据机体当时的生理、生化状态，采用不同的煎煮、炮制或者使用药物的不同有效成分，最恰当地发挥药物疗效。运用好中药的双向调节作用理论，对中药在临床的辨证用药有很大的指导意义，有助于推动中医临床医学的发展。