丹参川芎嗪对大鼠脊髓损伤后神经功能恢复的作用

王小菊，苏 军

随着我国经济的发展，各类意外事故的发生率也呈逐年递增趋势，脊髓损伤是脊柱损伤最严重的并发症。有研究显示，发达国家脊髓损伤发生率约为每百万人13.3～45.9例/年；我国上海1991年统计数据显示，脊髓损伤发病率约为34.3/百万[1-2]。脊髓损伤常会引起损伤节段及下肢功能障碍，不仅对患者生活产生较大的影响，同时还会加重社会医疗负担。脊髓损伤后，患者损伤部位神经组织会发生极为复杂的病理变化，其损伤修复过程受多种因素的影响。西医多选择神经营养因子、胚胎脊髓移植等方式来阻止脊髓的继发性损伤，但效果仍不理想[3]。丹参川穹嗪在临床上常用于治疗闭塞性脑血管疾病，同时在治疗心绞痛、心肌梗死等病症中效果较好。本课题研究了丹参川穹嗪对大鼠脊髓损伤后神经功能恢复的影响，以期为临治疗脊髓损伤提供一定的实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物 选择雄性SD大鼠24只，由青海生物药品厂提供，合格证号：SYXK(青)2017-0001，体重210～250 g，随机分为两组，各12只。

1.2 实验药物 丹参川穹嗪注射液购自吉林四长制药有限公司，规格5 ml/支。

1.3 脊髓损伤模型制作 按0.1 mg/100 g体重腹腔注射3%戊巴比妥钠注射液麻醉大鼠，麻醉效果满意后，备皮，将其俯卧固定于手术台上，以T8为中心，于其背部正中做一约3 cm纵行切口，切开皮肤肌肉，暴露T7～T9棘突和锥板，咬除T8棘突及锥板，暴露T8段脊髓；选择10 g重的冲击锤，于5 cm高度处落下垂直撞击脊髓，造成T8段脊髓损伤。生理盐水冲洗伤口，逐层缝合，于大鼠大腿外侧肌注青霉素，防止感染。模型成功标志：撞击后，大鼠双下肢迅速回缩及弹动；麻醉效力过后，大鼠双下肢呈迟缓性瘫痪。

1.4 分组处理 建模成功后，实验组于1 h内腹腔注射丹参川穹嗪注射液，使用剂量为20 mg/100 g，1次/d，连续使用10 d；对照组给予与实验组相同剂量的生理盐水。

1.5 观察指标

1.5.1 脊髓损伤程度 分别于干预后第1、7、14及21 d时，使用脊髓运动功能（BBB）量表对大鼠的脊髓损伤程度进行评估，具体方法是：将受试大鼠置于开口盆内，轻敲盆壁，使大鼠爬行，观察大鼠臀、膝、踝关节的行走、躯体运功及协调情况。满分21分，得分越高，表明大鼠脊髓损伤程度越小[4]。

1.5.2 运动诱发电位（MEP） 分别于干预后第1、7、14及21 d时，采用Epoch XP神经监护仪（美国Axon公司），检测大鼠双后肢MEP。

1.5.3 脊髓残存面积 于干预21 d时，腹腔麻醉戊巴比妥钠麻醉大鼠，使用4%多聚甲醛经心灌注固定，取出完整损伤区脊髓，投入固定液中12 h，而后取出修剪，石蜡包埋，做5 μm的连续横切片，HE染色，酒精脱水，二甲苯透明处理，树脂封片，于显微镜下观察并计算其脊髓残存面积。

1.6 统计学方法 应用SPSS22.0统计软件分析，计数资料以频数和百分率表示，采用χ2检验；计量资料以±s表示，组间比较采用t检验，组内不同时间点的比较采用单因素重复测量方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组不同时点BBB评分比较 干预后第1 d，两组BBB评分比较无显著差异（P＞0.05）；干预第7、14及21 d时，两组BBB评分均逐渐升高，但实验组BBB评分均显著高于对照组（P＜0.05），见表1。

表1 两组不同时点BBB评分比较(n=12)

2.2 两组不同时点MEP比较 干预后第1 d，两组MEP潜伏期及波幅均无显著差异（P＞0.05）；干预第7、14及21 d时，两组MEP潜伏期均逐渐缩短，MEP波幅均逐渐升高，但实验组MEP潜伏期均低于对照组（P＜0.05），MEP波幅均高于对照组（P＜0.05）。 见表 2。

表2 两组不同时点MEP比较(n=12)

2.3 两组脊髓残存面积比较 在干预后第21 d，两组脊髓横切片均显示，脊髓组织结构出现了明显的紊乱、萎缩现象，实验组伤区脊髓残存面积为（49.26±5.13）%，对照组为（27.41±4.97）%，两组比较差异显著（P＜ 0.05）。

3 讨论

脊髓损伤会对相应的神经产生极大的损伤，部分患者甚至出现终生瘫痪，严重降低其生活质量。临床实践指出，急性脊髓损伤大部分并非横断性损伤，即仍有部分受损轴突存在，如果此时患者未得到及时有效的干预，继发性损伤往往会使脊髓功能出现永久性丧失，因而现阶段医学研究重点在于如何保护脊髓组织，减少或预防继发性损伤的出现，促进脊髓功能的重建。

目前西医对脊髓损伤的治疗主要为对症治疗、药物治疗及并发症治疗，其中药物治疗主要目的在于防止受损的脊髓进一步损伤，保护正常脊髓组织，最大程度保护脊髓神经功能，主要药物有皮质类固醇、神经节苷脂、神经营养药、脱水药等。韩美香等[5]通过对84例急性脊髓损伤患者进行分组治疗发现，甲泼尼龙联合亚低温疗法能够显著提高患者治疗有效率，同时能够改善患者感知功能及运动功能。翟宏伟等[6]通过对62例脊髓损伤患者进行分组干预发现，神经节苷脂联合神经生长因子能够显著提高患者日常生活能力。

丹参川穹嗪具有扩张血管、抗炎抗血栓的作用，临床上主要被用于治疗缺血性心脏病、缺血性脑病等。随着近年对该药物研究的深入，其新的药理作用不断被发现。王乐乐等[7]选择60只脊髓损伤大鼠，分为对照组、丹参组、川芎嗪组及联合治疗组，对比了治疗后4组的BBB评分及MEP评分，结果显示，治疗后联合治疗组BBB评分及MEP评分均优于对照组。其认为川芎嗪为川芎提取出的生物碱，具有消炎消肿、清除氧自由基的功效；丹参具有扩张血管、改善微循环的作用。二者联用能够显著缓解个体脊髓受损后发生的炎性反应，保护受损的神经元，同时加快神经元的恢复，因而联合应用效果较好。俞勇等[8]通过对89例急性脊髓损伤患者进行分组干预发现，加用丹参川穹嗪能够显著降低患者早期并发症的发生率，同时也能够降低患者术后深静脉血栓、肺动脉栓塞的发生风险，分析认为这与丹参川穹嗪能够有效缓解患者炎性反应、促进血液微循环有关。本研究结果显示，干预第7、14及21 d时，两组BBB评分均逐渐升高，但实验组BBB评分均显著高于对照组，表明丹参川穹嗪治疗可显著降低大鼠的脊髓损伤程度，促进损伤的修复。

MEP是检查运动神经系统功能的一项神经电生理学检查方法，广泛用于运动神经系统疾病的诊断、术中监护等。在脊髓损伤中，脊髓破坏越严重，前角运动细胞损伤越多，则MEP潜伏期延长及波幅降低越显著[7]。本研究结果显示，干预第7、14及21 d时，两组MEP潜伏期均逐渐降低，MEP波幅均逐渐升高，但实验组MEP潜伏期均低于对照组，MEP波幅均高于对照组；表明丹参川穹嗪可显著改善大鼠运动神经系统功能。脊髓标本观察也证实，干预后第21 d，实验组伤区脊髓残存面积显著大于对照组，表明丹参川穹嗪可显著减少大鼠伤区继发性脊髓损伤。分析原因可能是[9]：（1）丹参川穹嗪具有较好的中枢神经保护作用，能够降低神经细胞氧耗，尽量延长神经细胞的生物活性；（2）丹参川穹嗪具有较好的抗氧自由基作用，能够降低大鼠体内SOD的含量，进而降低过氧化物对神经细胞的损害；（3）丹参川穹嗪能抑制脊髓损伤小鼠脊髓组织TNF-α，IL-1β和COX-2 mRNA的上调，显著抑制小胶质细胞活化和中性粒细胞浸润，通过调节小胶质细胞活化的作用，保护脊髓；（4）丹参川穹嗪能够扩展血管，改善受损区域血供，减少缺血缺氧带来的继发性损伤；（5）丹参川穹嗪促进脊髓表达神经营养素4（NT4）及酪氨酸激酶受体、促进神经丝蛋白（NF）及神经营养因子（NGF、BDNF、NT3）的表达，促使受损的神经元修复。

总之，丹参川穹嗪能够显著减少大鼠脊髓损伤后伤区的继发性损伤，促进脊髓下肢活动及神经功能的恢复，可能成为治疗脊髓损伤的药物之一，有待临床进一步研究验证。