UV法测定苗药仙鹤草中总黄酮、总酚的含量△

胡志平 王传明 陆廷祥 魏学军

(黔南民族医学高等专科学校，贵州 都匀 580013)

仙鹤草(Agrimonia pilosa Ledeb)为蔷薇科植物龙牙草的干燥地上部分。多生长在上坡草地、路旁及田边。在民间广泛用于治疗吐血、痢疾、腹泻以及外伤出血等疾病[1]。其黄酮、总酚在植物体中广泛存在，称之为二次代谢产物。国内外学者对仙鹤草的研究大多数在生态学、化学成分、对各成分的提取方法、药理及临床作用方面。近年来，对仙鹤草的化学成分研究显示：其全草含有挥发油、黄酮类、总酚类、鞣质类及生物碱类等化合物[2]，目前从仙鹤草中得到的黄酮具有降糖、抗心率失常等药理作用；鹤草酚能降低K562白血细胞的活性，提高癌细胞的凋亡率并且驱虫广且疗效好[3-4]。但有关仙鹤草酚、黄酮物质含量测定方面的研究报道很少，为了在临床上能够合理分配剂量、充分地利用其仙鹤草中黄酮、总酚这类物质，所以寻找能准确测定其黄酮、总酚含量的方法是有必要的。

本试验以芹菜素、没食子酸分别为对照品，通过紫外分光光度法测定仙鹤草黄酮、总酚的含量，并对确定的试验条件从方法学的精密度、稳定性、重复性、回收率等多方面进行验证。望能为合理开发利用仙鹤草多酚类物质提供参考性依据。

1 试验部分

1.1 试验仪器、材料

1.1.1 试验仪器 紫外分光光度计(苏州市莱顿科学仪器有限公司)；电子分析天平(350-8105-000f1)；101-3AB型电热鼓风干燥箱(天津市泰斯仪器有限公司)；FZ102微型植物式样粉碎机(河北黄骅市齐家务科学仪器厂)；501型超级恒温水浴锅(上海试验仪器有限公司)。

1.1.2 药品材料 芹菜素(中国药品生物制品检定所，批号：20170315c)；没食子酸(中国药品生物制品检定所，批号：110831-201605)；甲醇为分析醇；水为蒸馏水；仙鹤草采于贵州省都匀(匀东镇)，经黔南民族医专药学系王传明副教授鉴定为仙鹤草(Agrimonia pilosa Ledeb)。

1.2 试验方法

1.2.1 对照品的制备 芹菜素：精密称取芹菜素0.0047g。置容量瓶中，甲醇定容至25mL，摇匀，配制成0.188mg/mL的对照品溶液。

没食子酸：精密称取没食子酸0.0040g。置容量瓶中，甲醇定容至25mL，摇匀，配制成0.16mg/mL的对照品溶液。

1.2.2 样品溶液的制备 溶液：精密称取仙鹤草粉末约2.0000g，置25mL锥形瓶中，加入8倍量60%的甲醇，连续回流提取3次，每次1h，过滤后合并滤液，将其在60oC恒温水浴锅中蒸干，转移到25mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度线即得。

1.2.3 测定波长的选择 芹菜素：精密移取对照品和仙鹤草样品溶液于10mL容量瓶中，用甲醇定容。分别用紫外分光光度计在200～400nm范围内进行扫描，选择最大吸收波长为。

没食子酸：精密移取对照品和仙鹤草样品溶液于10mL容量瓶中，用甲醇定容。分别用紫外分光光度计在200～400nm范围内进行扫描，选择最大吸收波长为。

1.2.4 标准曲线的绘制 芹菜素：精密移取芹菜素0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL于10mL容量瓶中，甲醇定容配置成不同浓度的标准溶液，从中吸取4mL置于比色皿中，在确定波长处测定吸光度值，见图1。

没食子酸：精密移取没食子酸0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL于5mL容量瓶中，甲醇定容配置成不同浓度的标准溶液，从中吸取4mL置于比色皿中，在确定波长处测定吸光度值，见图2。

2 方法学考察

2.1 精密度试验 总黄酮：精密移取对照品芹菜素溶液，按所确定的方法测定其吸光度(n=5)，结果表明仪器精密度良好，见表1.

表1 总黄酮的精密度

总酚酸：精密移取没食子酸溶液，按所确定的方法测定其吸光度(n=5)，结果表明仪器精密度良好，见表2

表2 总酚酸的精密度

2.2 稳定性试验 总黄酮：取仙鹤草样品溶液，按所确定的方法每隔15min测定一次吸光度。1h内测定其吸光度(n=5)。其结果表明该试验方法对于仙鹤草样品在1h内有良好的稳定性，见表3。

表3 总黄酮的稳定性

总酚酸：取仙鹤草样品溶液，按所确定的方法每隔15min测定一次吸光度。1h内测定其吸光度(n=5)。其结果表明该试验方法对于仙鹤草样品在1h内有良好的稳定性，见表4。

表4 总酚酸的稳定性

2.3 重复性试验 总黄酮：称取同一批仙鹤草2.0g，按所确定的条件提取制备样品溶液，在按确定的方法测定其吸光度(n=5)，见表5.

表5 总黄酮的重复性

总酚酸：称取同一批仙鹤草2.0g，按所确定的条件提取制备样品溶液，在按确定的方法测定其吸光度(n=5)，见表6。

表6 总酚酸的重复性

2.4 回收率试验 芹菜素：精密称取5月采收的仙鹤草1.0000g,6份，加入一定量的对照品，按确定的方法测定吸光度，见表7。

表7 总黄酮的回收率

没食子酸：精密称取6月采收的仙鹤草0.1000g,6份，加入一定量的对照品，按确定的方法测定吸光度，见表8。

表8 总酚酸的回收率

3 样品含量的测定

总黄酮：精密称取各批次样品2.0000g，且每批次3份。按确定的条件提取制备样品溶液，在按确定的方法测定其吸光度，见表9。

表9 总黄酮的含量

总酚酸：精密称取各批次样品2.0000g，且每批次3份。按确定的条件提取制备样品溶液，在按确定的方法测定其吸光度，见表10。

4 结论与讨论

仙鹤草中组成成分较多，提取筛选条件应以多种有效成分为主进行考察。此试验条件是用不同浓度的甲醇、不同时间及次数来提取仙鹤草，通过紫外分光光度计测其含量。筛选出的条件为8倍量60%的甲醇为溶剂、提取3次、每次1h。本试验采用连续回流法提取样品，在该试验条件下建立的测定黄酮及总酚含量的方法都有很好的结果，如仪器精密度好、样品重复性好、得率高。可作为仙鹤草黄酮、总酚含量的测定方法。也为以后仙鹤草新的药理作用的开发及充分利用仙鹤草资源提供依据。

表10 总酚酸的含量