除湿止带胶囊微生物限度检查法方法的验证

张玉玲 崔 铉 金 健 徐颖梅

（延边州食品药品检验所，吉林 延吉 133000）

1 中成药微生物限度检查法验证的意义

近年来，随着医药卫生知识的普及和医药事业的发展，人们对于药物的要求也越来越高。本课题主要研究中成药微生物限度检查法方法验证，在这次课题研究中，选择除湿止带胶囊为研究对象，通过计数方法适用性试验和控制菌检查法适用性试验，研究除湿止带胶囊的抑菌作用。从而，完成中成药微生物检查法方法的验证。通过本次课题的开展，对我国医药知识的普及和医药事业的发展具有重要意义。随着时代的进步，对中成药微生物限度检查法方法验证的实验操作变得更加先进。医药与人类的身体健康息息相关，了解和认识中成药微生物限度检查法方法验证，能够很好地指导人们辨识药物的抑菌作用，正确选择药品，综合考虑药品的相关作用和基本性能[1]。

在整个实验的准备和进行过程中，每一步实验的顺利进行需要实验者缜密的逻辑思维和严谨、认真的态度。本次实验的开展，内容很多，步骤繁琐，尤其是实验组和对照组的实验，因此，在试验的进行中，保持科学的实验态度非常重要。研究中成药微生物限度检查法方法验证，对人们的日常生活具有很好的指导作用和重要意义。除湿止带胶囊与人类的医药生活密切相关，对其进行微生物限度检查法方法验证，对人类用药具有积极的影响。研究药品的微生物限度检查法，能够保障药品各项指标的标准性，减免因为不慎用药导致的不良反应。总而言之，对中成药微生物限度检查法方法进行验证，不仅能够掌握基本的实验步骤，了解实验方法，而且还能对除湿止带胶囊中的微生物进行检查和验证[2]。

表1 计数方法适用性试验结果

2 除湿止带胶囊计数方法适用性实验及其分析

对中成药除湿止带胶囊进行微生物限度检查法方法验证，首先要进行对其计数方法适用性实验。在计数方法适用性实验中，试验用菌种有：枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉菌、铜绿假单胞菌等。在正式进入计数方法适用性实验之前，要进行菌液的制备，其基本的实验步骤如下：①取经33 ℃培养24 h的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌与枯草芽孢杆菌的胰酪大豆胨液体培养物0.1 mL加入9 mL 0.9%氯化钠溶液中，10倍稀释至约为10000 cfu/mL。②取经23℃培养2 d的白色念珠菌SDB液体培养物0.1 mL加入9 mL 0.9%氯化钠溶液中，10倍稀释至约为10000 cfu/mL。③取经23 ℃培养7 d的黑曲霉SDA斜面培养基，加含0.05%（mL/mL）聚山梨酯80的0.9%氯化钠溶液3 mL，洗下霉菌孢子，取1 mL加入9 mL 0.9%氯化钠溶液中，10倍稀释至约为10000cfu/mL。这些菌液的制备是为了做活菌计数。再制备完菌液之后，要进行供试液的制备。其基本步骤如下：取本品（除湿止带胶囊）10 g置锥形瓶中，加入pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液之100 mL，置于45 ℃水浴中振摇使分散均匀，即为1ı10的供试液。

在菌液和供试液制备完毕后，正式进入计数方法适用性实验。分别设置5个试验组：试验组（1）取1ı10供试液10 mL，加入金黄色葡萄球菌菌液0.1 mL混匀，取1 mL注入平皿中，平行制备2个平皿，注入15～20 mL胰酪大豆胨琼脂培养基，混匀，凝固后，倒置培养。置30～35 ℃培养3 d。试验组（2）取1ı10供试液10 mL，加入铜绿假单胞菌菌液0.1 mL混匀，取1 mL注入平皿中，平行制备2个平皿，注入15～20 mL胰酪大豆胨琼脂培养基，混匀，凝固后，倒置培养。置30～35 ℃ 33 ℃培养3 d。试验组（3）取1ı10供试液10 mL，加入大肠埃希菌菌液0.1 mL混匀，取1 mL注入平皿中，平行制备2个平皿，注入15～20 mL胰酪大豆胨琼脂培养基，混匀，凝固后，倒置培养。置30～35 ℃培养3 d。试验组（4）取1ı10供试液10 mL，加入白色念珠菌菌液0.1 mL混匀，取1 mL注入平皿中，平行制备2个平皿，注入15～20 mL沙氏葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固后，倒置培养。置20～25 ℃培养5 d。试验组（5）取1ı10供试液10 mL，加入黑曲霉菌液0.1 mL混匀，取1 mL注入平皿中，平行制备2个平皿，注入15～20 mL沙氏葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固后，倒置培养。置20～25 ℃培养5 d。每一个试验组培养完毕后，观察并计数。

然后再取试验菌，进行实验，称为菌液组：分别取金黄色葡萄球菌菌悬液0.1 mL，加入10 mL pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液，混匀，取1 mL注入平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基15～20 mL，混匀，凝固，每株试验菌平行制备2个平皿；置30～35 ℃培养3 d，观察结果并计数。枯草芽孢杆菌和铜绿假单孢菌也是进行相同的实验，培养3 d，观察结果并计数。

对于白色念珠菌而言，分别取白色念珠菌菌悬液0.1 mL，加入10 mL pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液，混匀，取1 mL注入平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基15～20 mL，混匀，凝固，每株试验菌平行制备2个平皿；置20～25 ℃培养5 d，观察结果并计数。对于黑曲霉菌来说，分别取黑曲霉菌菌悬液0.1 mL，加入10 mL pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液，混匀，取1 mL注入平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基15～20 mL，混匀，凝固，每株试验菌平行制备2个平皿；置20～25 ℃培养5 d，观察结果并计数。

在试验中，常常需要进行对照实验，对照实验是为了保证实验的真实性和可靠性，减免实验误差。因此，在对照试验中，有如下步骤：取1ı10的供试品溶液1 mL注入平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基15～20 mL，混匀，凝固，每株试验菌平行制备2个平皿；置30～35 ℃培养3 d，观察结果并计数。取1ı10的供试品溶液1 mL注入平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基15～20 mL，混匀，凝固，每株试验菌平行制备2个平皿；置20～25 ℃培养5 d，观察结果并计数[3]。

在试验组和对照组的实验中，观察结果计数以后，要通过计算回收率来分析计数方法适用性试验。然后将数据进行总结和归纳，得出结论。回收率的计算公式如下：

实验组的平均菌落数—供试品对照组的平均菌落数

试验组的菌液回收率%=——×100%菌液组平均菌液数

经过上述的除湿止带胶囊微生物计数方法适用性试验，得出以下的结论：铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉回收率试验均在0.5～2，因此需氧菌总数，霉菌和酵母菌总数可采用上述方法测定。在完成除湿止带胶囊微生物计数方法适用性实验后，进行其控制菌检查法适用性实验。

总结：本次课题的研究，以除湿止带胶囊中的微生物为研究对象，以《中国药典2015年版》为指导，进行中成药微生物限度检查法方法验证。实验中包括两个大步骤，分别是计数方法适用性试验和控制菌检查法适用性试验，最后得出结论。通过本次课题的开展，对中成药微生物限度检查法方法有了一个基本的认识和了解。