补气养阴颗粒对特发性血小板减少性紫癜模型小鼠淋巴细胞亚群的影响

李 琳 丁云录 张莲珠 张明天 初洪波 牛春风

(长春中医药大学附属医院，吉林 长春 130021)

特发性血小板减少性紫癜是血液系统常见病，发病率逐年增高，西医主要以糖皮质激素与免疫调节剂联合治疗，存在疗效差，病情反复，副作用大的缺点，中成药在治疗该疾病时优势明显，标本同治〔1～4〕。补气养阴颗粒是以气阴两虚理论为指导，以人参为基源研发的用于特发性血小板减少性紫癜治疗的中药复方制剂，临床应用疗效极佳。本研究主要观察补气养阴颗粒对特发性血小板减少性紫癜模型小鼠淋巴细胞亚群的影响。

1 材料与方法

1.1实验材料 BALB/c小鼠，18～22 g，雌雄各半。动物合格证号：SCXK-(吉)2011-0004，购于长春市亿斯实验动物技术有限责任公司。药品及试剂：补气养阴颗粒，性状：棕褐色颗粒，批号：20141201，由长春中医药大学植物化学研究中心提供。豚鼠抗小鼠血小板血清(GP-APS)，北京西苑医院血液病研究室提供。归脾丸，规格：200丸/瓶，每8丸相当于原生药3 g，批号：160209，仲景宛西制药股份有限公司产品。灭菌注射用水，规格：2 ml/支，批号：1605418，国药集团容生制药有限公司。红细胞裂解液、同型对照抗体、分化簇(CD)3-多甲藻黄素叶绿素蛋白(PercP)、CD4-异硫氰酸荧光素(FITC)、CD8-藻红蛋白(PE)、CD61-PE(美国BD)。仪器及器材：一次性使用人体静脉血样采集容器，规格2 ml/支，批号：20161008，河北祥远医疗器械股份有限公司。流式细胞仪，型号:FACS ARIA Ⅱ，美国BD公司。倒置荧光显微镜，型号:IX71，日本OLYMPUS，超纯水器，型号:Mili Q，美国Millipore。离心机，型号:LD5-2B，北京雷勃尔离心机有限公司。电子天平，型号:BSA224S，赛多利斯科学仪器(北京)有限公司。恒温磁力搅拌器，型号:JB-3A，雷兹互感器(上海)有限公司。

1.2动物造模与分组〔5～9〕特发性血小板减少性紫癜模型小鼠：将BALB/c小鼠适应性饲养3 d后，按体重随机分为对照组，模型组，阳性组(归脾丸3.5 g/kg)，补气养阴颗粒12 g/kg、6 g/kg、3 g/kg 3个剂量组。于第1，3，5，7，9，11天分别腹腔注射1∶6 GP-APS，每只0.1 ml(对照组注射0.1 ml蒸馏水)。给药，从第1次注射后开始灌胃至造模后第14天。每2天称重1次，以调整给药量。

1.3淋巴细胞亚群检测 取小鼠乙二胺四乙酸(EDTA)-K2抗凝全血100 μl至流式管中，空白对照管不加荧光抗体，同型对照管加入同型对照荧光抗体，样品管加入荧光标记的抗体CD3-PercP、CD4-FITC、CD8-PE，混匀，室温避光孵育 20 min；取出试管，每管加入2 ml 1倍红细胞裂解液，立即轻轻涡旋混匀，室温避光孵育15 min，1 200 r/min离心5 min，弃去上清液；每管加磷酸盐缓冲液(PBS)2 ml洗涤，涡旋混匀，1 200 r/min离心5 min，弃去上清液，每管加0.5 ml PBS，混匀，1 h内上机检测。

1.4统计学方法 应用SPSS21.0统计软件进行t检验。

2 结 果

2.1各组淋巴细胞亚群统计结果 与模型组比较，补气养阴颗粒6 g/kg和3 g/kg组CD8+T细胞数量明显减少(P<0.01)，而CD4+/CD8+比值显著提高(P<0.01)。见表1，图1。

2.2不同性别小鼠淋巴细胞亚群统计结果 与对照组比较，雌性小鼠模型组CD3+、CD4+、CD8+T细胞数量显著降低(P<0.01，P<0.05)，补气养阴颗粒12 g/kg和6 g/kg有增加雌性小鼠体内CD4+T细胞的趋势，但差异无显著性。雄性小鼠模型组CD3+、CD8+T 细胞数量明显高于对照组(P<0.05)，与模型组比较，雄性小鼠补气养阴颗粒6 g/kg可明显降低CD3+、CD4+T 细胞数量(P<0.01，P<0.05)。与模型组比较，雄性小鼠补气养阴颗粒6 g/kg及3 g/kg组CD8+T细胞显著降低，CD4+/CD8+比值显著升高(P<0.01，P<0.05)。见表2。

表1 各组对淋巴细胞亚群的影响

与模型组比较：1)P<0.01

表2 各组不同性别小鼠淋巴细胞亚群的变化

与模型组比较：1)P<0.05；2)P<0.01

3 讨 论

正常机体中各T淋巴细胞亚群相互作用，维持着机体的正常免疫功能。当不同淋巴细胞亚群的数量和功能发生异常时，机体就可导致免疫紊乱并发生一系列的病理变化〔10,11〕。CD4+T 细胞即辅助T 细胞，具有协助体液免疫和细胞免疫的功能，也有部分细胞具有免疫抑制和细胞毒作用；CD8+T 细胞即细胞毒性T 细胞，具有细胞毒作用，能够特异杀伤靶细胞〔12,13〕。本实验结果表明，补气养阴颗粒具有维持机体免疫功能稳定的作用，当机体T细胞数量异常减少时，补气养阴颗粒能够温和地增加T细胞数量，反之，当机体中T细胞数量异常增多时，补气养阴颗粒又可以减少T细胞数量，从而使机体处于相对稳定的免疫状态。