虾青素、万寿菊粉对狮子头金鱼生长、血液指标及免疫力的影响

2018-11-07曲木张宝龙于恩浩黄建赵国营翟胜利

生物化工 2018年5期

曲木，张宝龙，于恩浩，黄建，赵国营，翟胜利＊

（1.天津现代晨辉科技集团有限公司，天津市水族动物功能性饲料企业重点实验室，天津 301800；2.天津市宝坻区畜牧水产业发展服务中心，天津 301800）

随着社会经济的不断发展，人民的生活水平不断提高，喜欢饲养观赏鱼的人越来越多。狮子头金鱼（Red lion-head goldfish）隶属鲤形目（Cypriniformes）鲤科（Cyprinidae）鲫属（Carassius），以其头部丰满的肉瘤闻名。近年来，其养殖范围日趋广泛，相关的着色研究也逐渐增多，而关于着色剂对其血液及免疫力方面的影响鲜有研究，但鱼体健康程度可直接影响其体表颜色、降低其观赏价值[1]。万寿菊（Tagetes erecta）为菊科万寿菊属一年生草本植物，含有丰富的天然色素——叶黄素[2]。万寿菊在园林绿化、食品着色、化妆品、烟草、医疗及禽类饲料中广泛应用，开发潜力巨大[3-4]。虾青素是一种在水产养殖上被广泛应用的粉红色的晶体，为类胡萝卜素的一种，许多学者通过动物和临床实验证明虾青素具有抑制肿瘤发生、增强免疫功能、提高肌肉性能等多方面的生理功能，具有广阔的前景[5-7]。本试验以狮子头金鱼为试验对象，通过饲喂含有不同水平的万寿菊粉和虾青素的饲料，研究其生长、血液指标及免疫力的变化情况，旨在筛选出狮子头金鱼饲料中二者的适宜添加水平，为研制狮子头金鱼提升免疫力饲料提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验用鱼

试验用狮子头金鱼购自天津市金水族水产养殖有限公司。鱼体消毒后，暂养1周，挑选体格健壮、规格一致（15.63±0.22）g的狮子头金鱼720尾，随机分为9个处理组，每组4个重复，每个重复20尾鱼。试验在天津现代晨辉科技集团有限公司循环水试验室进行。

1.2 饲养管理

养殖箱长0.78m、宽0.58m、高0.47 m，有效水体积为150L。养殖过程中每天投喂两次，投饲量为鱼体质量的3%～6%，随狮子头金鱼生长状况及吃食情况调整。投喂时间为每天的09:00和15:00。定期检测水质，每天记录水温、死亡条数及投饵量。每天换一次水，一周清洗循环水缸一次，20天清洗一次养殖水缸。试验周期为56天。

1.3 试验饲料

以万寿菊粉（叶黄素含量2%）、虾青素（有效含量10%）为影响因素，采用双因素试验设计中的3×3因子设计，设计9种饲料，每个因素各设3个水平，分别为万寿菊粉（0.38%、0.76%、1.52%）、虾青素（0.04%、0.08%、0.16%），依次记为Diet 1，Diet 2，Diet 3，Diet 4，Diet 5，Diet 6，Diet 7，Diet 8，Diet 9。以不含任何增色剂的基础饲料做对照饲料，见表1。

1.4 测定指标和方法

1.4.1 饲料不同水平添加剂狮子头金鱼生长的影响

增重率、特定生长率、饵料系数、蛋白质效率、肝体指数的测定公式如下：

式中，Wt为终末体重（g）；W0为初始体重（g）；t为试验天数（d）；F为饲料摄入量干重（g）；CP为饲料粗蛋白含量（%）。

1.4.2 饲料不同水平添加剂对狮子头金鱼免疫指标的影响

试验56天后，将试验鱼解剖，从鱼尾柄腹侧处抽血，将血液注入标记好的离心管中，4℃冰箱内静置4～8 h后在4℃、以4200 r/min转速离心10 min，离心后吸取上层血清放置干净的离心管中，置于-20℃保存备用。测定生理指标时，取出组织，在冰浴条件下用研磨器手动匀浆，离心，离心机设置与血液离心相同，吸取上清液放置在干净的离心管中，进行各指标的测定。

表1 饲料配方

2 结果与分析

2.1 饲料不同水平添加剂对狮子头金鱼生长的影响

由表2、表3、表4可知，饲料中添加不同水平的万寿菊粉、虾青素狮子头金鱼生长性能有显著影响（P＜0.05）。增重率在Diet 2最高，与Diet 9差异不明显（P＞0.05），但显著高于其他饲料组（P＜0.05）；特定增长率、蛋白质效率在Diet 9最高，Diet 2与之差异不显著（P＞0.05），但显著高于其他组（P＜0.05）；饵料系数最低值在Diet 2，与Diet 9差异不显著（P＞0.05），但显著低于其他组（P＜0.05）；肝体指数在Diet 3组最低，与Diet 1、Diet 2、Diet 6、Diet 9饲料组差异不显著（P＞0.05）。万寿菊粉水平对狮子头金鱼肝体指数有显著影响（P＜0.05），最优水平为1.52%；万寿菊粉和虾青素及其交互作用对其他指标无显著影响（P＞0.05）。

2.2 饲料不同水平着色剂对狮子头金鱼血液指标的影响

由表5、表6、表7可知，饲料中添加不同水平的万寿菊粉、虾青素对狮子头金鱼血液指标有显著影响（P＜0.05）。甘油三酯受着色剂的影响不显著（P＞0.05）；血清总胆固醇含量在Diet 1饲料组最低，与Diet 2、Diet 5、Diet 9饲料组无显著差异（P＞0.05），但是显著低于其他组（P＜0.05）；高密度值蛋白胆固醇含量最高值出现在Diet 9饲料组，与Diet 2、Diet 7、Diet 8饲料组差异不显著（P＞0.05）；低密度脂蛋白胆固醇最低值出现在Diet 2饲料组，与Diet 1、Diet 9饲料组差异不显著（P＞0.05），但是显著低于其他组（P＜0.05）。万寿菊粉水平对血清总胆固醇含量及高密度值蛋白胆固醇含量影响显著（P＜0.05），最优水平均为1.52%。万寿菊粉、虾青素及其交互作用对狮子头金鱼其他血液指标无显著影响。

2.3 饲料不同水平添加剂对狮子头金鱼免疫指标的影响

由表8、表9、表10可知，饲料中添加不同水平的万寿菊粉、虾青素对狮子头金鱼免疫指标GOT、GPT活性有显著的影响（P＜0.05），血清中GOT活性在Diet 6最低与Diet 2、Diet 8、Diet 9差异不显著（P＞0.05），但显著低于其他组（P＜0.05）；肝胰脏在Diet 9最低，与Diet 2、Diet 1差异不显著（P＞0.05），但显著低于其他组（P＜0.05）。GPT中血清含量在Diet 9最低，与Diet 6差异不显著（P＞0.05），但显著低于其他组（P＜0.05）；肝胰脏在Diet 6最低，与Diet 2差异不显著（P＞0.05），但显著低于其他组（P＜0.05）。万寿菊粉水平对肝胰脏中GOT活性有显著影响（P＜0.05），最优水平分别为0.38%、0.38%、1.52%；万寿菊粉、虾青素及其交互作用对狮子头金鱼血清及肝胰脏中其他指标无显著影响（P＞0.05）。

表2 各组饲料对狮子头金鱼生长指标的影响

表3 各组饲料对狮子头金鱼生长指标的影响的主体间效应检验

表4 各组饲料对狮子头金鱼生长指标的影响的Two-way ANVOA

表5 各组饲料对狮子头金鱼血液指标的影响

表6 各组饲料对狮子头金鱼血液指标的影响的主体间效应检验

表7 各组饲料对狮子头金鱼血液指标的影响的Two-way ANOVA

表8 各组饲料对狮子头金鱼组织中GOT、GPT活性的影响

表9 各组饲料对狮子头金鱼组织中GOT、GPT活性的影响的主体间效应检验

表10 各组饲料对狮子头金鱼组织中GOT、GPT活性的影响的Two-way ANOVA

3 讨论

3.1 饲料不同水平添加剂对狮头金鱼生长的影响

虾青素是一种酮式类胡萝卜素，属于萜烯类不饱和化合物，能够促进养殖对象的生长、存活[7]。孙刘娟等报道了虾青素对血鹦鹉的生长有显著促进作用[8]，王鲁波等指出，一定浓度的万寿菊叶黄素对黄颡鱼的生长表现出促进作用[9]。本试验也发现了类似的情况，在饲料中添加虾青素和万寿菊粉后，各试验组狮子头金鱼的增重率、特定生长率、饵料系数和蛋白质效率均有所升高，其中Diet 2和Diet 9组增重率显著高于对照组。肝指数是评价鱼体健康程度的重要指标，较低的肝指数可以说明鱼体的肝脏负荷在其自身肝功能调节的可控范围内。谢家俊[10]发现，在饲料中添加虾青素后，卵形昌鯵幼鱼的肝体比和肥满度大体呈下降的趋势。本试验结果与上述研究相类似，即添加不同含量的虾青素和万寿菊粉对狮子头金鱼内脏比和肝体比无显著影响。

3.2 饲料不同水平添加剂对狮头金鱼血液指标的影响

TG、TC、HDL-C、LDL-C都是反映机体脂类代谢的指标。甘油三酯是机体内存在最多的脂类，其含量升高与动脉样硬化性心血管疾病密切相关，胆固醇是血液中所有蛋白质所含胆固醇之和，高密度脂蛋白胆固醇主要是由肝脏合成，其可以抗动脉粥样硬化，减少患冠状动脉心脏病的危险，低密度脂蛋白胆固醇含有大量的不饱和脂肪酸，其含量越高，机体患动脉粥样硬化、冠心病等心血管疾病的概率越大。王述浩等[11]报道饲料中添加万寿菊粉提高了肉鸡血清高密度脂蛋白水平，降低了血清胆固醇和低密度脂蛋白水平。本实验也发现了类似的情况，当饲料中万寿菊粉、虾青素水平为0.38%、0.08%时，狮子头金鱼血液中高密度脂蛋白胆固醇最高，而低密度脂蛋白胆固醇含量最低，表明在饲料中添加万寿菊粉和虾青素可以维持鱼体血脂平衡、保持鱼体健康。

3.3 饲料不同水平添加剂对狮子头金鱼免疫的影响

GOT是转氨酶的一种，主要存在于肝细胞的线粒体内，是医学临床上肝功能检查的指标，用来判断肝脏是否受到损害。当肝脏发生严重坏死或破坏时，会引起谷草转氨酶在血清中浓度偏高，所以谷草转氨酶高更能反映肝细胞受损伤的严重程度。GPT主要存在于肝脏、心脏组织细胞中，当这些组织发生病变时，该酶活力增多。付媛媛在饲料中添加黄芪和虾青素显著提高中国对虾的免疫相关酶活，增强非特异性免疫功能及降低中国对虾对病原的敏感性，增强机体抗病能力[12]。海璇隽等[13]也报道了虾青素可提高小鼠的非特异性免疫和体液免疫功能。本试验中，在饲料中添加万寿菊粉和虾青素后，各试验组狮子头金鱼的免疫指标均有所提升。