HPLC法测定藏药小檗皮中盐酸小檗碱、盐酸巴马汀的含量△

2018-11-20吉腾飞

中国民族医药杂志 2018年8期

次仁许芳高万吉腾飞*

(1. 西藏藏医学院,西藏拉萨 850000；2. 中草药物质基础与资源利用教育部重点实验室，北京协和医学院&中国医学科学院药物研究所，北京 100050)

藏药小檗皮为小檗科植物小檗(Berberis kansuensis Schneid.)茎或根的内皮，具有清热解毒、燥湿之功，用于治疗痢疾、尿路感染、肾炎及疮疖、结膜炎等疾病。作为藏医常用药材，藏成药小檗眼膏、八味小檗皮丸、四味姜黄汤散中均含有此药。小檗属植物中含有季胺型生物碱小檗碱(berberine)、巴马汀(palmatine)，文献报道的分析方法主要有薄层色谱法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)、毛细管电泳法(CE)等[1-9]。在现行版藏药标准中，仅对该药材的性状、鉴别等生药特性进行描述，暂无化学成分的测定。查阅文献资料，目前仅测定小檗皮中小檗碱的含量[10]，而巴马汀的含量测定未见报道。为此，课题组拟建立HPLC法测定藏药小檗皮中盐酸小檗碱、盐酸巴马汀的含量，为健全藏药质量标准、有效控制藏药质量提供参考依据。

1 仪器与试药

Agilent 1200型高效液相色谱仪(美国惠普公司，DAD检测器)，电子天平(日本AND公司，HA-202M)。

盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110713-200609)；盐酸巴马汀对照品(中国药品生物制品检定所，批号：0732-200005)；小檗皮经西藏藏医学院次仁博士提供并鉴定为小檗科植物甘肃小檗的干燥茎皮。乙腈为色谱纯(Merck公司)，甲醇为色谱纯(Merck公司)，水为去离子水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适用性试验色谱柱为 Aglient XDB C18(4.6mm×50mm，5μm)，流动相为水-乙腈-乙酸-三乙胺(70:30:0.5:0.745)等度洗脱，体积流量1.0mL/min，检测波长345nm，柱温：30℃，进样量10μL。

数据处理：峰面积外标法定量。在此色谱条件下，对照品盐酸小檗碱和盐酸巴马汀峰形对称，小檗皮供试品的色谱中盐酸小檗碱和盐酸巴马汀能与其它成分很好分离。

2.2 对照品储备液的配制精密称取盐酸小檗碱、盐酸巴马汀各2.000mg，分别置10mL 量瓶中，加甲醇溶解定容至10mL，制成0.2mg/mL的对照品储备液。

2.3 供试品溶液的制备称取小檗皮样品粉末0.1g左右，精密称定，加1%盐酸甲醇100mL，超声提取30min，蒸干，加甲醇溶解，转移至25mL容量瓶中，定容，用0.45μm滤膜过滤，作为供试品溶液。

2.4 线性关系考察精密吸取 2.2 项下对照品储备液，制成浓度为40.0、80.0、120.0、160.0、200.0μg/mL的盐酸小檗碱对照品溶液和浓度为1.60、3.20、4.80、6.40、8.00μg/mL的盐酸巴马汀对照品溶液。精密吸取上述对照品溶液10μL，按上述色谱条件，依次注入高效液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积为横坐标对盐酸小檗碱对照品(μg) 绘制标准曲线，得回归方程为：Y = 920.88X-25.221，r2=0.9999，线性范围为0.400～2.000μg。以峰面积为横坐标对盐酸巴马汀对照品(μg) 绘制标准曲线，得回归方程为：Y=31.445X-4.665，r2=0.9999，线性范围为0.016～0.800μg，结果见表1、表2。

表1 盐酸小檗碱的线性关系

表2 盐酸巴马汀的线性关系

2.5 精密度考察精密吸取对照品溶液 10μL，重复进样5次，测定峰面积。测得盐酸小檗碱的RSD为0.19%，盐酸巴马汀的RSD为0.082%。表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性考察取同一供试品溶液，分别于0，4，8，12，16h进样测定，盐酸小檗碱的RSD为0.69%，盐酸巴马汀的RSD为0.82%。表明该供试品溶液在16h内稳定性良好。

2.7 重复性考察精密称取同一样品粉末6份，按2.3项下方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件进行测定，盐酸小檗碱的RSD为0.07%；盐酸巴马汀的RSD为0.003%。

2.8 加样回收率实验精密称取已知盐酸小檗碱、盐酸巴马汀含量的小檗皮样品粉末0.05g，共5 份，加入对照品适量，按2.3项下方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件测定，计算回收率。盐酸小檗碱的加样回收率98.5%，RSD=1.49%；盐酸巴马汀的加样回收率为97.5%，RSD=1.23%，结果见表3、表4。