对临床细菌内毒素检测中血清样本处理方法的比较研究
2018-11-21陈晓佳李红玲林巧辉丁友玲
陈晓佳 李红玲 林巧辉 丁友玲
摘 要 目的：对应用细菌内毒素检测试剂盒（终点显色基质法）（以下简称为“试剂盒”）检测细菌内毒素中的不同血清样本处理方法进行比较。方法：在10名健康志愿者的血清中外加细菌内毒素，然后分别采用高氯酸法、新高氯酸法、碱试剂法和高温稀释法进行处理，最后用试剂盒检测，计算细菌内毒素回收率并进行统计学分析。结果：4种血清样本处理方法的细菌内毒素回收率均在一般鲎试验检测法要求的范围内（50% ～ 200%），但它们在同种外加细菌内毒素浓度下的回收率间均存在显著差异（均P<0.001）。對含不同外加细菌内毒素浓度的血清样本，除碱试剂法的回收率间没有显著差异外，其余3种处理方法的回收率间也均存在显著差异（均P=0.001）。结论：对试剂盒检测，选用碱试剂法处理血清样本的细菌内毒素回收率更适宜且稳定性更好，检测细菌内毒素的准确性更高。碱试剂法应用作试剂盒检测的首选血清样本处理方法。
中图分类号：R446.112 文献标志码：A 文章编号：1006-1533（2018）21-0007-05
Study on the methods for the treatment of serum sample in clinical bacterial endotoxin test
CHEN Xiaojia*， LI Hongling， LIN Qiaohui， DING Youling**
（Fuzhou Xinbei Biochemical Industrial Co.， Ltd.， Fuzhou 350101， China）
ABSTRACT Objective： To evaluate the different methods for the treatment of serum samples with clinical bacterial endotoxin test kit （end-point chromogenic method） （hereinafter referred to as “test kit”）. Methods： Endotoxin was added into the serum samples from ten healthy people and then the samples were treated by different methods such as perchloric acid and its improved type， alkali reagent and high-temperature dilution， respectively. The recovery of endotoxin was calculated and statistically analyzed after determination with the test kit. Results： The spike recovery of endotoxin in the samples treated with different methods were within the range required by the general limulus test method （50%-200%）. However， there were significant differences in the spike recoveries when the same concentrations of spiked endotoxin were added into the samples treated by different methods （P<0.001）. There were also significant differences in the spike recoveries when different concentrations of spiked endotoxin were added into the samples treated with the methods other than alkali reagent （P
3 讨论
感染性疾病是一类临床常见疾病，主要包括革兰阴性菌感染、革兰阳性菌感染、真菌感染、病毒感染和寄生虫感染等。我国每年的感染性疾病患者数达2亿人次，其中革兰阴性菌感染占比较大。革兰阴性菌细胞壁的主要组分为脂多糖，即细菌内毒素，在大部分革兰阴性菌感染患者的血液中均可检出细菌内毒素。
细菌内毒素除引起发热外，还可引起血管扩张、血管通透性增加、中粒性细胞增多和血压下降等，细菌内毒素血症则可引起机体微循环障碍、急性肺损伤、急性呼吸窘迫综合征、弥散性血管内凝血、休克和全身炎症反应综合征等[13]，其中全身炎症反应综合征尚可能诱发多脏器功能障碍综合征和多脏器功能衰竭，也易导致继发性感染发生，从而加重患者的病情。人感染革兰阴性菌后，其血液中往往可检出有一定含量的细菌内毒素。根据血液中细菌内毒素的含量可间接判断是否为革兰阴性菌感染，尤其有利于革兰阴性菌感染的早期诊断。目前，血细菌培养和鉴定是菌血症病原诊断学的“金标准”，但通常需3 d（对少数病原菌甚至需更长时间）才能获得结果，而细菌内毒素检测具有快捷、更易操作的优势，在样本送检数小时后即可获得检测结果，进而帮助早期诊断和正确治疗革兰阴性菌感染[14]。细菌内毒素检测对临床诊治革兰阴性菌感染具有重要意义[15]。
人血清中含有许多蛋白酶、凝血因子和球蛋白等，它们会对鲎试剂与细菌内毒素的反应产生干扰，从而影响检测结果的准确性。因此，在用试剂盒检测细菌内毒素前须先对人血清样本进行适当的处理。从本研究结果可以看出，4种血清样本处理方法的细菌内毒素回收率间均存在显著差异（均P<0.001）。其中，高氯酸法的细菌内毒素回收率为56% ～ 72%，新高氯酸法的细菌内毒素回收率为65% ～ 82%，它们虽均符合一般鲎试验检测法对回收率的要求（50% ～ 200%）[16]，但数值偏低，这是由于强酸处理会不同程度地破坏细菌内毒素的化学结构[17]，从而降低细菌内毒素回收率。此外，高氯酸法和新高氯酸法在3种不同外加细菌内毒素浓度下的细菌内毒素回收率间也均存在显著差异（均P
