浙江省702株淋病奈瑟菌的耐药性分析

赵钊　　王巧刚　　沈雅婕　　孙哲伟　　葛玉梅

[摘要] 目的 檢测淋病奈瑟菌临床分离株的耐药性及了解其对常用抗生素的耐药现状，对该地区淋病的临床用药治疗和控制有重要意义。 方法 收集2008～2016年浙江省人民医院分离的淋病奈瑟菌702株，菌落革兰染色镜检，并采用法国梅里埃VITEK 2-compact全自动细菌检测分析系统及其配套的API-NH细菌鉴定卡进行鉴定。采用VCAT3培养基35℃含5.0% CO2条件下的K-B法进行药敏检测。采用SPSS13.0统计软件进行数据分析。 结果 702株淋病奈瑟菌对环丙沙星和四环素的耐药性分别为91.7%和86.2%；其次是青霉素G和氨苄西林，耐药率分别为82.7%和25.3%，对头孢噻肟和头孢曲松暂未出现耐药。 结论 环丙沙星、四环素、青霉素G和氨苄西林等药物因该地区的淋病奈瑟菌的耐药性太高已不宜作为本地区治疗淋病的一线药物使用，头孢噻肟和头孢曲松等可作为首选药物考虑，同时应进一步加强对淋病奈瑟菌耐药性的监测及根据相关药敏试验合理选用抗菌药物。

[关键词] 淋病奈瑟菌；耐药性；抗生素；菌落革兰染色镜检；药敏试验

[中图分类号] R446.5；R759.2 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2018）17-0115-03

Analysis on the drug resistance of 702 strains of Neisseria gonorrhoeae in Zhejiang province

ZHAO Zhao1 WANG Qiaogang2 SHEN Yajie1 SUN Zhewei1 GE Yumei1

1.Clinical Medical Examination Center， Zhejiang Provincial Peoples Hospital， Peoples Hospital of Hangzhou Medical College， Hangzhou 310014， China； 2.Examination Center， Dongyang Peoples Hospital in Zhejiang Province， Dongyang 322100， China

[Abstract] Objective To investigate the drug resistance of Neisseria gonorrhoeae（NG） clinical isolates and the drug resistance to common antibiotics， which is significant for the clinical medication treatment and control of the local gonorrhea. Methods 702 strains of NG isolated in Zhejiang Provincial Peoples Hospital from 2008 to 2016 were collected. Bacterial colonies were tested using gram staining microscopy and identified using VITEK 2-compact automated ID/AST instrument of Biomerieux， France and matching API-NH strip. Drug sensitivity test was taken using K-B method under the temperature of 35℃ containing 5% CO2 in the VCAT3 culture media. Statistical analysis was taken in SPSS13.0. Results The drug resistance of these 702 NG strains to ciprofloxacin and tetracycline was 91.7% and 86.2% respectively. Then was penicillin G and ampicillin， to which the drug resistance was 82.7% and 25.3%. There was no drug resistance showed to cefotaxime and ceftriaxone. Conclusion Ciprofloxacin， tetracycline， penicillin G and ampicillin are not proper to be used as the first-line drugs of local gonorrhea due to the high drug resistance of local NG. Cefotaxime and ceftriaxone could be considered as the preferred drugs. In the meantime， the surveillance of NG drug resistance should be further enhanced and the antibiotic drugs should be selected based on the related drug sensitivity test.

[Key words] Neisseria gonorrhoeae； Drug resistance； Antibiotics； Bacterial colony gram staining microscopy； Drug sensitivity test

淋病奈瑟菌（Neisseria gonorrhoeae）俗稱淋球菌，为革兰阴性双球菌，是人类常见性传播疾病淋病的病原体。由淋病奈瑟菌感染引起的以人为唯一天然宿主的淋病是我国目前流行的发病率最高的性传染病之一，也是我国《中华人民共和国传染病防治法》[1]规定的重点防治的乙类传染病，主要引起男性尿道炎、附睾炎、前列腺炎，女性尿道炎、阴道炎、子宫炎，以及新生儿的淋球菌结膜炎[2]。近年来，淋病发病率不断上升，其病原体淋病奈瑟菌的耐药性也日益增强。本文对2008年1月～2016年12月在我院分离到的702株淋病奈瑟菌的检测及耐药结果进行统计与分析。

1 材料与方法

1.1 菌株来源及分离鉴定

用无菌棉棒采取在我院就诊的疑似淋病患者的白带、脓液、尿道分泌物、尿拭子、分泌物等标本并进行淋病奈瑟菌巧克力选择平板（VCAT3，梅里埃生物制品有限公司）分离培养，35℃含5.0% CO2的恒温培养箱孵育24 h后观察其生长情况及菌落形态。挑取菌落进行革兰染色镜检、氧化酶初筛并用VITEK 2-compact型法国梅里埃VITEK 2-compact全自动细菌检测分析系统及其配套的API-NH细菌鉴定卡进行鉴定，2008年1月～2016年12月共收集淋病奈瑟菌702株。

1.2 药敏试验

采用K-B法、实验方法及判断标准按照国内临床通用的美国临床实验室标准化协会（CLSI 2014）标准执行[2]，在VCAT3培养基上均匀涂布0.5麦氏标准的菌液并贴上相应药敏纸片（Oxoid公司），35℃含5.0% CO2的恒温培养箱孵育24 h后观察其抑菌圈的有无及大小。试验中采用梅里埃（上海）生物制品有限公司提供的淋病奈瑟菌ATCC43069为质控菌株。

1.3统计学方法

使用WHONET5.6和SPSS17.0进行数据统计分析，所有统计数据均已去除相同患者的重复标本，计数资料采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各年度淋病奈瑟菌分离情况

2008～2016年浙江省人民医院共分离到702株淋病奈瑟菌，其分离率呈逐年上升趋势（图1）。其中2008年57株，2009年57株，2010年56株，2011年39株，2012年63株，2013年89株，2014年90株，2015年109株，2016年142株。

2.2 淋病奈瑟菌在各临床标本分布及来源分布

702株淋病奈瑟菌中408株来自于宫颈标本，占58.12%，居首位。其次是尿道标本，269株占38.32%。脓液标本20株和前列腺液标本5株，分别占2.85%和0.71%。702株淋病奈瑟菌中248株分离自妇产科，85株分离自门诊，193株分离自泌尿科，161株分离自皮肤科，1株分离自内分泌科，14株分离自生殖科。

2.3 药敏试验结果

288株淋病奈瑟菌中，对环丙沙星和四环素的耐药性分别为91.7%和86.2%；其次是青霉素G和氨苄西林，耐药率分别为82.7%和25.3%；对头孢噻肟和头孢曲松暂未出现耐药。

3 讨论

淋病是由淋病奈瑟菌感染引起各种部位的炎症，也是最常见的性传播疾病之一，此病易并发前列腺炎、龟头包皮炎、输精管炎、精囊炎、淋菌性溃疡、附睾炎和尿道狭窄等其他病症，如不及时治疗，病情进一步扩散时，还可损害生殖系统和全身其他器官，可引起泌尿生殖器的慢性炎症，而导致不育或不孕，是影响全球的严重公共卫生问题[3]。通过分析年度分离情况可以发现，本地区淋病奈瑟菌的分离率呈逐年上升趋势，因此控制淋病的发生、蔓延非常重要，必须加强性知识教育，强化安全措施，并对高危人群定期检查，以发现感染者和患者，消除隐匿的传染源。

青霉素和四环素曾作为经典药物对淋病的预防和治疗起到了关键作用，但是随着该类药物的广泛使用，淋病奈瑟菌通过质粒介导产青霉素酶进而水解青霉素，或者通过对染色体基因突变导致青霉素结合蛋白2（PBP2）结构异常，与青霉素结合力下降而引起对该类药物的广泛耐药。上世纪80年代以来，淋病奈瑟菌对青霉素类药物就一直呈现高度耐药。在2005年对西太平洋地区的淋病奈瑟菌监测中发现，中国的淋病奈瑟菌对青霉素的耐药率高达95.3%[3]，近年来报道的不同地区分离得到的淋病奈瑟菌对青霉素的耐药性均在90%左右[4-5]。四环素抗性基因（tetM）也可以通过质粒在不同细菌中传递从而引起广泛耐药。本次研究中发现本地区青霉素G和四环素的耐药率分别为82.7%和86.2%，鉴于如此高的耐药率，这两类药物不宜作为本地区淋病治疗的首选药物。

20世纪80年代末，鉴于高度耐受青霉素和四环素的淋病奈瑟菌的流行，世界卫生组织曾推荐以环丙沙星为代表的氟喹诺酮类药物等作为淋病治疗的首选药物，有着很好的抗菌活性。但随着该药的广泛应用，淋病奈瑟菌对喹诺酮类药物的耐药现象越来越广泛[6-7]。淋病奈瑟菌主要通过染色体gyrA和parC基因突变导致DNA旋转酶和拓扑异构酶Ⅳ氨基酸改变来实现其对喹诺酮类药物耐药性。本次研究中发现本地区的环丙沙星耐药率高达91.7%，提示环丙沙星、氧氟沙星、左氧氟沙星等喹诺酮类药物在作为抗淋病奈瑟菌感染治疗已完全失去意义。

目前，第三代头孢菌素是治疗淋病的推荐首选用药。但近几年来，许多国家和地区报道淋病奈瑟菌对其敏感性降低，甚至出现高度耐药的菌株[8-9]。我国流行的淋病奈瑟菌绝大多数对头孢曲松敏感，但是近年来国内有地区报道淋病奈瑟菌对第三代头孢菌素的耐药率呈上升趋势，敏感率下降[10]。而本研究未检测出对头孢曲松、头孢噻肟等第三代头孢菌素耐药的菌株，与2014年浙江新昌地区淋病奈瑟菌对第三代头孢菌素100%敏感的结果一致[11-16]。这可能与不同地区使用第三代头孢菌素类药物治疗淋病的用量和频率有较大的相关性[17-20]。从本研究来看，头孢曲松和头孢噻肟可以作为本地区治疗淋病的一线药物。但也应加强对其的耐药性监测，及时掌握耐药的趋势。头孢西丁作为第二代头孢菌素，本研究中耐药率为2.1%，略高于第三代头孢菌素类药物，小于专家共识的一线药物耐药率应小于5%的筛选标准，因此头孢西丁可以作为本地区治疗淋病的备选药物，但也应加强对其的耐药性监测，及时掌握耐药的趋势。

由于抗菌药物的广泛使用，淋病奈瑟菌的耐藥性越来越严重，使淋病的治疗也越来越困难。淋病奈瑟菌的耐药性因时间和地区的变化而有所不同，所以持续监测耐药性，掌握淋病奈瑟菌的耐药动态，对指导临床用药有重要意义。鼓励临床医生重视病原菌检验的价值，与实验室联合做好淋病奈瑟菌的耐药性监测合理使用抗菌药物减缓耐药现象的上升，为患者减轻心理和经济负担。因此，淋病奈瑟菌耐药率监测对治疗淋病有重要的指导意义。

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（收稿日期：2018-03-29）