HPLC法测定玉屏风口服液中防风的含量

冯海青，邹君，杜艳

(荆州市食品药品检验所，湖北 荆州 434000)

玉屏风口服液为常用中药成方制剂。黄芪为君药，白术为臣药，防风为佐使药，诸药配伍，固表不留邪，祛邪而不伤正，用于肺脾气虚，肌表不固，气虚感冒。现行标准[1]中以黄芪甲苷计测定黄芪含量，而方中臣药和佐药只做定性鉴别。本实验室在实际工作中发现用不合格的防风药材制成的玉屏风口服液也能满足现行标准要求，因此对玉屏风口服液的质量标准应当予以提高。本实验室以本单位抽检样品为主，参考《中国药典》2015年版一部防风含量测定方法[2]，研究玉屏风口服液中防风含量测定的方法。新建立的检测方法简单、准确，能满足对玉屏风口服液中防风含量测定的要求。

1 仪器与试剂

DIONEX UltiMate 3000高效液相色谱；METTLER AB265-S电子天平(瑞士METTLER TOLEDO公司)。

色谱柱：Thermo ODS hypersil 250×4.6 5μm。

标准品升麻素苷(批号111522-201511)和5-O-甲基维斯阿米醇苷(批号111523-201509)均购自中国食品药品检定研究院。乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

样品共计7批，均来自本单位日常检验之样品。

2 方法与结果

2.1 混合对照品溶液的制备

精密称取上述对照品适量至25mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，得混合标准品溶液(升麻素苷5.2330×102μg/mL、5-O-甲基维斯阿米醇苷5.1636×102μg/mL)，然后分别将标准品溶液稀释2、5、10、20、100、500倍得到不同浓度的标准品溶液，用于绘制标准曲线。

2.2 供试品的制备

1)供试品溶液的制备 精密量取玉屏风口服液样品1mL至10mL容量瓶中，加适量甲醇超声15min，放冷后加甲醇定容至刻度，摇匀，用0.45μm滤膜过滤，取续虑液作为供试品溶液。

2)阴性供试溶液的制备 取缺防风的阴性样品(实验室自制)按“1) 供试品溶液的制备”方法制成阴性供试溶液。

表1 梯度洗脱方法

2.3 色谱条件

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(5μm 4.6×250mm)；流动相：乙腈为流动相A，以水为流动相B按表1梯度洗脱；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；检测器：二极管阵列检测器；检测波长：508nm；进样量10μL，色谱图见图1。

图1 玉屏风口服液样品、阴性对照品、混合对照品的HPLC色谱图

2.4 线性关系考察

吸取“2.1”项下不同浓度的标准品溶液，按照“2.3”项下的色谱条件进样测定。以浓度为纵坐标，峰面积为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程，结果见表2。

表2 各被测成分的标准曲线方程、相关系数和线性范围

2.5 精密度试验

取“2.1”项下的混合标准品溶液，以“2.3”项下色谱条件连续进样测定5次，结果升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷含量RSD值依次为0.27%、0.25%。

2.6 稳定性试验

取同一批样品，按照“2.2”项下方法制备供试品溶液，以“2.3”项下色谱条件，分别于制备后0、2、4、6、12、24h进样检测各成分的峰面积，结果升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷峰面积24h内的RSD(n=6)分别为0.58%、0.72%，表明样品中各成分在24h内稳定。

2.7 重复性试验

取同一批样品6份，按照“2.2”项下方法制备供试品溶液，以“2.3”项下色谱条件进样测定，结果升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷含量RSD值依次为1.09%、1.24%。

2.8 加样回收试验

取“2.6”项已测知含量的同一批样品5份，每份精密加入已知浓度的混合标准品溶液5mL，按照“2.2”项下方法制备供试品溶液，以“2.3”项下色谱条件进样检测，计算回收率，结果见表3。

表3 各成分的加样回收率结果

2.9 样品含量测定

分别取升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品适量，加甲醇稀释成每毫升各含升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷12μg的混合对照品溶液。按照“2.2”项下方法制备供试品溶液，供试品溶液和对照试剂溶液各进10μL，以“2.3”项下色谱条件检测，记录色谱，计算含量，结果见表3。

表3 7批样品中升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的总量

3 讨论

升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷为防风中主要成分且较易提取[3]，查阅文献并无黄芪和白术含上述两种成分的相关报道，阴性对照实验也证实了这一点。本单位抽检的不同厂家不同批次的样品中升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量和比例均有不同，所以选择测定二者的总量作为定量标准。

从表3含量结果不难看出有厂家升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷含量极低，而现行药典中只要求检出5-O-甲基维斯阿米醇苷即可，并没有对玉屏风口服液中防风的质量有进一步要求。如此升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷含量极低的玉屏风口服液是否有治疗效果？这会不会是厂家以次充好又能逃避监管的一个漏洞？本方法采用HPLC梯度洗脱法将复方制剂中的特征成分成功分离，经验证定量准确、快速、重复性好，适用于日常检验工作，对“玉屏风口服液”质量控制的提高提供了方法，也对其它含有防风的中药成方制剂的质量控制具有指导意义。