蒲公英炮制前后总黄酮含量差异研究

2018-11-02巨红叶葛心怡刘长乐

吉林中医药 2018年10期

巨红叶，葛心怡，焦莹，赵波，刘长乐，宋逍

（陕西中医药大学药学院，陕西咸阳 712046）

蒲公英为菊科植物蒲公英Taraxacum mongoLicum Hand.- Mazz、碱地蒲公英Taraxacum boreaLisinense Kitag.或同属数种植物的干燥全草，药性为苦、甘、寒，归肝、胃经。含有多糖类、萜类、有机酸类、总黄酮类等成分，其中总黄酮类为主要有效成分。有清热解毒、消肿散结、利湿通淋的功效[1-4]。蒲公英现在临床上主要用于治疗胃溃疡、胃炎等疾病[5-7]。

陕西中医药大学附属医院全国名中医的临床经验方胃舒优在临床上治疗胃炎、胃溃疡等胃病效果极佳，而处方中的君药用的是蒲公英的炮制品—蒲公英炭。药物炒炭后可增强药物止血止泻的功效或使其产生止血止泻的功效，还可缓和药性，降低毒性[8]。现代药理学认为，炭药具有吸附毒素、改善胃肠功能、抗炎等作用。2015版中国药典第四部通则0213炒炭质量标准为“取待炮炙品置热锅内用武火炒至表面焦黑色、内部焦褐色或至规定程度时，喷淋清水少许，熄灭火星，取出，瞭干”[9]。《金匮要略方论》中记载炒炭的质量标准为“烧炭存性，勿令灰过”“炒令黑勿太过”[10]，炒炭工艺虽简单，但实际上不好控制程度。并且，临床治疗胃炎、胃溃疡多用蒲公英原药材。基于此，本课题以蒲公英中主要有效成分总黄酮为研究对象，采用超声提取法[11-18]研究蒲公英炮制前后总黄酮含量差异。

1 实验材料

QE-300 g型高速万能粉碎机（浙江屹立工贸有限公司），BL-T650CT多用途恒温超声波提取机（西安比朗生物科技有限公司），DC-0506低温恒温槽（西安比朗生物科技有限公司），UV-2600（SHIMADZU），N-1200B旋转蒸发仪，ZKF040型真空干燥箱（上海实验仪器厂有限公司）。蒲公英药材购自于西安万寿路药材市场，经生药教研室王继涛老师鉴定为蒲公英属Taraxacum F.H.Wigg植物蒲公英，芦丁标品（中国食品药品检验所，批号：100080-201610），无水乙醇（天津市科密欧化学试剂有限公司）。

2 实验方法

2.1 超声提取条件设计考虑乙醇浓度（A），超声时间（B），超声温度（C），超声功率4种因素（D），每个因素3水平，以总黄酮含量为考察指标，确定最佳提取工艺[19-24]。因素水平见表1。

表1 因素水平表

2.2 供试品溶液制备

2.2.1 蒲公英供试溶液的制备将适量蒲公英全草粉碎成细粉和粗粉混用（细粉极易吸潮，不利于实验的进行）干燥至恒重，称取9份8.00 g分别按1.3正交试验设计超声提取，趁热抽滤得滤液，旋蒸到30 mL倒在蒸发皿上，60 ℃水浴蒸干至膏体，60 ℃减压干燥，碾成粉末备用。取适量粉末置于25 mL容量瓶中，用85%的甲醇定容并完全溶解。过0.45 μL的滤膜后精密量取2 mL药液置于25 mL的容量瓶内，加5%硝酸钠溶液1.0 mL，6 min后加10%硝酸铝1.0 mL，6 min后加4% NaOH 10 mL，加水至刻度，摇匀后室温放置15 min，待测（标号为蒲1～蒲9）。

2.2.2 蒲公英炭供试溶液的制备 1）蒲公英炭的制备抓切制之后适量的蒲公英放于炒锅内，用武火加热，快速翻炒至略大于一半的蒲公英表面焦褐色，再迅速转为文火，炒至全部蒲公英表面焦褐色，喷淋清水少许，熄灭火星，取出晾干（通则0213）。随机挑选炒好后的蒲公英药材，折断药材，没有灰化，部分炭化，没有炭化的部分还能看出蒲公英原有的形状即可（蒲公英为全草类药材，质地较轻，极易灰化，所以对于火候和炒制时间的把握极为重要。本实验中先用武火将锅烧热，再将蒲公英药材倒入锅中，30 s后迅速转为文火，防止蒲公英灰化）。2）蒲公英炭供试溶液的制备将炒好的蒲公英炭粉碎成细粉和粗粉混用，干燥至恒重，称取9份5.00 g分别按2.1正交试验设计超声提取，再按2.2.1操作进行即可（标号为蒲炭1～蒲炭9）。

2.3 总黄酮含量的测定

2.3.1 芦丁对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重芦丁对照品23.03 mg，置于50 mL容量瓶中，用85%的甲醇完全溶解并定容，芦丁对照品浓度为，分别取0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 mL置于25 mL（标号为标1～标7）的容量瓶中，按2.2.1中的显色方法显色，即得。

2.3.2 芦丁吸收曲线将已制备好的7个芦丁对照品溶液置于紫外分光光度计中，在200～800 nm（间隔1 nm）下全波长扫描，以吸光度（A）为纵坐标，波长（λ）为横坐标作图，得到吸收曲线，最大吸收波长为508 nm。因此选定508 nm作为本实验中对照品和样品检测波长。

2.4 线性关系考察吸取芦丁对照品溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL，依 2.2.1项下方法在508 nm波长处测定吸光度。以吸光度（A）为横坐标，浓度（C）为纵坐标，绘制标准曲线。结果显示芦丁浓度在0.017 2～0.062 7 mg/mL间具有良好的线性关系，回归方程为C = 0.091A- 0.001，r = 0.997 8

表2 芦丁对照品溶液浓度与吸光度（λ = 508 nm）的数据表

2.5 样品中总黄酮的含量测定分别将提取得到的供试品溶液（蒲1～蒲9及蒲炭1～蒲炭9），按照2.2.1项下的方法在508 nm处采用分光光度法进行测定，计算总黄酮含量，数据见表3与表4。因素水平见表1，L9（34）正交试验设计与试验结果见表3与表4，结合方差分析表5与表6，由结果可知影响因素主要为乙醇浓度与超声功率，并且大小顺序为乙醇浓度＞超声功率。提取时间与提取温度对总黄酮含量的影响并无显著性差异。蒲公英最优提取工艺和蒲公英炭最优提取工艺为A1B3C3D3（提取溶剂为65%乙醇，超声功率为462 W，超声时间为35 min，超声温度为60 ℃）。数据见表7。

3 结果

最优提取方法下蒲公英与蒲公英炭总黄酮提取率的比较根据表8分析数据得出以下结论：蒲公英在提取溶剂为65%乙醇，超声功率为462 W，超声时间为35 min，超声温度为60 ℃的超声条件下提取率最高，此超声条件（A1B3C3D3）为蒲公英最优超声提取条件，提取率为3.9%；蒲公英炭在提取溶剂为65%乙醇，超声功率为462 W，超声时间为35 min，超声温度为60 ℃的超声条件下提取率最高，此超声条件（A1B3C3D3）为蒲公英炭最优超声提取条件，提取率为2.9%。