蒙医温针对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用△

苏都斯琴 莫日根 李玉棠

(1.内蒙古医科大学2016级硕士研究生，内蒙古 呼和浩特 010010； 2.呼伦贝尔市蒙医医院，内蒙古 海拉尔 021000; 3.内蒙古医科大学附属人民医院,内蒙古 呼和浩特 010010)

缺血性脑血管疾病是严重威胁人类的一种常见病和多发病，是引起人类死亡的三大原因之一。缺血引起脑神经细胞损伤和死亡的作用机制多样、复杂。防治缺血性脑血管疾病是目前人类迫切需要解决的难题[1]。蒙医温针对缺血性脑血管病的治疗作用好，能够改善脑卒中后神经功能缺损症状[2-6]。由于脑缺血后神经元损伤一旦达到不可逆阶段，就无法自然修复，后果严重，因而探讨其有效的防治措施和发病机理，是国内外医学研究的热点和重点[7]。本实验选择凝闭大脑中动脉致大鼠局灶性脑缺血为模型，通过蒙医温针治疗大鼠脑缺血早期作用，探讨其对神经功能缺损、脑梗死体积及对大脑皮层超氧化物岐化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量影响，并进一步探讨蒙医温针防治缺血性脑损伤的机理。

1 材料与方法

1.1 分组 将SD雄性大鼠[体重(280 ±20)g]，由中国解放军医学科学院实验动物中心提供，动物许可证号：SCXK-(军)2007-004。将大鼠在20℃的环境下养7d以上后将大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、药物对照组、常规针刺组、蒙医温针组，16只/组。

1.2 模型制备及干预方法 采用Zea Longa[8]方法并加以改进，制备急性脑缺血再灌注大鼠模型。将大鼠进行假手术前12天禁食，但不禁水。假手术组只分离动脉，不结扎、插线。大鼠清醒后1h 进行治疗。蒙医温针组，选取顶会穴、赫依穴。顶会穴选穴方法：大鼠双耳尖的连线及头顶正中线的交集处。赫依穴选穴方法：位于第七颈椎与第一胸椎间，下凹正中以及左右两侧约5mm处各有一穴位。银针刺入穴位5mm后连接电热针治疗仪(电流为100mA，温度控制为40℃左右)，留针30min；常规针刺组，选取大椎、气海、命门穴位，分别毫针直刺5mm、2mm、4mm，留针30mm，留针期间每隔10min行针1次；药物对照组，按照尼莫地平片10.8mg/(kg.d)剂量，灌胃给药1次。模型组、假手术组：常规饲养，不进行任何干预治疗。

1.3 标本采集与检测 各组相应时段断头处死，快速取手术侧大脑，置液氮中速冻。检测时制成10%脑组织匀浆。SOD活性采用黄嘌呤氧化酶法；LPO含量采用硫化巴比妥酸(TBA)法测定过氧化脂质降解产物中的丙二醛(MDA)。

1.4 统计学方法 数据由SPSS 19.0统计软件，用ANOVA方法来分析多组间的比较。治疗前后的差异由t 检验分析。观测指标的平均数用X±S表达，多组间比较。

2 结果

2.1 治疗前后的变化 见表1.

表1 两种评分方法比较各组神经功能

注：与模型组比较△P>0.05；▲P< 0.05 ， ▲▲P< 0.01

2.2 大鼠MCAO-R脑组织活性变化 见表2。

表2 对大鼠MCAO-R不同时间段的缺血脑组织的MDA， SOD比较±S)

组别MDA(ng/mL)SOD(ug/mL)24h3d7d24h3d7d 假手术组3.23±0.63▲▲3.01±0.85△3.51±0.89▲▲1.15±0.12▲▲1.24±0.36▲▲1.14±0.32△(n=8)(n=8)(n=8)模型组6.58±0.694.28±1.575.09±0.980.22±0.070.29±0.060.91±0.34 (n=9)(n=9)(n=8)药物对照组4.22±0.01▲▲1.97±0.96▲1.75±0.36▲▲0.49±0.05▲0.53±0.04▲1.25±0.27△(n=8)(n=8)(n=8)常规针刺组3.13±0.74▲▲3.38±2.14△3.77±1.01▲0.44±0.03△0.49±0.06△☆1.35±0.09▲(n=10)(n=8)(n=8)蒙医温针组5.18±1.04▲2.08±1.39▲2.39±0.98▲▲0.46±0.05▲0.47±0.04△1.27±0.34△(n=10)(n=9)(n=8)

注：与模型组比较，△P> 0.05; ▲P< 0.05 ; ▲▲P< 0.01

3 讨论

近十几年国内外的研究认为，自由基连锁反应是脑缺血再灌注损伤的最重要原因。许多文献均报道，大鼠脑缺血再灌注过程中，脑组织中SOD活力降低。自由基是指某些原子的外层轨道中有不成对的电子基因，它具有非常活泼的化学性质，可以直接攻击细胞或损伤，产生更多的自由基基因，甚至引起链式反应。目前认为：自由基连锁反应是脑梗塞的核心病理环节。脑缺血时自由基急剧增加，它对细胞的损害作用是引起生物膜不饱和脂肪酸，故更易发生脂质过氧反应并形成大量脂质过氧化物(LPO)，因此测定LPO稳定的代谢产物MDA含量可反映脂质过氧化程度，而超氧化物歧化酶(SOD)是生物体内主要的抗氧化酶一超氧自由基清除剂，SOD活性的高低间接反应了机体细胞受自由基攻击的严重程度[9-13]。

本实验结果显示了脑缺模型大鼠脑组织MDA含量显著高于假手术组织(P<0.01)，表明各个时问段模型组发生了较强的脂质过氧化反应，且随着缺血时间延长，呈持续加重。SOD活性呈下降状态。蒙医温针可明显降低MDA含量，提高SOD活性。推测其作用原理与抑制黄嘌呤氧化酶及稳定线粒体膜结构有关，对SOD活性的影响可能是蒙医温针清除了部分自由基从而减少了SOD的清除。

总之，蒙医温针可以明显对抗大鼠MCAO后自由基的产生，提高机体自由基的清除能力，增强SOD活性，这将有利于缺血神经细胞功能损伤的恢复，对脑缺血的治疗有重要意义。