不同产地野生明党参药材中胆碱的含量测定

杜 清，秦民坚*，吴 刚

（1.青海民族大学药学院，青海省青藏高原植物资源化学研究重点实验室，青海 西宁 810007；2.中国药科大学中药资源学研究室，江苏 南京 210038；3.青海省药物分析重点实验室，青海 西宁 810007）

明党参（Radix Changii）为伞形科明党参属单种植物明党参（Changium smyrnioides Wolff.）除去栓皮的干燥根。主产于江苏、安徽、浙江等地。具有补气生津、润肺化痰、平肝和胃的功效[1]。陈建伟等[2]从明党参中首次分得胆碱[3-4]，一种抗脂肪肝因子的有效成分，分离提取后利用雷纳克盐法通过测定氯化胆碱的含量来定量胆碱的相对含量[5]。

1 实验材料、试剂与仪器

1.1 实验材料与试剂

明党参药材采集于野生地及购于安徽亳州药材市场，经中国药科大学秦民坚教授鉴定为伞形科明党参Changium smyrnioides Wolff.的干燥根。

1.2 试剂

氯化胆碱标准品购于中国药品生物制品鉴定所；雷氏盐：Sigma Aldrich of D-89552/Fluka chemie；硝酸（南京化学试剂一厂生产），甲醇（江苏汉邦科技有限公司生产），正丙醇（上海凌峰化学试剂有限公司生产）；氢氧化钠（上海凌峰化学试剂有限公司生产），丙酮（天津市博迪化工有限公司生产）。

1.3 仪器

水浴锅（国华电器有限公司生产）；循环水式真空泵（郑州长城科工贸有限公司生产）；RE-52A旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂生产）；UV-2501可见分光光度计（日本岛津公司生产）。

2 实验方法

2.1 氯化胆碱标准液的配制

精密称取105℃干燥至恒重的氯化胆碱标准品200mg，置于200ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度（即浓度为1mg/mL）

2.2 最大吸收波长的确定

取氯化胆碱对照品溶液加入适量5%雷氏铵盐甲醇溶液，利用胆碱可与雷氏铵盐生成红色复盐的原理，进行比色测定，静置析晶，滤取结晶，丙酮溶解，UV-2501分光光度计作全波长扫描，确定最大吸收峰及波长。

2.3 标准曲线的制作

分别取氯化胆碱标准液2.0，4.0，6.0，8.0，10.0，12.0，14.0，16.0，18.0ml，分别加水至20.0 mL，再加入5%雷氏铵盐甲醇夜各5 mL，冰箱放置生成胆碱雷氏盐结晶。滤取结晶，用正丙醇洗三次，丙酮溶出，定容至25.0 mL，在520 nm波长处测定吸光度，以含量（mg/mL）为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。

2.4 样品溶液中胆碱的测定

称取60℃干燥的小样10g，硝酸加热回流分解提取，滤液用40%的氢氧化钠调节PH至9～10，加入过量甲醇，冰箱放置1夜，滤液浓缩加入雷氏铵盐甲醇溶液，生成粉红色片状结晶，用正丙醇清洗，丙酮溶解结晶后定容至25 mL容量瓶中，吸取5 mL用丙酮定容至25 mL容量瓶，在520 nm处测定吸光度，由氯化胆碱标准曲线方程计算氯化胆碱的浓度C，并计算样品中胆碱的百分含量：胆碱含量（mg/100 g）=C×0.746×稀释倍数/称样量×100，式中：0.746为胆碱系数

3 结果及分析

3.1 标准曲线及线性范围

根据2.5的方法测得各个浓度下吸光度的值，见表1。以含量（mg/mL）为横坐标，吸光度为纵坐标绘制的标准曲线如图1所示，回归方程式为：A=0.0098+1.2393C，r=0.9986，说明氯化胆碱标准品溶液在0.08～0.72 mg/mL范围内与其吸光度成线性相关。

表1 氯化胆碱标准品溶液的浓度和吸光度值

图1 氯化胆碱标准品溶液的标准曲线图谱

3.2 精密度实验

精密吸取氯化胆碱标准品溶液6.0 mL，按照样品测定的条件检测5次，结果其精密度RSD为0.08%，说明精密度较好。

3.3 重新性实验

称取明党参小样药材粉末10 g，精密称定5份，按样品溶液制备方法操作，测定胆碱的含量，经计算得出其RSD为4.5%，说明重现性较好。

3.4 稳定性实验

精密吸取氯化胆碱标准品溶液6.0 mL，按照以上条件进行检测，结果见表2，由结果可见在2 h内，其RSD为0.3%，说明溶液吸光度值在2 h内稳定。

表2 氯化胆碱标准品溶液稳定性实验结果

3.5 回收率实验

称取明党参粉末5份，每份10 g，按照样品提取方法进行处理后用标准曲线项下的方法测定其中的胆碱含量，见表3，由结果可见，其加样回收率在98.6%～101.7%，RSD为2.0%，说明回收效率较好，且精确度较高。

表3 氯化胆碱标准品溶液回收率的实验结果

3.6 不同产地野生明党参药材中胆碱的相对含量测定

按照2.6样品测定的方法测定，见表4。

表4 不同产地野生明党参药材中胆碱的相对含量

3 讨 论

明党参药材中胆碱的相对含量采用雷氏盐-紫外分光光度法测定，经过方法学考察，精密度、重现性和稳定性的RSD均在3.0%以内，测得的回收率在98.6%～101.7%之间，均值为100.6%，RSD为2.0%，说明该方法可行。

应用考察后的方法学测定不同产地野生药材中胆碱的相对含量，分别为江苏南京幕府山37.78%，句容天王镇虎山57.03%，句容茅山41.98%，南京青龙山60.74%，南京紫金山38.20%，南京老山33.99%，安徽滁州32.79%，安徽安庆57.38%，安徽青阳36.16%，浙江杭州38.96%。可看出不同产地野生明党参药材中胆碱的含量在32.79%～60.74%之间，其中以江苏南京青龙山、安徽安庆、江苏句容天王镇虎山中胆碱的含量较高。