枳葛口服液对酒精性肝病大鼠脂质代谢的影响＊

蔡丽君，刘友平，李 志，李 波，杨国川，魏 嵋＊＊

（1.西南医科大学附属中医医院 泸州 646000；2.西南医科大学基础医学院泸州 646000；3.成都市新津县中医医院 新津 611430）

酒精性肝病（alcoholic liver disease，ALD）是指长期大量饮酒后所出现的肝脏病理性损伤，从病理形态学上将ALD分为几种形式：轻症ALD、酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝纤维化和肝硬化五大类型[1-3]。其中酒精性脂肪肝是由于过量饮酒导致甘油三酯及胆固醇等在肝组织堆积，从而出现肝细胞脂肪变性的疾病[4]。现代研究证实，酒精性脂肪肝在酒精性肝损伤的病理发展过程中占有重要地位，并呈现逐渐增加的趋势，因此脂质代谢在ALD进展中发挥的作用受到广泛关注[5,6]。枳葛口服液是我院全国中西医结合肝病著名专家教授经过长期临床探索总结出的几味药食同源纯中药解酒经验组方，具有解酒保肝、健脾利湿活血之功效，用于对长期大量饮酒造成的醉酒及预防酒精性肝损伤收到良好的效果，但具体作用机制不清楚。为了探讨枳葛口服液的健脾利湿活血作用，本研究侧重观察枳葛口服液对酒精性肝损伤模型大鼠脂质代谢的调节作用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物及药品

清洁级SD雄性大鼠共90只，体质量170 g-210 g，由西南医科大学实验动物中心提供。枳葛口服液由西南医科大学附属中医医院制剂室提供，规格20 mL×6支/盒，处方组成：枳椇子、葛根、山楂等，有效期2年，批号20151026。解酒灵口服液由黄石市今阳保健品厂提供，规格10 mL×6支/盒，处方组成：甘草、枸杞子等，有效期18个月，生产批号20150401。

1.1.2 试剂

泸州老白干购于中国·泸州老窖股份有限公司，酒精度52%VOL，生产批号20150604。普通饲料由西南医科大学实验动物中心提供。苏木素-伊红（Hematoxylin and Eosin，HE）染液及丙氨酸氨基转移酶（alartine arninotransferase，ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase，AST）、甘 油 三 酯（triglycerides，TG）、总胆固醇（total cholesterol，TC）测定试剂盒均购于南京建成生物工程研究所。

1.2 实验方法

1.2.1 造模及给药

SD雄性大鼠90只适应性喂养一周后随机分为6组：正常组、ALD动物模型组（模型组）、枳葛口服液高剂量组（高剂量组）、枳葛口服液中剂量组（中剂量组）、枳葛口服液低剂量组（低剂量组）及解酒灵口服液阳性对照组（对照组），每组15只。每天9点灌胃：正常组采用蒸馏水灌胃1.0 mL/100 g/天，其余每组均给予52%泸州老白干灌胃1.0 mL/100 g/天，同时高、中、低剂量三组各分别灌服枳葛口服液1.0 mL/100 g天、0.5 mL/100 g/天和0.25 mL/100 g/天，对照组灌胃解酒灵口服液0.5 mL/100 g/天。以上各组均自由饮水，普通饲料，每天20点以后禁食不禁水，持续12周。

1.2.2 标本采集

最后1次给药后12 h禁食，用1%戊巴比妥钠按照0.4 mL/100 g体重腹腔注射麻醉，腹主动脉取血后，4℃冰箱放置12 h后离心留取血清，-80℃冰箱保存，用于检测ALT、AST、TG、TC；肝脏称重后取部分肝左叶以4%甲醛固定，做HE病理染色；剩余肝组织用于检测TC、TG含量。

1.2.3 指标检测及统计学分析

计算肝脏指数，即肝脏指数＝完整肝脏湿重/体重×100%；HE染色观察肝组织的结构；全自动生化分析仪检测血清ALT、AST、TG、TC含量；比色法检测肝组织TC、TG含量。统计软件SPSS 20.0进行数据分析，定量资料采用均数及标准差表示，组间对比采用单因素方差分析，组间两两比较采用最小差异显著性法（least significance of difference，LSD），检验水准α=0.05，当P＜0.05时认为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠肝组织HE染色的比较

正常组大鼠肝小叶及细胞形状大小结构均匀，边界分明、呈现放射状布列整齐规则；模型组大鼠肝小叶结构不规则，边界模糊，细胞内可见大面积大小泡性脂肪空泡，部分细胞核偏移；高剂量组肝细胞结构接近正常组；与模型组相比，中剂量组和对照组均有所改善；模型组和低剂量组基本类似，见图1。

2.2 各组大鼠肝脏指数的比较

图1 各组大鼠HE染色镜下图（×400）

表1 各组肝脏指数的比较(S,n=15)

表1 各组肝脏指数的比较(S,n=15)

注：与正常组比较aP＜0.01，bP＜0.05；与模型组比较cP＜0.01，dP＜0.05；与对照组比较eP＜0.05。

肝脏指数2.056±0.211 3.417±0.231a 2.102±0.139ce 2.442±0.121bd 2.762±0.166a 2.51±0.32bd分组正常组模型组高剂量组中剂量组低剂量组对照组

表2 各组ALT、AST、TC、TG的比较(S,n=15)

表2 各组ALT、AST、TC、TG的比较(S,n=15)

注：与正常组比较aP＜0.01，bP＜0.05；与模型组比较cP＜0.01，dP＜0.05；与对照组比较eP＜0.05。

血清TG/（mmol/L）0.17±0.02 0.56±0.10a 0.27±0.04bce 0.43±0.07ad 0.47±0.07a 0.45±0.08ad分组正常组模型组高剂量组中剂量组低剂量组对照组ALT/（u/L）43.02±2.99 57.58±3.36a 46.±2.76ce 51.11±2.24bd 54.41±2.23a 51.98±2.16bd AST/（u/L）79.12±8.32 102.18±7.56a 84.26±7.93ce 91.06±7.39bd 94.82±7.22ad 92.80±7.42bd血清TC/（mmol/L）1.49±0.24 1.89±0.24a 1.58±0.22ce 1.77±0.22bd 1.84±0.29a 1.82±0.34bd

与正常组比较，除高剂量组外各组肝脏指数均显著升高（P＜0.01或0.05）,其中模型组和低剂量组升高最为明显（P＜0.01）。与模型组比较，各组肝脏指数在高、中、低剂量组及对照组均有所下降，但下降趋势分别呈现一定的递减趋势，即枳葛口服液高剂量组下降最为明显（P＜0.01），几乎接近正常组；其次是中剂量组及对照组（P＜0.05）；低剂量组降低最不显著。与解酒灵口服液对照组比较，仅高剂量组肝脏指数有显著性差异（P＜0.05），中、低剂量组差异无明显统计学意义（P ＞ 0.05）（表1、图2）。

2.3 各组大鼠血清ALT、AST、TG、TC的比较

与正常组比较，除高剂量组外各组血清ALT、AST、TC、TG含量均显著升高（P ＜0.01或0.05），其中模型组和低剂量组升高最为明显（P＜0.01）。与模型组比较，ALT、AST、TC、TG血清含量在高、中、低剂量组及对照组均有所下降，且组间下降趋势同以上肝脏指数的下降趋势，即枳葛口服液高剂量组下降最为明显（P＜0.01），其次是中剂量组及对照组（P＜0.05），低剂量组降低最不显著。同样与解酒灵口服液对照组比较，仅高剂量组血清ALT、AST、TC、TG含量有显著性差异（P＜0.05），中、低剂量组差异无明显统计学意义（P ＞ 0.05）（表2、图3，4）。

2.4 各组大鼠肝组织TG、TC的比较

图2 各组肝脏指数的比较

图3 各组血清ALT、AST含量比较

图4 各组血清TC、TG含量比较

与正常组比较，同样除高剂量组外各组肝组织TC、TG含量均显著升高（P＜0.01或0.05），其中模型组和低剂量组升高最为明显（P＜0.01）。与模型组比较，肝组织TC、TG含量在高、中、低剂量组及对照组均有所下降，且组间下降趋势及组间比较显著性差异性比较均同以上肝脏指数及ALT、AST、TC、TG血清含量。同样与解酒灵口服液对照组比较，仅高剂量组肝组织TC、TG含量有显著性差异（P ＜0.05），中、低剂量组差异无明显统计学意义（P ＞ 0.05）（表3、图5）。

表3 各组肝组织TC、TG的比较(S,n=15)

表3 各组肝组织TC、TG的比较(S,n=15)

注：与正常组比较aP＜0.01，bP＜0.05；与模型组比较cP＜0.01，dP＜0.05；与对照组比较eP＜0.05。

肝组织TG/（mmol/L）2.48±0.33 3.91±0.30a 2.68±0.23ce 3.08±0.26bd 3.49±0.33a 3.15±0.36bd分组正常组模型组高剂量组中剂量组低剂量组对照组肝组织TC/（mmol/L）7.25±1.41 9.22±0.88a 7.71±0.90ce 8.28±0.65bd 8.83±0.93a 8.37±0.54bd

图5 各组肝组织TC、TG含量比较

3 讨论

ALD的发病机制复杂，如与能量代谢、氧化应激、免疫调节、脂质代谢等有关[5,7]；其中脂肪代谢异常是酒精性肝损伤发生的关键因素之一[4]。因为肝脏是脂类代谢的主要器官，不仅是合成甘油三酯、胆固醇等脂质物质最主要的场所，同时担负着脂质的转化与排泄等重要作用，因此当肝细胞功能受损时，将会影响血脂、脂蛋白及载脂蛋白的合成、转运、代谢等生理代谢过程，导致机体脂代谢紊乱[8-10]。本研究通过单纯酒精性肝损伤大鼠模型观察枳葛口服液的解酒护肝机制发现：模型组不管从病理学改变（见图1），肝脏指数（见表1，图2）及明显升高的ALT、AST、TC、TG（见表2，3及图3，4，5），都充分说明在单纯持续的乙醇刺激下大鼠因机体脂代谢紊乱而发生了较严重的肝脂肪变性，肝功能受损严重，这与其它相关类似实验较一致[11-13]。这可能是乙醇在代谢的过程中产生的代谢产物乙醛及自由基等破坏肝细胞线粒体的氧化功能，导致肝细胞损伤、脂代谢紊乱而使TC、TG大量沉积在肝脏中[14]。当给予乙醇刺激的同时给予不同剂量枳葛口服液并解酒灵口服液做对照时，各实验组大鼠肝脏指数、血清ALT、AST、TC、TG及肝组织中TC、TG均低于模型组，其中高剂量枳葛口服液组值最低并几乎接近正常组值，对照组解酒灵口服液与中剂量枳葛口服液疗效相当（见表1、表2、表3）。通过各组各数据柱状图发现，以上所有数据在这六组中的变化趋势非常一致（见图2、图3、图4、图5），说明高剂量枳葛口服液（1.0 mL/100 g/天）确实能在饮酒人群中起到有效的降脂保肝作用。

中药防治酒精性肝病优势明显，具有良好的应用前景[15-17]。我院著名中医专家孙同郊教授结合西医对酒精性肝病的理解，认为酒含湿热之毒，湿热隐伏于血分，导致气滞、血瘀等失调性改变；湿困脾土，使脾失健运；故而认为“脾虚血瘀”是酒精性肝病的基本病机[18]。鉴于以上理解并经过几十年的临床探索，孙同郊教授总结出了具有明显健脾利湿活血之功效的解酒经验方——枳葛口服液，其组成药方主要有：枳椇子、葛根、山楂等。相关研究证实：枳椇子水煎液可以显著降低TC、TG[20,21]；葛根素是潜在的降血脂药物，它能提高高脂血症患者冠状动脉血流，而葛根异黄酮能够降低糖尿病小鼠血糖，改善小鼠体重，使血清TC、TG的含量降低，从而抑制糖脂代谢紊乱[21,22]；山楂含有黄酮类及解脂酶，它能明显抑制胆固醇合成的限速酶活力，从而减少内源性胆固醇的生成，并且通过促使脂肪分解、清除，从而降低血脂[23,24]。可见，枳葛口服液的健脾利湿活血之功效可能与其改善大鼠脂质代谢紊乱密切相关，从而防止肝脏发生进一步肝脂肪变性。

综上所述，早期、定量的枳葛口服液对酒精性肝损伤有一定的阻断或抑制作用，其机制可能与改善大鼠脂质代谢紊乱有关；为了更好地为广大饮酒人群提供安全可靠、行之有效的保健制剂，我们拟对枳葛口服液的保健机制做进一步研究以期为其保健功能评价及开发利用提供一定的科学依据。