血清幽门螺杆菌HpaA抗体与胃癌风险关系的研究

张 冰，李 环

(北华大学医学院,吉林 吉林 132013)

胃癌是最为常见的消化道恶性肿瘤，虽然胃癌的发病率在全球已呈现逐步降低的趋势[1]，它仍是亚洲最常见的癌症相关死亡的主要原因[2]。胃癌的发生是幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染、宿主和环境因素以及其他因素(如饮食和遗传)共同作用的结果，其中细菌本身的致病能力在Hp致病过程中起重要的作用。早在1994年，Hp就被世界卫生组织列为I类致癌原[3]。在过去几十年中，大量流行病学研究已明确Hp感染与胃癌之间的关系。然而Hp感染的病人中仅有一小部分人会发生比较严重的临床结局，如胃溃疡(10%)、萎缩性胃炎(5%)和胃的恶性肿瘤(2%)[4]。有研究表明这些不同的结局可能与Hp感染菌株的毒力因子有关[5]。幽门螺杆菌毒力因子(Helicobacter pylori adhesin A,HpaA)为Hp 所特有，存在于所有菌株中。是与宿主细胞特异性受体结合的亚单位,具有黏膜结合特性[6]。目前关于其与胃癌发病风险之间的研究鲜有报道，因此本研究用酶联免疫吸附方法(ELISA)检测其抗体滴度，揭示Hp HpaA与胃癌发病风险之间的关系,为胃癌的病因研究提供新的线索。

1 对象与方法

1.1 研究对象

本研究纳入研究对象共179人，其中病例组86例来自于哈尔滨医科大学附属第三医院经临床新确诊的胃癌病例；对照组来自于哈尔滨市香坊区疾病预防控制中心的健康体检的人93例。

1.2 问卷调查

采用自行设计的问卷，经严格、统一培训的调查员对研究对象进行面对面询问调查，并签署知情同意书。调查问卷内容包括一般人口学指标及主要相关的疾病暴露因素。完成后将调查表上的数据及时的录入Epidate数据库。采集研究对象静脉血5 mL。

1.3 实验室ELISA检测

应用间接ELISA方法检测HpaA蛋白的抗体滴度，用HpaA蛋白稀释浓度为0.25 mg/L包被96孔酶标板，4 ℃过夜；PBST洗涤液洗板3次后，加入200 μL 10%的山羊血清封闭液，37 ℃水浴2 h；弃封闭液，每孔中加入已稀释3200倍的血清100 μL，而空白对照组每孔加入100 μL血清稀释液，37 ℃水浴1 h；同上洗涤3次后，每孔加入100 μL已稀释的(稀释比例1∶5000)二抗辣根酶标记的羊抗人IgG， 37 ℃水浴30 min；同上洗涤3次后，每孔中加入TMB显色液100 μL，37 ℃避光水浴15 min；加入等体积的1 mol/L硫酸溶液终止反应，立即于450 nm处用酶标仪测定各孔的吸光度值(OD)。

1.4 统计学分析

采用SPSS22.0软件进行统计分析，以双侧P<0.05为有统计学意义，采用χ2检验来分析研究对象的基本情况；应用非条件logistic回归方法估计抗体血清阳性率与胃癌之间的OR值和95%可信区间(95% CI)；χ2趋势检验用于评估抗体水平与胃癌之间的剂量反应关系。约登指数最大值处的OD值作为筛查胃癌的最佳截断值(cut-off)值，灵敏度、特异度及受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve， ROC曲线)下面积用来分析和评价目的蛋白作为Hp相关胃癌生物标志物在胃癌血清学筛查中的应用价值。

2 结 果

2.1 研究对象的基本情况

病例组与对照组经χ2检验，性别及受教育程度在病例组与对照组之间的分布均无统计学差异(P=0.328；P=0.656)。而在年龄、胃癌家族史、吸烟情况、饮酒情况、幽门螺杆菌感染情况，经χ2检验两组差异存在统计学意义(P<0.05)。

2.2 血清HpaA抗体与胃癌之间的关系

2.3 ROC曲线结果

根据血清HpaA抗体滴度的情况，在全部受试者人群中，绘制ROC曲线，其曲线下面积分别为0.762，如图1所示。HpaA抗体最佳cut-off值为0.3471，得到的灵敏度为81.40%，特异度为63.40%。

表 1 人群HpaA抗体血清阳性率与胃癌发病风险之间关系

表 2 全人群血清HpaA抗体水平与胃癌发病风险之间关系

表 3 Hp阳性血清HpaA抗体水平与胃癌发病风险之间关系

表 4 Hp阴性血清HpaA抗体水平与胃癌发病风险之间关系

图 1 在全人群中HpaA抗体滴度测定的ROC曲线

3 讨 论

胃癌的最终发生是一个多因素共同参与的过程， Hp感染的人中绝大部分都是无症状的病人。这就使恶性肿瘤的病人常常诊断在进展期，且这些病人5年的存活率<10%[7]。虽然，Hp感染是胃癌的高风险因子，Hp植入的个体中却只有很少的一部分发展成了胃癌[2]，这表明，Hp菌株毒力的差异对于胃癌的病因学起到主要的作用[8-9]。许多研究者对Hp的毒力因子进行了研究，以期望能够鉴定它们与胃癌临床结果之间的相关性。目前大部分调查集中在以下几种因素：细胞毒素相关基因蛋白(CagA)、空泡毒素(VacA)、血型抗原结合黏附素(BabA)、外炎性蛋白(OipA)以及十二指肠溃疡产生基因(DupA)[10]。却很少有流行病学的研究来鉴定Hp其他潜在的毒力因子。黏附素基因HpaA为Hp所特有，几乎存在于所有临床分离的菌株中。动物实验已证明，HpaA是Hp定植的必要因子[6]。本研究通过病例对照研究了在人群中Hp HpaA血清抗体和胃癌发病风险之间的关系。

在本研究中，商业化的ELISA方法用来检测Hp感染的状态。然而，商业化的ELISA血清学不能检测之前感染Hp的胃癌病人，例如，CagA抗体在那些血清学测试为阴性的病人中却是阳性的。因为CagA抗体与抗Hp抗体相比在很长的时期内仍然可保持阳性[11]。因此，阴性Hp血清学试验不能排除之前感染暴露的可能性。为了排除这些对实验结果可能存在的潜在影响，本研究同时也在Hp 阴性人群以及全人群中分析观察了Hp HpaA与胃癌风险之间的关联。结果表明应该更多的关注抗体滴度和血清阳性率。同时，分析发现病例组HpaA抗体水平的中值高于对照组，Hp HpaA的高抗体效价可能是一个胃癌发展的危险因素。

研究发现，无论在全人群、Hp阳性人群以及Hp阴性人群中HpaA与胃癌的风险之间均存在显著相关，HpaA抗体在Hp阳性人群的血清阳性率增加胃癌风险高达9.74倍。进一步的研究显示，HpaA抗体水平与胃癌风险之间存在剂量反应关系。为了验证是否HpaA能够作为筛查胃癌的生物标志物，我们绘制了ROC曲线。一般来说，AUC值在0.5～0.7间被认为准确度是低的，0.7～0.9有较好的准确性。高于0.9是高准确性的[12]。结果表明，在全部受试者中，HpaA曲线下面积是0.726，准确性较好，得到的灵敏度为81.40%，特异度为63.40%。提示HpaA可能作为一种新的血清生物标志物用于胃癌的筛查。

综上所述，HpaA抗体血清阳性率与胃癌发病风险之间均存在显著关联,且其抗体水平与胃癌风险之间存在剂量反应关系。HpaA可能成为一个新的、理想的Hp相关的胃癌血清生物标志物。这一发现为早期胃癌的筛查提供了理论依据，并为胃癌的病因研究提供了新的线索 。