应用超纯水代替蒸馏水配制绵羊精液葡卵柠稀释液的试验

连晓春，蒋烈戈

（1.新疆兵团畜牧兽医工作总站，新疆 乌鲁木齐 830000；2.新疆兵团第九师畜牧科学研究所，新疆 额敏 834601）

超纯水是应用预处理、电渗析、紫外线杀菌、反渗透、离子交换、超滤和各种膜过滤等技术，将水中的导电介质几乎完全去除，同时将水中不离解的胶体物质、气体及有机物均去除至很低程度的水。超纯水的电阻率大于18 MΩ.cm,这种水中除了水分子(H2O)外，几乎没有什么杂质。随着超纯水生产技术的提高，它被应用到电子、实验室、食品、等领域。蒸馏水是指用蒸馏方法制备的纯水，可分一次和多次蒸馏水，通过蒸馏，一次蒸馏可将不挥发的矿物质盐类除去。我们在配制绵羊人工授精稀释液时运用一次蒸馏水，利用的就是蒸馏水无电解质，无游离离子。目前的蒸馏水机多为在环型冷却管结构，靠水流量冷却，大都存在结构落后、浪费水资源、能耗高（4～20 KW）、生产效率低（5～20 L/H）、手动，需专人看管，易干烧，易结垢，难清洗，运行成本高，易中断使用等缺陷，而超纯水机随用随取,造水及时，生产时一键式操作，全自动制水，安全、可靠，无需专人值守，出水率高（1～100 L/H），超纯水机的功率在50～200 W，能耗大大降低，超纯水机还具有自动清洗功能，便于维护，运行成本低。针对当今社会提倡环保、节能、减排的基础上，提倡使用超纯水替代蒸馏水。

传统绵羊精液葡卵柠稀释液用蒸馏水制作，基层绵羊配种站在配制葡卵柠稀释液时，蒸馏水多在上级单位购买，而目前县级以上家畜品种改良站多已配备了超纯水机，蒸馏水的使用量越来越少，蒸馏水机已逐步淘汰。通过查阅相关文献，在家禽中的鸡[1]、家畜中的猪[2]、牛[3]等畜禽均使用传统的稀释液，刘威、孙计富在羊的人工授精技术研究进展中提出，要继续积极推广改进人工授精操作技术[4]，应开展稀释液改良方面的研究。也有人使用注射用水[5]，基本没有大的差异。因此本次实验旨在探讨应用超纯水替代蒸馏水制作绵羊精液葡卵柠稀释液，以简化稀释液配制程序，加快绵羊品种改良推广工作进程。

1 材料与方法

1.1 试验时间与地点

本次实验于2016年11月10日-12月5日在新疆兵团第九师161团育种站进行，试验母羊为体重45～50 kg的成年经产母羊，2017年4月1日-5月10日统计产羔结果。

1.2 试验器材

1.2.1 超纯水

采用美国热电公司BARNSTEAD TⅡ型超纯水机制作，它通过反渗透单元将自来水转化为RO纯水的水质，接近于国标实验室三级用水标准与一次蒸馏水，故冲洗器皿等一般实验室分析用水均可使用。

1.2.2 蒸馏水

采用苏州江东精密仪器YAZD-5型蒸馏水机制作，功率4.5 KW，每小时出水量5 L。

1.2.3 稀释液的配制

用分析天平（精度0.001 g）称取葡萄糖3.0 g，柠檬梭钠1.4 g，用量桶量取蒸馏水或超纯水100 mL，卵黄20 mL，按葡萄糖－卵黄－柠檬梭钠稀释液配制要求，进行配制。

1.3 试验设计

1.3.1 精液采集

采用161团育种站饲养的德国美利奴、萨福克种公羊进行采精，种公羊要求：体质外貌达到品种要求，达到中等以上种用体况，并有旺盛的性欲，精液品质优良。将采取的精液在300-600倍的显微镜下进行镜检，外观正常、密度中等以上、活力在0.8以上的精液方可进行稀释处理。

综上所述，建筑工程管理专业教育是向社会输送高素质建筑管理人才的重要渠道，近些年来，建筑行业的迅猛发展带动了我国建筑工程管理专业的发展，同时也使得其中存在的一些问题逐渐突显出来。对此，我国各高校应该积极吸收国外办学经验，结合自身优势做好专业建设，为我国建筑行业发展提供更强的推动力。

1.3.2 精液稀释

将收集的精液一分为二，按精液稀释要求，分别用蒸馏水与超纯水制作的稀释液进行2倍稀释。

1.3.3 密度检查

稀释后用红细胞计数法对精液进行密度检查，计算单位输精量（0.1 mL）内的有效精子数，镜检合格的稀释精液每份留下0.5 mL左右，其余的送去输精，间隔2 h、4 h，再次对置于常温环境（25℃左右）下稀释精液进行密度检查。

1.3.4 输精

按绵羊人工授精程序，对输精用具消毒后，进行输精，输精部位：子宫颈内0.5～1.0 cm处，输精量0.1 mL，输完精后对精液进行回检;间隔8～10 h进行第二次输精。

输精时，对母羊进行标记，记录。

1.4 测定指标与方法

1.4.1 精子密度

用血细胞计数板进行。先用红细胞稀释管吸取稀释精液到0.5刻度处，用纱布擦去吸管头沾附的精液，再吸取3%的氯化钠溶液到刻度101处，用拇指和中指按住吸管的两端，摇匀，使氯化钠溶液与稀释精液充分混匀，这样将稀释精液再次稀释到200倍，吹掉管内最初的几滴液体，然后将吸管尖放在计算板中部的边缘处，轻轻滴入一小滴，让其自然流入计算室内，这时在600倍显微镜下计算精子，计数5大方格精子总数乘以1千万即为稀释后1 mL稀释精液的精子数[6]。每个样本，至少要重复检查两次，取其平均值，若两次结果偏差在10%以上，则需做第三次，取第三次结果与前两次中与第三次结果相近的一次的平均值，作为最后结果。

1.4.2 返情率

发情配种后，间隔17～18 d，统计已配羊只的返情情况，计算试验组与对照组的返情率[7]。返情率%＝已配母羊返情羊只数/参配母羊数×100%。

1.4.3 受胎率

间隔145～155 d，统计试验组与对照组绵羊产羔情况，计算受胎率[8]。其中产羔母羊数包括流产母羊数。

1.5 数据处理

以稀释后0、2、4 h的精液密度、第一情期受胎率、受胎率参数为检验对象，进行差异显著性检验。

2 试验结果与分析

2.1 精子密度

稀释工作完成后，分稀释后、2 h、4 h用血细胞计数法统计精液中的精子数，精液稀释2 h内后，通过显著性检验（P＜0.05），试验处理对结果没有影响或无效,蒸馏水组与超纯水组之间没有较为明显的差异，均能达到绵羊人工授精精子数要求。由于配种工作在新疆兵团第九师161团冬牧场进行，在11月份，这里外界气温已达零下15℃左右，因此室内温度也极难控制，稀释后4 h，此时精子数量也明显降低，这与精液品质、稀释液无关，此时两种稀释液稀释出的精子数也没有大的差异，见表1。

表1 精子密度亿

2.2 返情率

与配母羊标记后，同群放牧，间隔18 d后，统计返情羊数，再次进行人工授精，蒸馏水组与超纯水组返情羊数分别只数为48只、46只，占总试验羊数的16.8%、17.2%，二者没有明显的差异，见表2。

表2 返情率统计只、%

2.3 受胎率

2015年4月1日至5月15日，登记标记母羊产羔情况，蒸馏水组产羔母羊数265只，超纯水组产羔母羊数249只（二者均包括流产母羊），母羊总受胎率达到了93%、93.3%，二者之间没有大的差异，见表3。

表3 受胎率统计表只、%

3 讨 论

稀释前后的精液密度用红细胞计数法计算，最小相差0.02亿，为总数的0.28%，最大相差0.23亿，在稀释后、稀释后2 h、稀释后4 h，这几个阶段来看，无较大的偏差。

绵羊的鲜精人工授精技术由多个因素影响[9，10]，在基层，最容易观测、使用的方法是对绵羊返情率和受胎率的记录[11]，这种方法操作简单。使用超纯水代替蒸馏水配置绵羊人工授精稀释液，通过我们记录的552只母羊的对比，超纯水组返情率17.2%，传统蒸馏水组16.8%，二者相差0.04%，超纯水组母羊总受胎率达到了93.3%、传统蒸馏水组93%，这两个指标之间均没有大的差异，对绵羊总体受胎率没有影响。

4 结 论

影响绵羊人工授精稀释液品质的因素很多，使用蒸馏水，主要因素是考虑稀释液与精液为等渗溶液，低渗溶液或高渗溶液都会因渗透压的缘故造成精子死亡，超纯水与蒸馏水相比，均为无电解质，无游离离子，故均能达到稀释液配制要求。使用超纯水相比蒸馏水而言，具有随用随取,造水及时，生产时一键式操作，全自动制水，安全、可靠，无需专人值守，出水率高（10～100 L/H），能耗低，可自动清洗，便于维护，运行成本低的特点，因此使用超纯水制作绵羊人工授精精液稀释液，可简化稀释液配制程序，加快绵羊品种改良推广工作进程，值得推广。