研究TPX2蛋白在甲状腺乳头状癌组织中的表达及其在甲状腺癌KAT细胞增殖过程中的作用

许腾 杨丽玮 郝立君

【摘 要】目的：深入研析TPX2蛋白在甲状腺乳头状癌组织中的表达及其在甲状腺癌KAT细胞增殖过程中的作用。方法：随机抽选于2016年3月-2018年3月期间我院顺利收集的60例甲状腺乳头状癌组织及其癌旁组织，将PTC细胞分为空白对照组（Blank组）、无义序列转染组（NC组）、siRNA-1组、siRNA-2组。应用荧光定量PCR法对其TPX2mRNA表达水平进行检测，再采用siRNA干扰甲状腺癌KAT细胞增殖。结果：甲状腺细胞癌组织中TPX2蛋白表达含量在mRNA表达水平明显高于癌旁组织（P<0.05）；甲状腺癌KAT细胞对TPX2蛋白表达进行干扰之后，增加了其细胞凋亡率，有效抑制了细胞增殖性。结论：TPX2蛋白在甲状腺乳头状癌组织中的表达含量相对高于癌旁组织，与甲状腺癌KAT细胞增值性存在相关性，可作为干预甲状腺癌的一项新靶点。

【关键词】TPX2蛋白；甲状腺乳头状癌组织；甲状腺癌；KAT细胞；增殖

【中图分类号】R335+.2 【文献标志码】B 【文章编号】1005-0019（2018）10-023-02

甲状腺癌在临床中是一种较为多见的内分泌腺恶性肿瘤。据不完全统计，在甲状腺癌类型中，甲状腺乳头状癌（PTC）约占81%，且呈不断急剧上涨趋势，已成为一种增长速度最快的内分泌系统恶性肿瘤类型，对人类健康安全构成严重威胁[1]。随着分子生物学技术不断研发与进步，可采用新技术来帮助探寻PTC肿瘤的新靶点，对预后与转归具有重大临床实际意义。鉴于此，在本次研究中，深入研析TPX2蛋白在甲状腺乳头状癌组织中的表达及其在甲状腺癌KAT细胞增殖过程中的作用。现将报告如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料 随机抽选于2016年3月-2018年3月期间入院接受甲状腺癌切除术的60例患者，在术后均经临床病理确诊为甲状腺乳头状癌。我院顺利收集的60例甲状腺乳头状癌组织及其癌旁组织，应用荧光定量PCR法对其TPX2mRNA表达水平进行检测，再采用siRNA干扰甲状腺癌KAT细胞增殖。所有患者的临床一般资料保留完整，且通过采用统计学分析，结果得出（P>0.05），可进行临床分析与讨论。所有患者及其家属均已知情同意，并自愿纳入本次研究中，且经由我院伦理委员会批准。

1.2 方法 严格依照RNAisoRNA提取试剂盒的说明参照书对组织中的总RNA进行提取，采用分光光度计对总RNA浓度与纯度进行检测[2]。依照逆转录试剂盒的操作指南对cDNA合成进行测定，应用荧光定量PCR法对其TPX2mRNA表达水平进行检测。

本次研究对象为甲状腺乳头状癌组织KAT细胞株，并将其放置于RPMI1640培养基中（10%胎牛血清）进行培养，设定温度为37℃，CO2浓度为50ml/L[3]。

空白对照组（Blank组）、无义序列转染组（NC组）、siRNA-1组、siRNA-2组培养24h后，依照相关说明书要求进行转染。转染后24h、48h、72h、96h采用酶标仪进行测定。

1.3 统计学方法 在SPSS21.0统计软件中算出本次研究所有数据。

2 结果

2.1 TPX2蛋白在甲状腺乳头状癌组织中表达情况 60例甲状腺乳头状癌组织中，39例甲状腺细胞癌组织中TPX2蛋白表达在mRNA表达水平明显高于癌旁组织（log2值>0）（P<0.05）。

2.2 TPX2与KAT细胞凋亡的联系 通过流式细胞仪进行分析，结果发现NC组与Blank组的细胞凋亡率比较差异不存在统计学意义（P>0.05）；siRNA-2的细胞凋亡率（18%）明显高于siRNA-1（6%）（P<0.05）。

2.3 TPX2与KAT细胞增殖的联系 经MTT细胞增殖临床研究发现，NC组与Blank组的细胞增殖性比较差异不存在统计学意义（P>0.05）；siRNA-1在不同转染时间中的细胞增殖性均低于siRNA-2（P<0.05）

3 讨论

甲状腺癌已成为目前全球患病率急剧增长速度最快的恶性肿瘤之一，其中甲状腺乳头状癌约占81%[4]。在目前临床治疗PTC中常用切除术可改善预后效果，但在淋巴结清扫、手术切除范围、介入消融等尚未明确统一标准。因此，可能会出现过度治疗、预防干预等不良现象。充分采用分子生物检测的新技术探寻PTC肿瘤治疗新靶点以及其发生发展机制，可为后期临床制定最佳治疗方案提供科学有力的理论支持。

本研究表明，甲状腺细胞癌组织中TPX2蛋白表达含量在mRNA表达水平明显高于癌旁组织（P<0.05）；甲状腺癌KAT细胞对TPX2蛋白表达进行干扰之后，增加了其细胞凋亡率，有效抑制了细胞增殖性，提示TPX2siRNA在转染48h后甲状腺癌KAI细胞生长曲线上升呈减缓趋势，当TPX表达下调之后能对甲状腺癌KAI细胞增殖能力发挥有效抑制作用[5]。此外，TPX2siRNA在转染48h后，甲状腺癌KAI细胞的凋亡率逐渐上升，表明在TPX表达下调之后，对KAI细胞凋亡具有促进作用[6]。总之，TPX2可作为判定PTC恶性程度、治疗新靶点的有效指标之一，为后续临床干预治疗提供至关重要的参考价值。

综上所述，TPX2蛋白在甲状腺乳头状癌组织中的表达含量相对高于癌旁组织，与甲状腺癌KAT细胞增值性存在相关性，可作为干预甲状腺癌的一项新靶点。

参考文献

[1] 关善斌，黄新若，李加伟，等.TPX2在甲状腺乳头状癌中的表达及其对甲状腺癌KAT细胞增殖能力的影响[J].广东药学院学报，2017，33（4）：551-555.

[2] 趙爱国，师丙帅，张双林，等.甲状腺癌相关基因1mRNA和蛋白在甲状腺乳头状癌组织的表达及其相关性[J].中华实验外科杂志，2015，32（1）：144-146.

[3] 王倩倩，李伟娟，刘阁玲，等.细胞周期蛋白G2在人甲状腺乳头状癌K1细胞中的表达及其对K1细胞增殖凋亡的影响[J].肿瘤防治研究，2017，44（7）：460-464.

[4] 熊超.结肠癌组织中RNF181、TPX2的表达量及其与癌细胞活力、血管新生的相关性分析[J].海南医学院学报，2017，23（14）：1969-1971.

[5] 李鸿涛，单美慧，罗琳，等.甲状腺乳头状癌组织中Ki-67表达及其临床病理意义[J].新疆医科大学学报，2016，39（10）：1291-1293.

[6] 宋淑芳，常海平，杨彩容，等.慢病毒介导的TPX2基因沉默对人宫颈癌HeLa细胞系增殖、迁移和细胞周期的影响及机制[J].癌变·畸变·突变，2017，29（5）：329-334.