高速逆流色谱分离纯化技术研究进展

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(重庆市畜牧科学院,重庆 402460)

0 引言

高速逆流色谱法 (High-speed Counter Current Chromatography，简称HSCCC)是一种可连续有效液液分离的色谱技术，该分离技术避免了固体吸附使用中存在的不可逆吸附问题，具有样品污染小、活性影响小、回收率高，在生物制药、活性成分分离等方面具有较大应用价值[1-2]。本文从高速逆流色谱溶剂体系选择、应用方面介绍了高速逆流色谱技术研究情况，为其进一步利用提供参考。

1 HSCCC溶剂体系

HSCCC的基础是单向性动力学平衡原理，在螺旋管中包含着两个互不相溶的溶剂，当螺旋管高速旋转时，两相将分开呈单向分布，其中一相作固定相，恒流泵将载有样品的流动相输送经过固定相，因样品在两相中分配系数不同而实现分离。

1.1 两个溶剂系统选择基本要求[3]

两个溶剂系统选择基本要求：①两相溶剂体系应稳定，溶剂系统分层时间小于30s；②溶剂不会引起样品的分解与变性；③样品溶解度较高；④目标化合物在两相溶剂系统中分配系数在0.5～2；⑤溶剂易挥发；⑥固定相保留值尽量不低于50%。

1.2 不同极性溶剂体系

根据极性不同分为强极性溶剂体系、中等极性溶剂体系、弱极性溶剂体系。HSCCC常用的基本溶剂系统见表1。

表1 HSCCC常用的基本溶剂系统[4]

2 HSCCC应用研究进展

2.1 在天然产物中的应用

大量文献报道，HSCCC技术可对黄酮、生物碱、多酚类和蒽醌类衍生物等天然产物的提取分离方面具有较好的效果。李晨[5]等以乙酸乙酯-正丁醇-水(5∶2∶5，v∶v)为两相溶剂系分离制备金银木叶中的芦丁。朱晓娜[6]等以正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水-冰醋酸(1∶1∶1∶1∶0.05，v/v)为两相溶剂，从槐花中分离出芦丁和槲皮素，其纯度均在97%以上。陈田[7]以正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水、冰乙酸的体积比15∶15∶20∶20∶7.5为溶剂系统，从干辣椒中提取生物碱，二氢辣椒素和辣椒素，纯度分别为98.2%和98.0%。

2.2 在食品领域中的应用

王凯[8]应用正己烷-乙腈-甲醇(4∶1∶2,v/v/v)和正己烷-甲醇(2∶1，v/v)两种溶剂体系，利用HSCCC技术从雨生红球藻粗提物中分离纯化得到角黄素、虾青素十六碳二烯酸单酯、虾青素亚麻酸单酯、虾青素亚油酸单酯、β-胡萝卜素、虾青素棕榈酸-二十二碳二烯酸双酯。阮宝玉[9]应用HSCCC技术从红色西瓜瓤粗提取物中分离番茄红素，纯度为98.3%。林仙江[10]采用正己烷-乙醇-水(4∶3∶1，v/v)溶剂体系，从小球藻皂化提取物中一步制备分离叶黄素，纯度达94.1%。

3 结语

综上所述，HSCCC作为一种集分析及制备的技术，具有性能可靠、易于操作、可以避免样品损失、失活、变性等优点。 但是，HSCCC仍存在一定缺点需要改进与完善，如溶剂体系的选择还需要进一步完善、制备分离量还不能达到公斤级的分离纯化。高速逆流色谱在天然产物、食品分离、药物提取等方面的研究和开发呈现强大优势。