阿卡波糖有关杂质制备方法研究

邵鑫鑫 陈才 姚伟敏

摘 要：按照不同的酸、碱条件对阿卡波糖的降解反应，可以获取不同的杂质。同时在不同的酸碱浓度、温度等条件上也会对杂质产生比较显著的影响。阿卡波糖能够对糖尿病患者起到很好的治疗作用，属于非胰岛素依赖性药物，可以帮助轻度糖尿病患者实现自身胰岛素的分泌，但是受到分泌量不足的影响，患者会出现胰岛素敏感度下降等情况，对血糖影响比较严重。针对这种情况，本文也将针对阿卡波糖中的杂质制备方法进行研究，希望对这项研究工作的开展起到更为有效的帮助。

关键词：阿卡波糖；杂质；制备方法

DOI：10.16640/j.cnki.37-1222/t.2018.17.017

阿卡波糖的工业生产主要是借助微生物发酵法，也就是大游动放线菌合成的假四糖类次级代谢物。但是经过实际研究可以发现，阿卡波糖在发酵环节中除了会生产阿卡波糖之外，还会出现相应的结构类似物质，这也是阿卡波糖中的主要杂质。如果在阿卡波糖中含有一定量的杂质，不仅会对药物的纯度会造成影响，严重的还将直接威胁到药物的安全性与稳定性。所以在此种背景下进行杂质研究，提升阿卡波糖药物质量也是一项极具社会意义的工作。

1 实验概述

1.1 材料和试剂

本文所研究的阿卡波糖主要是由杭州中美华东制药公司提供。在这项工作中所采用的试剂大多为分析纯度试剂，这些试剂均由天津市永大化学试剂公司所生产，实验室中所用的水都为超纯水[1]。

1.2 仪器和设备

这项工作中主要采用的设备和仪器为：Barnstead TII 超纯水系统、半制备液的相色谱仪等。

1.3 实验方法

（1）液相色谱检测条件。要先将选取的样品溶解在纯水中，保证其溶液浓度为2mg/L，进行该操作时要按照欧洲药典来进行，同时，使用将磷酸缓冲盐作为流动相，并测出液相色谱[2]。

（2）液质连用分析条。高效液相色谱环节为Aglient1100，液相条件也上文实验结果一致，但是为了避免出现不挥发盐对质谱的毛细管造成堵塞。在此环节中喷雾电压需要控制在4kV，毛细管的温度要在300摄氏度以上，并在此环节中对的正负离子模式下的工作进行有效检测。

（3）酸降解液的制备。先将阿卡波糖样品加入到浓度为12mol/L的验算溶液中，将其浓度进行有效转变，并在恒温条件下将其温度控制在25摄氏度，在静置一小时后，借助氢氧化钠溶液将其调整至中性。

2 结果分析和讨论

实验中要借助相应的技术对阿卡波糖降解液中的成分进行检测，从而实现对杂质的有效定位。

2.1 酸降解结果分析

通过对酸降解需要借助液质联用分析，HPLC色谱图的研究结果表示，在保留时间在27分钟左右的时候会明显出现一个离子峰值的变化，通过此种方式可以对保留时间、离子峰的结果都和阿卡波糖相同，由此可以确定为阿卡波糖。当保留时间在16分钟左右也将出现一个明显的离子峰，按照相关资料的研究，杂质对阿卡波糖的保留值将达到0.6[3]。

2.2 碱降解结果分析

分析过程中，按照对液质联用对碱降解液进行分析，HPLC色谱图中和季峰离子流进行分析可以发现，在保留时间在25分钟左右和27分钟左右的时候都会出现离子峰。根据相关资料的研究，阿卡波糖和杂质分子量一致，通过上文的研究，两个研究结果中产生的杂质保留时间来对制备杂质条件进行进一步考察。

2.3 温度对碱降解的影响

在这项实验需要抽取样品，并且将不同的样品划分为五组，在样品中分别加入0.5mol/L的氢氧化钠溶液，在恒温培养箱的温度分别控制为15，20，25，30和35摄氏度。最终可以发现，30摄氏度时杂质的质量分数最高，而较低的温度很难进行有效的降解，温度一旦过高也很容易出现分解环节中其他杂质的出现，所以降解反应最为合适的温度就是三十摄氏度[4]。

2.4 碱浓度对降解的影响

先选取不同浓度为0.5mol/L、1mol/L、1.5mol/L的NAOH溶液，在此环节中进行对阿卡波糖的降解实验，在两个小时后用盐酸溶液进行调节，并将其转变为中性。通过氢氧化钠浓度的逐渐提升，杂质中的质量分数也将大大降低，这对于讲解杂质也将起到十分重要的帮助。

3 小结

阿卡波糖其实就是一种将α-葡萄糖苷酶作为抑制剂，并且具备较强复杂性的低聚糖，其结构和寡糖更相似，但是这种非寡糖的“假寡糖”能在人体的小肠上部细胞刷状缘处和寡糖竞争而与α-葡萄糖苷酶可逆地结合，通过对α-葡萄糖苷酶，比如我们经常在实验中接触的麦芽糖酶、异麦芽糖酶或蔗糖酶之间的活性，在工作中对其进行淀粉分解为寡糖，比如经常在实验中接触的麦芽糖等低聚糖，通过这种方式将其分解葡萄糖过程进行合理控制，并且对于蔗糖分解成果糖的速度也要进行充分控制，以此实现对肠道葡萄糖的吸收减慢，有效实现对餐后高血糖问题的降低，达到降低血糖的目的[5]。长期服用，可降低空腹血糖和糖化血红蛋白的浓度。因此在今后的研究工作中，对阿卡波糖的杂质进行降低和有效处理也将起到十分有效的指导意义。

通过本文的研究，认为对杂质制备方法进行有效应用，可以更为准确和有效的鉴别杂质，并對时间和分子量进行保留。阿卡波糖在发酵环节中除了会生产阿卡波糖之外，还会出现相应的中结构类似物质，这也是阿卡波糖中的主要杂质。如果在阿卡波糖中含有一定量的杂质，不仅会对药物的纯度会造成影响，严重的还将直接威胁到药物的安全性与稳定性。

参考文献：

[1]梁现蕊，张会晨，何小嫒等.阿卡波糖中杂质的制备方法研究[J].浙江工业大学学报，2017，62（03）：289-293.

[2]黄剑川，王超儿，王亚军.阿卡波糖结构类似物组分A形成机制研究及其制备[J].发酵科技通讯，2014，16（04）：1-6.

[3]杨亚勇，陈景勇，黄雪群.发酵液中阿卡波糖的超滤和纳滤膜提取工艺[J].中国医药工业杂志，2015，28（03）：179-182.

[4]成都大学.从含有阿卡波糖的溶液中提纯阿卡波糖的方法：CN201510098483.8[P].2015，29（03）：06-10.

[5]徐建妙，王远山，王亚军等.阿卡波糖生产菌种的高效选育与发酵过程控制优化研究[C].2015年全国博士生学术论坛——发酵工程论文集浙江工业大学，2015，46（08）：50.