NF-κB活化受体因子在胃癌中的表达及临床意义

李冬阳，李智，曲晶磊，曲秀娟，刘云鹏

（中国医科大学附属第一医院肿瘤内科，沈阳 110001）

胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一，临床病例多以进展期为主［1］，局部及远处转移是胃癌患者生存率低的主要原因。胃癌的侵袭转移是一个涉及肿瘤生物学行为、转移途径、转移器官特征等多重因素的复杂过程。

NF-κB活化受体因子 （receptor activator of NF-κB，RANK） 是肿瘤坏死因子受体超家族 （tumor necrosis factor receptor superfamily，TNFRS） 的成员。RANK最初从树突状细胞中克隆出来，被发现和证实在溶骨过程以及淋巴结发育中有重要作用，属于Ⅰ类跨膜蛋白［2-3］。既往研究［4-5］证明，RANK在乳腺癌、肺癌、前列腺癌、恶性黑色素瘤、肾癌等肿瘤细胞表面均有表达。

RANK主要通过RANK/RANKL/OPG通路发挥作用。近年来的研究［6-9］发现，此通路可诱导RANK阳性肿瘤细胞的迁移转移。而RANK在胃癌细胞的表达以及RANK/RANKL/OPG通路能否诱导胃癌细胞迁移在国内外报道较少。

本研究应用免疫组化S-P法，检测RANK蛋白在胃癌中的表达情况，并分析其与胃癌临床病理特征的关系以及对生存的影响，旨在探讨RANK在胃癌中的表达及临床意义。

1 材料与方法

1.1 临床资料

选取中国医科大学附属第一医院2006年4月至2011年12月手术切除的胃癌组织标本232例，术前均未行放疗、化疗及免疫治疗。其中，男166例，女66例。年龄29～80岁，中位年龄60岁。组织学类型均为腺癌，按分化程度分为：中高分化癌110例，低分化癌100例 （将印戒细胞癌、黏液细胞癌划入低分化腺癌组） ，混合型22例。其中有淋巴结转移者180例，无淋巴结转移者52例。浸润深度根据美国癌症联合委员会 （AJCC） 第7版胃癌TNM分期标准分期，T12例，T218例，T338例，T4174例。232例患者全部完成随访。中位随访时间为2年。

1.2 试剂

鼠抗人RANK单克隆抗体购自美国R&D systems公司；S-P检测试剂盒及DAB显色液均购自福州迈新生物技术开发有限公司。

1.3 检测方法

免疫组化染色采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶 （S-P） 法，操作方法按试剂盒说明书进行。均经DAB显色，苏木素复染。用已知阳性对照片作为阳性对照，PBS代替一抗作为阴性对照。

1.4 免疫组化检测结果判定

RANK均以胞膜和（或）胞质出现棕黄色颗粒为阳性染色，于400倍视野下随机选取5个不同视野，每个视野得分由阳性细胞比例和显色强度决定。阳性细胞比例：≤5%为0分、＞5%～25%为1分，＞25%～50%为2分，＞50%～75%为3分，＞75%为4分；显色强度：未着色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。2项分数乘积为该视野得分，5个视野分数的平均值为最后得分。最后按得分划分等级：0～1分 （-） ，2～4分 （+） ，5～7分 （++） ，≥8分（+++） 。 （-） 和 （+） 为阴性， （++） 和 （+++） 为阳性。

1.5 统计学分析

应用SPSS 18.0软件进行统计分析，RANK的表达与临床病理因素之间的关系采用Spearman等级相关性分析；RANK的表达与生存时间的关系采用Kaplan-Meier生存曲线及log-rank检验。P ＜ 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 RANK在胃癌组织中的表达

RANK的阳性染色位于细胞质和（或）胞膜，为均匀一致的棕黄色颗粒。在232例胃癌标本中有123例RANK高表达，阳性率为53%；亚组分析中，胃癌肠型患者91例标本中有64例RANK高表达，阳性率为70.3%。见图1。

2.2 RANK的表达与胃癌临床病理特征的关系

RANK的表达与性别、年龄、分化程度、浸润深度、临床分期以及淋巴结转移等病理因素无显著相关性 （P ＞ 0.05），Lauren分型相关 （P = 0.000 1） ，见表1。

图1 RANK在胃癌组织中的表达 ×100Tab.1 RANK expression in gastric carcinoma original magnification ×100

在亚组分析中，胃癌肠型91例中，RANK的表达与性别、年龄、浸润深度、临床分期以及淋巴结转移等病理因素无显著相关性 （P ＞ 0.05），与淋巴结转移度相关 （P = 0.032） ，见表2。

表1 胃癌组织中RANK的表达与临床病理特征的关系Fig.1 The relationship of RANK expression in gastric cancer with clinicopathological characteristics

2.3 RANK的表达与胃癌患者生存期的关系

RANK阳性组患者生存率为52.8%，阴性组患者生存率为58.7%，差异无统计学意义 （P = 0.306） ，见图2。亚组分析中，肠型胃癌RANK阳性组患者生存率高于阴性组，分别为46.9%和74.1%，两者有统计学意义 （P = 0.016） ，见图3。弥漫型胃癌RANK阳性组与阴性组生存率无统计学差异 （P = 0.664） ，见图4。

3 讨论

胃癌中肿瘤的侵袭转移是一个涉及多因素的复杂过程，多种基因在此过程中起重要作用。

RANK是TNFRS的成员。RANK最初被发现在溶骨过程以及淋巴结发育中有重要作用［10］。既往研究表明，RANK在肿瘤组织中高表达，如骨肉瘤［11-12］、软骨肉瘤［13］、乳腺癌［14］、前列腺癌［15-16］、肾癌［17］、口腔鳞癌［18］、肺癌［8］、甲状腺癌［19］以及黑色素瘤［20］等。本研究结果显示，胃癌中RANK高表达，在细胞膜、细胞质均有表达，阳性率为53%，肠型胃癌中阳性率为71.7%。

RANK与Lauren分型相关 （P = 0.001） ，提示RANK在肠型及弥漫型胃癌中存在差异性表达。国内外无类似报道。相关研究提示，肠型胃癌起源于胃黏膜的肠上皮化生，弥漫型胃癌起源于胃固有黏膜，与肠化生无关。RANK是否能影响肿瘤细胞发生过程中进一步向肠型分化，需要进一步研究验证。

表2 肠型胃癌组织中RANK的表达与临床病理特征的关系Fig.2 The relationship of RANK expression in intestinal-type gastric cancer with clinicopathological characteristics

图2 胃癌组织中RANK的表达与患者生存期之间的关系Fig.2 The relationship of the RANK expression in gastric cancer with overall survival

图3 肠型胃癌组织中RANK的表达与患者生存期之间的关系Fig.3 The relationship of the RANK expression in intestinal-type gastric cancer with overall survival

RANK/RANKL/OPG是近年来研究较多的信号通路，RANKL和RANK结合后，可诱导RANK阳性的胃癌细胞侵袭转移，在乳腺癌，前列腺癌中也有类似报道［21-23］。考虑RANK可能是肿瘤细胞侵袭转移通路的重要受体。此外，在乳腺癌和前列腺癌和肺癌的研究［24］中，研究者提示RANK/RANKL/OPG系统有可引起肿瘤细胞定向骨转移，在胃癌中相关研究较少，有文献［25］报道，胃癌骨转移不依靠RANK/RANKL/OPG通路。本研究结果显示，RANK通路在肠型胃癌高表达与淋巴结转移度相关 （P = 0.032） 。由此推测，RANK在肠型胃癌中对肿瘤细胞的迁移可能与局部侵袭及淋巴结转移相关。JONES等［6］在乳腺癌患者转移淋巴结中发现RANK表达。DANIELE等［26］在对93例浸润性导管癌及小叶乳腺癌研究发现，RANK与淋巴结转移相关 （P ＜ 0.05）。在既往胃癌中研究［27］中存在类似报道，提示RANK通路在胃癌肿瘤的发生及诱导淋巴结和脏器转移中起一定作用。

图4 弥漫型胃癌组织中RANK的表达与患者生存之间的关系Fig.4 The relationship of the RANK expression in diffuse-type gastric cancer with overall survival

RANK高表达对患者生存的影响既往研究例数较少，DANIELE等［26］对93例浸润性导管癌及小叶乳腺癌的研究发现，RANK阳性的患者存在生存劣势，且有统计学意义 （P = 0.034） 。本研究中，RANK在弥漫型胃癌中与总生存无关，而在肠型胃癌中RANK阳性的患者存在生存劣势 （P = 0.016） 。考虑肠型胃癌中对生存的影响可能与RANK阳性引起肿瘤细胞局部及淋巴结侵袭转移相关。

综上所述，RANK在胃癌中与Lauren 分型相关，且在亚组分析中，肠型胃癌患者的RANK表达与淋巴结转移及生存预后相关。RANK可能是一个胃癌发生发展相关的有价值的分子标记物，可以成为肠型胃癌诊断和治疗的一个新的作用靶点，其具体机制需要进一步研究证实。