nm23-H1蛋白表达情况与舌癌浸润转移的关系

王利伟，初桂伟，杜灵霞，计春波，张梅，王连友

舌癌是常见口腔恶性肿瘤，主要为鳞状细胞癌，其病因暂不清楚，一般认为与热损伤、慢性损伤、放射物质等相关。舌癌常表现为溃疡型或浸润型，病变处疼痛明显，且癌细胞生长快，浸润性强，易发生淋巴结转移[1]。nm23-H为转移抑制基因，已被证实其基因家族与肿瘤发展和转移存在相关性[2]，而nm23-H1是其亚型之一，恶性肿瘤病理类型不同，nm23-H1蛋白表达水平亦存在差异[3]。目前对于舌癌中nm23-H1的表达水平及其与肿瘤浸润转移的关系尚无确切结论，故而本研究以免疫组化法检测nm23-H1蛋白在舌癌中的表达情况，探讨其与舌癌浸润转移的关系，以期为临床治疗舌癌提供依据。

1 对象及方法

1.1临床资料 选择2015年1月—2018年1月秦皇岛市海港医院及秦皇岛市第四医院收治的69例舌癌患者，其中男39例，女30例，年龄41～77(59.24±8.16)岁；肿瘤部位：舌侧缘61例，舌腹8例；浸润深度：≤4.0 mm 26例，>4.0 mm 43例；肿瘤分化程度：高+中分化48例，低分化21例；淋巴结转移31例，未转移38例。所有患者术前均未进行放疗、化疗或免疫治疗，于手术中取肿瘤组织和癌旁组织(取自距离癌组织病灶边界1 cm处)标本。

1.2方法

1.2.1抗体与仪器：鼠抗人nm23-H1多克隆抗体(Santa Cruz公司)，通用型二抗(北京博奥森生物科技有限公司)，石蜡切片机(LEICA公司)，组织包埋机(常州中威仪器公司)，组织脱水机(日本SAKURA公司)，恒温培养箱(常州澳华仪器有限公司)，免疫组化试剂盒(北京中杉金桥公司)。

1.2.2免疫组化法检测：将舌癌和癌旁组织标本以4%甲醛固定，石蜡包埋，连续切片4 μm，于4℃环境下保存备用。常规脱蜡水化后以PBS液浸泡10 min，使用蒸馏水冲洗，以高压热修复法进行抗原修复，PBS液冲洗(3次×5 min)，并向切片加入适宜过氧化氢溶液，室温下孵育60 min，PBS液冲洗后非免疫性动物血清封闭，滴加相应一抗50 μl至切片中，用PBS液代替一抗作为阴性对照，室温下置1 h。PBS液冲洗(3次×5 min)，滴加50 μl生物素标记的二抗，室温下置10 min。PBS液冲洗(3次×5 min)后滴加试剂相配套DAB显色剂，显微镜下观察染色强度。自来水冲洗后终止显色，苏木素复染，自来水冲洗。脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封固。

1.3结果判断 由3名病理医师对免疫组化染色结果进行评定，以阳性细胞染色强度和阳性细胞所占比例为评定标准，nm23-H1蛋白主要在细胞质中表达，染色强度判断标准：0分为无染色；1分为浅黄色；2分为棕黄色；3分为棕褐色。染色细胞比例判断标准，0分为无染色；1分为染色细胞比例≤25%；2分为染色细胞比例为26%～75%；3分为染色细胞比例>75%。两项评分结果相乘作为最终得分：0～2分为阴性(-)，3～4分为弱阳性(+)，5～7分为阳性(++)，8～10分为强阳性(+++)。

1.4统计学方法 采用SPSS 20.0统计软件分析数据，计数资料以率(%)表示，采用χ2检验，分析nm23-H1蛋白表达数据与临床病理特征间的关系，以Pearson相关性分析nm23-H1蛋白表达与肝癌临床病理特征相关性。α=0.05为检验水准。

2 结果

2.1nm23-H1蛋白表达 69例中舌癌细胞nm23-H1阴性31例，阳性38例，阳性表达率为55.07%；癌旁组织nm23-H1阴性7例，阳性62例，阳性表达率为89.86%。舌癌细胞nm23-H1阳性表达率低于癌旁组织(P<0.05)。舌癌及癌旁组织中nm23-H1阳性表达情况见图1。

图1 舌癌及癌旁组织中nm23-H1阳性表达情况

2.2nm23-H1表达与舌癌临床特征关系 浸润深度>4.0 mm者nm23-H1阳性表达率低于浸润深度≤4.0 mm者，低分化者nm23-H1阳性表达率低于高+中分化者，淋巴结转移者nm23-H1阳性表达率低于淋巴结未转移者(P<0.05)。见表1。

2.3nm23-H1阳性表达与舌癌浸润深度、分化程度及淋巴结转移相关性分析 nm23-H1阳性表达与舌癌浸润深度、淋巴结转移呈负相关，与肿瘤分化程度呈正相关(P<0.05)。见表2。

3 讨论

舌癌为表皮癌范畴，在口腔癌中占30%～50%[4]。舌癌组织恶性程度高，生长迅速且浸润性强，可波及舌肌，影响舌体运动，使患者难以吞咽和进食，且对正常发音亦有影响。随着癌组织的发展，后期可侵犯扁桃体、舌腭弓，甚至蔓延至颌面部与颌骨，导致全舌固定，且易发生远处淋巴结转移，预后差[5-7]。调查显示，舌癌发病率升高[8-9]。

表1 38例nm23-H1阳性表达与舌癌临床特征关系

表2 nm23-H1阳性表达与舌癌浸润深度、分化程度及淋巴结转移相关性分析

nm23-H基因位于人17号染色体上，具有nm23-H1和nm23-H2两种亚型，其蛋白产物为核苷二磷酸激酶(NDPK)，对细胞信号传递、细胞分化、细胞结构维持均有重要作用[10-12]。nm23-H1抑癌作用具有组织特异性，在某些肿瘤中其表达与肿瘤转移呈负相关，其发生突变或缺失会使NDPK也发生变化，改变癌细胞浸润与转移。熊艳丽等[13]研究表示，nm23-H1在小细胞肺癌中呈低表达，且低表达与小细胞肺癌远处转移具有密切相关性。毛帅等[14]研究报道，上调肝癌细胞nm23-H1基因能够抑制肝癌侵袭转移能力。但是对于nm23-H1与舌癌发生、发展、浸润、转移的相关性研究，目前还鲜见报道。本研究结果显示，舌癌组织nm23-H1阳性表达率低于癌旁组织，nm23-H1在舌癌组织中呈低表达，提示nm23-H1表达水平降低与舌癌发生有关。另外，本研究结果还显示，浸润深度>4.0 mm、低分化、淋巴结转移患者nm23-H1阳性表达率分别低于浸润深度≤4.0 mm、高+中分化、淋巴结未转移患者，提示nm23-H1阳性表达与舌癌浸润深度、分化程度及转移存在相关性。进一步分析显示，nm23-H1阳性表达与舌癌浸润深度、淋巴结转移呈负相关，与肿瘤分化程度呈正相关，提示舌癌浸润程度越深、分化程度越低，nm23-H1阳性表达率越低，nm23-H1低表达舌癌患者易出现淋巴结转移。

综上所述，nm23-H1在舌癌组织中呈低表达，与浸润深度、分化程度及淋巴结转移相关，推测其可通过上调舌癌细胞nm23-H1表达抑制肿瘤浸润转移。