两种载体在洗涤剂抑菌效果试验中的应用研究

姚海航 于 文

（西安开米股份有限公司，陕西 西安 710075）

QB/T 2738-2012《日化产品抗菌抑菌效果的评价方法》中，用抑菌环法检测洗涤剂的抑菌率，标准中要求所用载体为新华一号定性滤纸，而新华定性滤纸分为定性快速滤纸、定性中速滤纸、定性慢速滤纸。文章研究了定性快速滤纸和定性慢速滤纸对同一实验结果的影响，以期望对标准加以完善。

1 实验与方法

1.1 实验仪器及试剂

1.1.1 实验设备

生物安全柜，型号：BSC-1100II A2-x，济南鑫贝西生物技术有限公司；抑菌剂载体（5mm直径圆形新华定性快速滤纸片和定性慢速滤纸片，经压力蒸汽灭菌处理后，置120o烤干2h，保存备用）；恒温生化培养箱，上海一恒科技仪器有限公司；TYJ-2A菌落计数器，上海宏汇电器厂；涡旋仪，海门市其林贝尔仪器制造有限公司；微量移液器（5mL-50mL，可调式）；游标卡尺，成都量具刃具总厂；玻璃平板；接种环；玻璃试管；棉拭子；刻度吸管5mL、1mL。

1.1.2 生化试剂

营养琼脂培养基（pH7.2～7.4），北京路桥技术有限公司；营养肉汤培养基（pH7.2～7.4），北京路桥技术有限公司；磷酸盐缓冲溶液（PBS，0.03mol/L，pH7.2）；标准硬水（硬度342mg/L）。

1.2 实验菌种

试验菌株为大肠埃希菌（ATCC 25922）、金黄色葡萄球菌（ATCC 6538），均来源于中国普通微生物菌种保藏管理中心[3]。

1.3 试验样品

9个样品均采购于大型超市，且标贴宣称具有抑菌功能的洗手液、洗衣液、餐具净的产品。

2 试验方法

2.1 菌悬液的配制[3]

取实验菌种（5代）其24h的新鲜培养物，在生物安全柜里用接种环挑取一定量的菌落于营养肉汤培养基的试管中，震荡摇匀，再用装有一定量的PBS试管进行稀释。要求浓度为：取0.1mL滴入5.0mL PBS液内，回收菌数在1×104～9×104cfu/mL备用。

2.2 操作程序[1]

2.2.1 抑菌片的制备

分别取无菌干燥的直径为5mm的滤纸片（定性快速滤纸和定性慢速滤纸），每片滴加实际使用样品浓度溶液20mL，然后将滤纸片平放于清洁无菌的平板中，开盖置于恒温生化培养箱（37℃）中烘干，备用。

2.2.2 阴性对照样片的制备

取无菌干燥的直径为5mm的滤纸片（定性快速滤纸和定性慢速滤纸），每片滴加无菌纯水20mL，干燥后备用。

2.2.3 染菌平板的制备[2]

用无菌棉拭蘸取浓度为1×104～9×104cfu/mL试验菌悬液500mL，在营养琼脂培养基平板表面上均匀涂抹3次，每次涂抹转动平板60o。最后将棉拭子绕平板边缘涂抹一周。盖好平板，置于室温干燥5min。

2.2.4 样片的贴放

用无菌镊子取抑菌样片贴放染菌平板表面，每个平板放4片试验样片，1片阴性对照，共计5片。各样片中心距离25mm以上，与平板边缘相聚15mm以上。贴好以后，用无菌镊子轻压样片，使其紧贴于平板表面。盖好平皿，将平板倒置在37℃的生物培养箱中，培养16h～18h观察结果。用游标卡尺测量抑菌环的直径（包括样片）并记录。试验重复3次。

3 结果

抑菌环实验结果表明：日化产品在用不同的载体（定性慢速滤纸比定性快速滤纸）测试，抑菌环直径有差异（表1）。

从表1可知：对于液体洗涤剂、洗手液和餐具清洁剂类产品，对于金黄色葡萄球菌和大肠杆菌而言，慢速定性滤纸的抑菌圈均大于快速定性滤纸的抑菌圈。

4 结论

试验结果发现：抑菌环试验法因载体的不同，对同一产品的抑菌效果存在明显差异，采用定性慢速滤纸作为载体的抑菌效果优于定性快速滤纸。对同一产品，均采用QB/T 2738-2012《日化产品抗菌抑菌效果的评价方法》进行抑菌环测试，采用不同的载体，可能会出现不同的实验结果。该标准在后续的修订过程中，应对载体所用的滤纸做出明确的规定，以保证实验的一致性。

表1 日化产品抑菌试验结果