胆道闭锁患儿血清uPAR的检测及与ALT，AST，GGT水平的相关性研究

吕艳关，夏顺林，朱 婷

(扬州大学附属淮安市妇幼保健院 a.检验科；b.小儿外科，江苏淮安 223002)

胆道闭锁(biliary atresia，BA)是一种常见的儿童胆道疾病，其临床表现主要为胆管的渐进性炎症损伤，进而导致肝功能受损和肝内外胆管的纤维炎性闭塞[1]。如果治疗不及时，可迅速发展为终末期肝硬化，严重威胁儿童健康。尿激酶纤溶酶原激活物受体(urokinase plasminogen activator receptor，uPAR)是一种单链膜结合蛋白，由广泛的免疫细胞和内皮细胞表达，目前研究显示，急性肝功能衰竭、慢性肝病、非酒精性脂肪肝均存在高水平循环uPAR[2～4]。ALT，AST和GGT是临床用于诊断肝胆疾病的重要转氨酶，也是重要的肝功能检查项目。本研究检测胆道闭锁患儿血清uPAR的表达量及与ALT，AST，GGT水平的相关性，探讨血清uPAR对胆道闭锁及肝功能异常是否具有一定的预测评估价值。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选取2015年1月～2018年3月在淮安市妇幼保健院小儿外科住院治疗的胆道闭锁患者25例，男∶女=13∶12，年龄3月～10岁；同时选取我院健康体检儿童25例作为正常对照组，男∶女=11∶14，年龄3月～10岁。两组之间年龄、性别构成比差异均无统计学意义(F=0.081，P=0.65；χ2=0.325，P=0.763)。入选标准：胆道闭锁组患儿诊断均经手术后病理切片证实。

1.2 试剂和仪器 贝克曼AU5800生化分析仪及其配套试剂；uPAR试剂盒(ELISA)购于北京冬歌生物有限公司。

1.3 方法 采集所有研究对象外周静脉血3 ml，4℃条件下4 000 r/min离心15 min，将分离出的血清于-80℃冰箱保存。采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)定量检测各组血清uPAR浓度；血清ALT，AST，GGT水平检测采用贝克曼AU5800生化分析仪(A450 nm)；所有操作严格遵守仪器作业指导书(SOP)。

2 结果

2.1 两组血清中uPAR，ALT，AST及GGT表达水平比较 BA组和对照组血清uPAR表达水平分别为6 059.3±418.1 pg/ml和4 384.4±299.7 pg/ml，两组之间差异具有统计学意义(t=16.3，P<0.01)，与正常对照组相比，BA组血清uPAR表达水平明显增高。BA组血清GGT，AST，ALT水平分别为2 405.1±682.3 U/L，160.8±19.8 U/L，158.7±21.1 U/L，对照组血清GGT，AST和ALT水平分别为11.9±6.2 U/L，8.2±3.8 U/L和10.8±2.7 U/L，差异均具有统计学意义(t=24.9，29.4，30.1，均P<0.01)。

2.2 BA组血清uPAR与ALT，AST，GGT相关性分析 Spearman相关性分析结果显示，BA组血清uPAR表达水平与ALT，AST，GGT水平均呈正相关，相关系数分别为0.822，0.813，0.502，均P≤0.01，见图1。

图1 BA组血清uPAR与ALT，AST，GGT相关性分析

3 讨论

胆道闭锁(BA)是一种病因不明的慢性进行性纤维化肝病，其发生可能由病毒感染、慢性炎性、基因突变或免疫失调等多种原因所导致[5]，但其确切机制至今仍未阐明。目前，对于受影响严重的儿童来说，尚无针对BA行之有效的药物治疗方案，早期诊断、早期行Kasai术和肝移植是唯一的选择。uPAR是一种具有高亲和力的细胞膜受体，通过与尿激酶型纤溶酶原激活因子(urokinase plasminogen activator，uPA)结合，参与了许多细胞内信号通路的调控，如细胞黏附、迁移、增殖、分化和细胞存活[6]。近年来，循环uPAR水平也被证实与慢性肝病有关，包括慢性乙型和丙型肝炎、肝硬化和肝细胞癌[7～10]。然而目前，有关血清uPAR在BA中的研究鲜有报道。本次研究结果显示：BA组与对照组之间，血清uPAR表达水平具有显著性差异，与正常对照组相比，BA患儿血清uPAR表达水平明显增高，表明uPAR可能在BA发病过程中发挥着重要作用。与此观察相一致，慢性肝病患者中的uPAR表达量比健康正常人明显升高[4]。此外，Sjowall等[2]研究发现，uPAR在非酒精性脂肪肝疾病患者中的表达升高，与肝功能和肝纤维化的严重程度有关。

血清ALT，AST和GGT是肝脏疾病检查中非常重要的酶学检测项目，对各种肝胆疾病的临床诊断都具有关键作用。其中ALT和AST均被广泛用作肝细胞损伤的生化指标。ALT是一种主要存在于肝细胞质中的细胞内酶，可以反映干细胞的实质损伤，在各种肝炎中均可发现ALT表达升高[11]。AST广泛存在于机体的各种组织细胞中，在心肌细胞中含量最高，其次为肝脏，血清内水平略低[12]，当肝细胞坏死严重时，线粒体内的AST便释放出来，且其值越高越能体现肝细胞受损伤的严重程度。GGT是一种微粒体酶，主要存在于肾、肝和胰等多种组织中。正常情况下血清的GGT大部分来源于机体的肝脏，存在于肝细胞浆和肝内胆管上皮中，是谷氨酰循环的关键酶[13]。本次研究结果表明，BA组与对照组之间，血清ALT，AST和GGT水平具有显著性差异，BA患儿血清uPAR表达水平与ALT，AST，GGT水平均呈正相关关系，提示uPAR可能在BA肝细胞损伤的机制中发挥作用，与BA患儿的肝功能异常有关。

综上所述，uPAR参与了BA的发生、发展，且与BA患儿肝功能异常密切相关。血清uPAR可作为BA预测、诊断及肝功能异常评估的重要生物指标。