广西壮药薏苡叶丙酮提取物的体外抗氧化活性研究

黄凤选，李建娜，黄锁义，陆海峰

(1.右江民族医学院 口腔医学系，广西 百色 533000；2.右江民族医学院 药学院，广西 百色 533000; 3.广西高校右江流域特色民族药研究重点实验室，广西 百色 533000)

栽培薏苡(Coixlacryma-jobL.)属于禾本科(Poaceae)玉蜀黎族(Trib.Maydeae)薏苡属(Coix)。薏苡属内有多个种，起源并广泛分布于东亚和东南亚地区。薏苡在东亚许多国家都是传统的保健和药用作物，具有重要的经济地位。在我国，薏苡不仅具有悠久的栽培历史，还是分布最广的药用经济作物。近年来，人们发现了薏苡有防治癌症的药用价值，使薏苡的生产变得更加重要[5]。目前研究表明，薏苡中含有三酰甘油、薏苡内酯、薏苡多糖、甾醇类化合物、茚化合物、三萜类化合物、生物碱类化合物及多种氨基酸和微量元素等[2]。经文献调研，目前国内外对于薏苡的研究主要集中于薏苡仁上，对薏苡非种子部位的相关研究很罕见，限制了薏苡的深度开发和利用。因此，本试验采用超氧阴离子、DPPH自由基和Fe3+还原力的不同体外抗氧化模型，以其还原力和清除自由基能力为指标，评价薏苡叶丙酮提取物的抗氧化活性，以期进一步优化薏苡的综合利用价值，为加快薏苡药品的临床应用和开发新型功能食品提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 仪器JA2003电子天平

上海舜宇恒平科学仪器有限公司，编号SHP0700370133；HHS-11-4数显恒温水浴锅：上海上登实验设备有限公司，编号150220131；TGL-16离心沉淀机：上海跃进医疗器械有限公司，编号501011；R-100旋转蒸发仪：上海亚荣生化仪器厂；722N可见分光光度计：上海精密科学仪器有限公司；722可见分光光度计：上海菁华科技仪器有限公司；SHB-III循环水式多用真空泵：郑州长城科工有限公司，编号15071896。

1.1.2 材料与试剂

干燥过的广西壮药薏苡叶，采集于广西百色市西林县，粉粹后备用。

丙酮：成都市科龙化工试剂，批号 20110927；邻苯三酚(焦性没食子酚)：贵州遵义佳宏化工有限责任公司，批号080112；盐酸：西陇化工股份有限公司，批号110725；无水乙醇：西陇科学股份有限公司，批号 1609011；十二水合磷酸氢二钠：西陇化工股份有限公司，批号 20120809；磷酸二氢钠：成都市科龙化工试剂厂，批号 20120604；三氯乙酸(TCA )：广东光华科技股份有限公司，批号20131211；铁氰化钾：广东汕头市西陇化工厂； DPPH：梯希爱上海化成工业发展有限公司，批号 20130609；Tri-HCl 缓冲液、磷酸盐缓冲液、蒸馏水：均为国产分析纯。所用仪器均经自来水清洗后蒸馏水润洗晾干备用。

1.2 试验方法

1.2.1 薏苡叶丙酮提取物的制备

精确量取粉粹后干燥的薏苡叶50 g于蒸馏烧瓶中，按料液比1∶16加入99.9%丙酮溶液后用玻璃棒搅拌均匀,于80 ℃恒温水浴中加热60 min，用SHB-III循环水式多用真空泵抽滤2次，每次都用适量的99.5%丙酮溶液冲洗，合并滤液。利用R-100旋转蒸发仪将合并后的滤液减压浓缩至初始适量的10%，置于烧瓶中密封存于冰箱中60 min后制得薏苡叶丙酮提取物，同时制成不同浓度的薏苡叶丙酮提取物于冰箱中备用。

1.2.2 薏苡叶丙酮提取物对O2·清除能力

采用邻苯三酚自氧化法[6]进行测定。具体的实验方法如下所示：精确量取质量浓度为1 mol/L的Tri-HCl缓冲液(pH 8.0)4.0 mL于经过干燥的具塞比色管中，放置于25 ℃水浴中预热25 min，分别加入不同浓度的样品溶液2.0 mL，再在每个试管中加入质量浓度为0.4 mmol/L邻苯三酚(由10 mmol/L HCl制)2 mL，混合搅匀后于25 ℃水浴中反应5min后立即加人 10 mmol/L 的HCl 2滴终止反应，在320 nm处测定其吸光光度A，并用蒸馏水做空白对照管。

超氧自由基的清除率计算公式为：清除率(%)= [1-(A1-A2)/A3]×100%(A1为既加样品又加入邻苯三酚时的吸光光度；A2为加样品但不加邻苯三酚时的吸光光度；A3为只加邻苯三酚却不加样品时的吸光度)。

1.2.3 薏苡叶丙酮提取物对DPPH自由基的清除能力

精确量取质量浓度为0.000 6 mol/L刚配置的DPPH溶液0.5 mL于10 mL的经过干燥过的具塞比色管中，再在各比色管中加入不同浓度的样品溶液2 mL，并用无水乙醇定容至5 mL，混匀后将比色管放于室温暗光下反应30 min，继而在波长为517 nm处测定其吸光度A，以从高浓度逐渐稀释的方式检测不同浓度样品对自由基的清除率，并以自由基清除率为50%时，样品的浓度(IC50)来衡量样品对自由基的清除能力。IC50越小，表明样品清除自由基的能力越强。

DPPH自由基的清除率计算公式为：清除率(%) = [(A1-A 2)/A 1]×100%[A1为空白吸光度(反应时间t= 0 min)，A2为反应30min时的吸光度]。

1.2.4 薏苡叶丙酮提取物对Fe3+的还原能力

抗氧化剂的还原力与其抗氧化活性之间存在联系，抗氧化剂是通过自身的还原作用给出电子而清除自由基的，还原力越强，抗氧化性越强，药物还原力的大小在一定程度上反映了其预防性抗氧化功能的强弱。因此，可通过测定还原力来说明抗氧化活性的强弱。采用普鲁士蓝法对Fe3+的还原能力进行测定。在6支10 mL的具塞比色管中依次加入不同浓度的样品溶液2.5 mL、2.5 mL磷酸盐缓冲液[C(磷酸盐溶液)=0.2 mol/L，pH6.6]和2.5 mL的1%铁氰化钾，混合搅匀后将各比色管置于50 ℃水浴锅中反应20 min,然后加入2.5 mL的10%三氯乙酸，混合搅匀后在转速为3 000 r/min的离心沉淀机中将混匀后的溶液离心10 min，取上清液 2.0 mL，依次加入2.0 mL蒸馏水和0.5 mL三氯化铁溶液(0.1%)振荡摇匀,以试剂空白管做参照，在波长为700 nm下检测其吸光度，且吸光度值增强表明还原能力增强。

2 结果与分析

2.1 薏苡叶丙酮提取物对清除能力

图1 薏苡叶丙酮提取物对的清除效果

2.2 薏苡叶丙酮提取物对DPPH自由基的清除能力

从图2中可知，提取物浓度在0.4～2 mg/mL范围内时，随着其浓度的增加，对DPPH自由基的清除率也逐渐增加。在提取物的浓度为0.8 mg/mL时，DPPH自由基的清除率超过IC50。由此得出结论，在一定的提取物浓度范围内，薏苡叶丙酮提取物对DPPH自由基具有一定的清除能力，且随着浓度的加大，清除率也跟着提高。

图2 薏苡叶丙酮提取物对DPPH自由基的清除效果

2.3 薏苡叶丙酮提取物对Fe3+的还原能力

由图3可知，随着薏苡叶丙酮提取物浓度的增加，吸光光度值也增大，表明薏苡叶丙酮提取物对Fe3+还原能力也逐渐增强。因此，在一定浓度范围内，薏苡叶丙酮提取物对Fe3+具有一定的还原能力。

图3 薏苡叶丙酮提取物还原Fe3+能力的吸光度值

3 讨 论

此实验结果显示，薏苡叶丙酮提取物对DPPH自由基及超氧自由基具有较好的清除能力，且对Fe3+具有一定的还原能力，从该实验中还可以看出，在一定的提取物浓度范围内，薏苡叶丙酮提取物的抗氧化作用与浓度呈现良好的量效关系，对铁离子的还原能力也随着提取物浓度的增加而增大。由此可知薏苡叶丙酮提取物具有良好的抗氧化活性，此实验通过对薏苡叶丙酮提取物抗氧化活性的研究，无疑为后期开发和利用薏苡叶提供更好的理论依据，加快实现对薏苡各部分的充分使用的目标，而不只是简单的食用薏苡种仁，却只能将薏苡的其他部分丢弃，从而造成资料的浪费和环境的污染。

现代医学研究表明，人体的许多疾病和组织损伤等与体内的抗氧化应激反应有关，如炎症、肿瘤、衰老、血液病，以及心、肝、皮肤等各方面疑难疾病的发生机制与体内自由基产生过多或清除自由基能力下降有着密切关系[8]。研究表明，自由基的清除率是抗氧化剂发挥抗氧化作用的主要机制[9]。因此，从天然食物中寻找高效、稳定、低毒的抗氧化剂成为目前研究的一个热点，其中药用植物提取物是天然抗氧化剂的一个重要来源[1]。现有研究发现，植物提取物的抗氧化活性成分主要有多糖类化合物、黄酮类化合物、多酚类化合物、生物碱类、皂苷类、维生素类、多肽类等[3]，而广西产薏苡叶中可能含有黄酮类、酚类、香豆素类、挥发油、植物甾类、糖类、苷类、鞣质、有机酸、生物碱等化学成分[12]，因此，其具有很高的研究价值与开发前景。