2013～2016年广西部分规模猪场猪伪狂犬病gE抗体检测分析

段群棚，秦毅斌，卢冰霞，何 颖，陈忠伟，周英宁，李 斌，梁家幸，闭炳芬，蒋冬福，苏乾莲，卢敬专，赵 武

（广西壮族自治区兽医研究所 广西兽医生物技术重点实验室，南宁 530001）

伪狂犬病（pseudorabies，PR）是由伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PRV）感染猪、牛、羊等多种家畜和野生动物引起的，以发热、奇痒（猪除外）、脑脊髓炎为主要特征的一种高度接触性传染病。PRV能感染多种宿主，但猪是其主要天然宿主、贮存者和传播者[1-3]。gE基因是PRV的非必需基因，当gE基因被删除后，病毒毒力降低，但不会影响病毒的复制扩增和免疫原性[4]，因此gE基因是一个良好的标记基因。gE蛋白是PRV所有野毒株表达的一类糖蛋白，在被PRV野毒感染的猪体内能检测到gE蛋白抗原及抗体，这为利用分子生物学和血清学方法进行PRV 野毒感染和gE基因缺失疫苗免疫接种的鉴别诊断提供了条件[5]。

我国从20世纪90年代开始在规模猪场大量使用PRV gE基因缺失弱毒疫苗，使猪伪狂犬病得到有效控制。但自2011年以来，我国不同地区猪场相继出现接种 PRV 基因缺失弱毒疫苗后仍发生PR的现象，因此加强猪场PR的监测及防控对促进和保障养猪业的健康发展有重要意义[6-8]。本实验室于2013年1月～2016年12月，采用 gE-ELISA法对来自壮族自治区14个地级市部分规模猪场送检血清样品进行PRV gE抗体检测，并对不同年份、不同季度、不同区域、不同阶段猪群的伪狂犬野毒感染情况进行调查分析，以全面了解广西规模猪场PRV野毒感染情况和流行态势，为猪场防控和净化PR提供参考依据。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 试剂盒 美国IDEXX公司的PRV gE抗体检测试剂盒购自北京爱德仕元亨生物科技有限公司。

1.1.2 血清样品来源 2013年1月～2016年12月，广西14个地级市290个规模化猪场共送检8676份血清样品，受检猪场均免疫PRV gE缺失疫苗。为便于进行血清流行病学调查统计，将受检猪群分为6种不同阶段类别: 新生仔猪（1～4周龄）、保育仔猪（4～8周龄）、育肥猪（9周龄及以上）、后备母猪、母猪、公猪。

1.2 方法

1.2.1 血清样品的制备 经猪前腔静脉或耳缘静脉采集3～5 mL非抗凝血液，室温静置2～4 h后，5000×g离心3～5 min，取上清置于离心管中，-20℃保存备用。

1.2.2 PRV gE 抗体检测方法 血清样品PRV gE抗体检测严格按照 IDEXX 公司生产的 PRV gE 抗体检测试剂盒说明书进行。

1.2.3 结果判定与分析 本实验室检测的猪血清样品均来自使用PRV gE基因缺失疫苗免疫的猪场，因此在进行PRV野毒感染阴阳性猪场结果判定和统计时，只要猪场出现一个阳性样品，该猪场则判定为PRV野毒感染阳性猪场。应用统计学软件SPSS13.0对检测结果数据进行卡方检验（χ2检验），统计分析其差异性。

2 结果与讨论

2.1 2013～2016年广西受检猪场PRV gE抗体检测结果对来自广西14个地级市290个规模猪场的8676份血清样品进行PRV gE抗体检测，受检猪场PRV gE抗体阳性场为48.97%，受检血清样品的PRV gE抗体阳性率为22.56%。2013～2016年PRV野毒感染的猪场阳性率和血清样品阳性率均呈逐年上升趋势，2014年血清样本阳性率上升尤其明显具体结果详见表1。

王喜娇等[9]调查结果显示，2010～2013年广西猪场阳性场23.00%、血清样本阳性率5.16%。本次调查结果中猪场阳性率与血清样本阳性率均呈现大幅度上升，表明广西规模猪场猪PRV野毒感染呈逐年上升趋势，感染程度越发严重。唐小明等[10]报道2014～2015年湖南猪场阳性率61.22%，血清样本阳性率23.56%。党占国等[11]报道2012～2015年我国部分地区猪场阳性率99.2%，血清样品阳性率43.9%，相比较而言，本次调查结果表明广西猪场PRV野毒感染在我国还处于相对较低水平。张显浩等[12]报道PRV野毒感染在我国猪场中普遍存在，但不同猪场感染率存在一定差异。近年来广西猪场PRV野毒感染阳性率、血清样本阳性率均呈逐年上升态势，相应的临床病例发生也有所抬头，PR的防控形势严峻，因此必须加强猪场PR综合防控和净化工作。

表1 2013～2016年广西部分规模猪场PRV gE抗体检测结果Table 1 Detection of Pseudorabies virus gE antibody in serum of swine sample from pig farms of Guangxi during 2013-2016

2.2 2013～2016年广西不同区域受检猪场 PRV野毒感染情况本研究统计的血清样品来自广西14个地级市290个规模猪场。由表2可知，广西14个级市均存在伪狂犬野毒感染，但感染程度有所不同，与王喜娇等[9]调查结果一致。南宁、玉林、柳州、桂林、贵港市为送检血清样品较多的5个地级市，同时也是广西养猪密集区（规模猪场较多），猪场阳性率分别为64.49%、43.75%、28.57%、33.33%、55.56%，样品阳性率分别为33.80%、13.62%、6.93%、6.84%、34.38%。其中南宁、贵港市猪场阳性率、样品阳性率均高于广西平均水平。根据采样调查结果，南宁、贵港市送检血清样品多来自中小规模猪场，而中小规模猪场多存在生物安全意识淡薄及措施不到位、引种检疫不严、疫苗免疫程序不合理等诸多疫病防控缺陷，导致PRV野毒感染率偏高，这与文献报道的中小型规模猪场PRV野毒感染率较高[10,13]研究结论相一致。应针对PR的发病与防控特点，做好猪场PR的综合防控及净化工作。

表2 2013～2016年广西不同区域受检猪场 PRV野毒感染情况Table 2 Infections of PRV wild strain in the pig farms from different regions of Guangxi during 2013-2016

2.3 2013～2016年广西受检猪场不同阶段猪群PRV gE抗体检测结果取能明确猪龄的猪血清6771份，对不同阶段猪群PRV gE抗体阳性率检测结果进行分类统计。结果显示，不同年份不同阶段猪群对PRV野毒感染程度均不同，2013～2016年，公猪、后备母猪、母猪、哺乳仔猪、保育猪、育肥猪的PRV gE抗体总阳性率分别为38.50%、25.89%、23.72%、25.86%、21.16%、18.72%； 2013年、2014年后备母猪PRV gE抗体阳性率最高，2015年、2016年公猪PRV gE抗体阳性率最高。2013～2016年，公猪、母猪、哺乳仔猪、保育猪、育肥猪PRV gE抗体阳性率呈逐渐上升趋势；后备母猪PRV gE抗体阳性率从2013～2015年呈逐渐上升趋势，而2016年PRV gE抗体阳性率则呈下降态势（详见表3）。χ2检验结果表明，2013～2016年广西部分规模猪场不同阶段猪群间的PRV gE抗体阳性率差异具有显著统计学意义（P ＜0.05）。

根据广西受检猪场不同生长阶段猪的PRV gE血清抗体检测结果可知，不同生长阶段猪群对PRV均易感。公猪、后备母猪、母猪等种猪PRV野毒感染率较高，育肥猪PRV野毒感染率最低，而哺乳仔猪与母猪PRV野毒抗体阳性率比较接近，表明哺乳仔猪的PRV野毒抗体很可能来自PRV野毒母源抗体。哺乳仔猪、保育猪、育肥猪PRV野毒抗体逐渐降低，很可能原因是来自母猪的PRV野毒母源抗体随着时间逐渐消失所致，这与王科文等[14]调查结果与其相吻合，自然条件下PRV野毒母源抗体在120 d左右才消失。种猪PRV gE野毒抗体感染率高则是由于种猪饲养周期较长，一旦感染PRV野毒，可长期带毒排毒，引起持续性感染，而且规模种猪场通常采用人工授精，只要1头种公猪感染PRV，便可通过人工授精的方式在种母猪群扩散，也是整个猪场持续阳性的根本原因[9,12]。

2.4 2013～2016年广西受检规模猪场PRV野毒感染阳性比例分布调查对受检猪场血清样本PRV gE抗体阳性率进行区间比例统计，了解PRV野毒感染猪场的感染程度。结果显示，2013～2016年受检猪场的PRV gE抗体阴性猪场比例分别为72.46%、52.73%、43.84%、39.78%，PRV gE抗体阴性猪场比例呈逐年下降趋势，也即PRV gE抗体阳性猪场比例呈逐年上升趋势。受检猪场血清样本gE抗体阳性率在50.0%以上的猪场比例，2013年为2.90%（2/69）、2014年为16.36%（9/55）、2015年为24.66%（18/73）、2016年为26.88%（25/93），表明受检广西规模猪场PRV野毒感染程度呈逐年上升趋势（详见表4）。

目前，加强猪场生物安全措施以及科学使用疫苗免疫接种仍是防控猪PR的主要方法。在猪群科学使用PRV gE基因缺失疫苗，能有效地阻止病毒扩散，降低排毒量，缩短排毒时间，减少带毒猪只。同时定期开展血清抗体监测，制定合理的免疫程序，及时淘汰PRV gE抗体阳性猪，确保疫苗的免疫保护效果，最终达到净化目的。但是仅依靠疫苗免疫并不能彻底控制PR的发生与流行，对于规模猪场来说，实施PR防控和净化需要有一整套符合猪场实际的可操作性的综合实施方案。该实施方案除了疫苗免疫外，应主要包括以下较高水平的饲养管理和生物安全措施：坚持自繁自养，引种前检疫，确保引进的公猪、后备母猪均未感染PRV野毒；猪群配套使用PRV gE抗体检测试剂盒，定期检测PRV gE抗体，坚决淘汰已感染PRV野毒的种猪，有计划的实行种猪PRV的净化工作，逐步淘汰清除PRV gE阳性抗体种猪，降低种猪群的PRV野毒抗体阳性率至阴性状态，并引入PRV gE阴性抗体种猪，最后达到在猪场中清除gE阳性种猪群和PRV感染猪群，达到净化目的。加强饲养管理，做好其他重要常规疫苗免疫，降低其他疫病的感染，提高猪群的整体健康水平和免疫力；实行严格的消毒措施（包括猪舍、进入猪场人员、车辆和工具等），禁止一切PRV可能携带者（包括所有能感染PRV的家禽和野生动物及相关物品）进入猪场等。

表3 2013～2016年广西受检猪场不同阶段猪群PRV gE抗体检测结果Table 3 Detection of the PRV gE antibody in different kinds of pigs from pig farms in Guangxi during 2013-2016

表4 2013～2016年广西受检规模猪场PRV野毒感染阳性比例分布统计结果Table 4 Statistical results of PRV field virus infection positive proportional distribution from the examined large scale pig farms of Guangxi Province in different during 2013-2016

本次广西受检猪场均接种了PRV gE 基因缺失疫苗，但近年来受检猪场的PRV野毒感染率却呈逐年上升态势，分析可能与猪场的PR综合防控措施不到位，猪场没有实施PRV净化措施，猪场种猪群带毒，也可能因带毒猪长期免疫因免疫压力产生病毒变异等因素相关，国内已有报道当前可能存在PRV流行毒株出现变异情况[15-17]，这也说明猪场搞好PR防控与净化工作的紧迫性，猪场须做好PR的免疫、检测、淘汰、替换、清群为主要内容的PR防控与净化技术措施。