ROC曲线和Logistic回归评估PAF联合NFATc1对冠心病的诊断价值*

韩艳，刘煜昊，程江涛，王宪沛，王忠民，吴秀娟，高传玉，杨朝宽

（河南省人民医院 心内科，河南 郑州 450003）

冠状动脉粥样硬化性心脏病（简称冠心病）主要是由于脂质代谢异常导致脂质沉积在动脉内膜上形成斑块，引起管腔狭窄心脏缺血；斑块的形成和稳定性是冠心病预后的主要因素[1]。血小板活化因子（platelet-activating factor, PAF）是一种内源性磷脂，能介导血小板的活化，诱导巨噬细胞分化；活化T淋巴细胞核因子c1（nuclear factor of activated T c1 cells,NAFTc1）能通过基因转录调控炎症反应，同时参与血管钙化。研究发现[2-3]，PAF和活化NAFTc1分别参与动脉粥样硬化斑块的形成、炎症反应、血管和心脏瓣膜的钙化，而钙化是导致动脉粥样硬化的重要原因。冠心病的临床检测以多排螺旋CT、冠状动脉造影、血管内超声为主，但是冠心病往往早期症状不明显，容易错过诊断。通过血液检测能够在早期识别预防心血管疾病，对其预防治疗具有重要意义。目前，冠状动脉造影常用于冠心病的诊断和检测。本文通过血清检测PAF和NAFTc1，以冠状动脉造影结果为金标准，采用ROC和Logistic曲线探讨PAF和NAFTc1在冠心病评价中的应用。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2014年1月-2016年1月在河南省人民医院接受治疗的188例疑似冠心病患者为研究对象。根据冠状动脉造影检测结果，分为对照组（56例）和冠心病组（132例）。对照组患者出现类似冠心病症状，进行心肌酶、肌钙蛋白检查排除冠心病，进行影像学检查和冠状动脉造影确认排除冠心病（血管狭窄＜50%）；冠心病组所有患者符合冠心病临床症状，并经心肌酶、肌钙蛋白检查确诊冠心病，进行冠状动脉造影确认冠心病（血管狭窄≥50%），进行血管内超声检测，结果出现弱回声区或无回声区[4]。所有患者动脉造影前口服阿司匹林0.3 g、氯吡格雷0.4 g，确诊后冠心病患者根据二级预防进行规范治疗[5]。本研究已获得患者知情同意，并经本院伦理委员会批准。

1.2 排除标准

排除严重肝、肾功能障碍的患者；排除心肌病、瓣膜性心脏病患者；排除合并恶性肿瘤患者；排除伴有各种急慢性感染性疾病患者。

1.3 方法

所有患者于清晨空腹抽取外周静脉血5 ml，离心去上清（3000r/min离心，离心10min），置入-80℃冰箱冷冻保存，统一检测。采用ELISA法分别检测血清中PAF、NAFTc1含量，所有操作严格按照试剂盒说明书进行，试剂盒由上海润裕生物科技提供。

1.4 统计学方法

数据分析采用SPSS 19.0统计软件，计量资料以均数±标准差（±s）表示，比较采用t检验，计数资料以率（%）或构成比（%）表示，比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义；采用Logistic回归方程和ROC曲线判定单项检测和联合检测在冠心病诊断中的价值。

2 结果

2.1 基线资料比较

两组患者在糖尿病、高血压、高血脂和吸烟史上差异有统计学意义（P＜0.05），在年龄、性别、家族史比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

2.2 两组患者血清PAF、NAFTc1浓度比较

两组患者血清PAF、NAFTc1浓度，经t检验，差异均有统计学意义（P＜0.05），冠心病组患者血清PAF浓度和血清NAFTc1浓度均高于对照组。见表2。

表1 两组患者基线资料比较

2.3 Logistic回归分析结果

将PAF、NAFTc1转化为等级变量，对其赋值如下，PAF：＜13.5ng/ml赋值 0，≥ 13.5ng/ml赋值 1。NAFTc1：＜26.7ng/ml赋 值 0， ≥ 26.7ng/ml赋 值 1。以动脉造影结果是否为冠心病作为因变量以PAF、NAFTc12个单因素为自变量，进行二项分类Logistic回归分析（见表3）。得到Logistic回归模型：Logit（P）=-8.463+0.417PAF+0.098 NAFTc1，该Logistic回归方程诊断的准确率为85.64%。

表2 两组患者血清PAF、NAFTc1浓度比较 （±s）

表2 两组患者血清PAF、NAFTc1浓度比较 （±s）

组别 PAF/（ng/ml） NAFTc1/（pg/ml）对照组（n =56） 8.95±5.74 22.78±3.15冠心病组（n =132） 18.13±4.72 30.58±5.24 t值 10.498 12.568 P值 0.000 0.000

2.4 应用ROC曲线评价血清PAF、NAFTc1单项检测和联合检测的诊断效能

分别以血清PAF、NAFTc1作为独立检验变量，并以Logit（P）作为联合检验变量进行多变量ROC曲线分析，结果见附图。联合检测的曲线下面积为0.900，高于PAF曲线下面积0.806和NAFTc1曲线下面积0.815，差异有统计学意义（P＜0.05）（见表4）。PAF检测阈值为9.75ng/ml，敏感性为0.76，特异性为0.62；NAFTc1检测阈值为23.95pg/ml，敏感性为0.75，特异性为0.64。联合检测敏感性为0.86，特异性为0.71。

附图 血清PAF、NAFTc1单项检测和联合检测的ROC曲线图

表3 二项分类Logistic回归分析结果

表4 血清PAF、NAFTc1单项检测和联合检测的曲线下面积比较

3 讨论

冠心病是由于患者的冠状动脉发生动脉粥样硬化，导致血管腔狭窄，继而造成心肌缺血的心脏病。其病理基础是体内的脂质代谢紊乱，使得脂质在动脉内膜发生堆积沉淀形成白色斑块，随着白色斑块的堆积增厚，动脉血管壁增厚，弹性下降，管腔变狭窄，使得血液流通受阻，心肌缺血，发生心绞痛，甚至可能导致心力衰竭、发生猝死，严重危害患者生命安全。许多冠心病患者不表现出临床症状，有的患者甚至在急性发作时临床症状仍不明显，如果能通过简单的血液检查可以对冠心病做出诊断，尽早做出预防措施对冠心病患者的预防和治疗有重要意义。

动脉粥样硬化的形成、发展、斑块破裂是冠心病发病的决定性因素，同时在整个病理过程中，机体内有多种炎症因子参与[6]。PAF参与动脉粥样硬化的形成，NAFTc1是一种炎症因子，参与动脉粥样硬化炎症反应，两者与冠心病的发病密切相关[7]。PAF是一种内源性磷脂，其化学结构已经被阐明[8]。血小板、巨噬细胞、内皮细胞、肥大细胞以及中性粒细胞等多种细胞都能产生PAF，在体内具有多种重要生物学作用。PAF参与动脉粥样硬化的机制为：①PAF能诱导血小板活化，能通过与血小板表面的相应的PAF受体相结合，通过G蛋白信号通路激活三磷酸鸟苷酶和磷酸酯酶，加强血小板凝聚，使血小板在冠状动脉内膜上发生黏附，释放多种炎症因子，同时血小板凝聚会加大血栓形成风险，阻碍血液循环，加强冠心病发病风险[9]。②当冠状动脉内膜发生损伤时，内皮损伤会诱导内皮细胞分泌PAF，PAF会诱导巨噬细胞参与产生超氧自由基，使低密度脂蛋白被氧化，对内皮血管造成损害；同时诱导单核细胞通过内皮间隙，分化成为巨噬细胞，再通过巨噬细胞的吞噬作用清理氧化低密度脂蛋白，导致脂质堆积，形成泡沫细胞；泡沫细胞堆积是动脉粥样斑块形成的早期病理特征[10]。本研究比较对照组和冠心病组患者发现其血清中PAF浓度差异有统计学意义，冠心病组PAF浓度更高。这与海祺旻等[11]的研究结果PAF浓度与冠心病病变严重程度呈正相关相似。

除了PAF，动脉粥样硬化过程中机体内还有多种炎症因子、核转录因子参与[12]。NAFTc1是NAFT家族中的一种，最早被发现于T淋巴细胞，后来发现在单核巨噬细胞（动脉粥样硬化的特征细胞）也有表达，其主要功能是通过基因转录调控炎症反应，同时与血管钙化密切相关。NAFTc1可以通过与磷酸酶结合发生去磷酸化进入细胞核，参与T细胞分化和活化，进而调控细胞免疫功能；还能在进入细胞核后，直接诱导多种炎症因子、白细胞介素、趋化因子转录，参与炎症反应，加速动脉粥样硬化进程[13]。NAFTc1还是钙调神经磷酸酶（calcineruin, CaN）的底物之一，能通过Ca2+/CaN/NAFT途径参与血管钙化、心脏瓣膜钙化[14]，而血管钙化是导致动脉粥样硬化的重要原因之一。本研究中对照组和冠心病组患者血清NAFTc1浓度差异有统计学意义，冠心病组NAFTc1浓度更高。陈金龙等[15]发现NFATc1是血管狭窄的治疗靶点，通过抑制NFATc1能有效抑制平滑肌细胞增殖，减少血管内膜过度增生。严洋[16]通过抑制小鼠NAFTc1有效抑制动脉粥样硬化斑块形成，认为NAFTc1与斑块的稳定性相关。本研究结果与之类似。

关于PAF或NAFTc1与冠心病的相关性已有报道，但对两者在冠心病诊断中的价值还不明确。ROC曲线和Logistic回归分析是2种常用的诊断效能统计方法，广泛应用于各种指标对疾病的诊断作用[17]。本研究在确认PAF、NAFTc1在冠心病患者和非冠心病患者血清中差异有统计学意义后，以这2个单因素为自变量，进行二项分类Logistic回归分析，获得Logistic回归模型，得到2个因子的联合检测指标。再以Logit（P）作为联合检测指标，使用ROC曲线分别判定PAF、NAFTc1以及联合检测在冠心病诊断中的作用（曲线下面积在0.7～0.9时表示有较高的诊断价值，曲线下面积超过0.9时表示有极高的诊断价值）。结果发现联合检测的曲线下面积显著高于单项PAF和NAFTc1检测，具有较高的诊断价值。

综上所述，本文通过Logistic回归方程和ROC曲线检验血清PAF、NAFTc1以及两者联合检测在冠心病诊断中的价值，发现2个因子可用于冠心病筛查，两者联用具有较高的诊断价值，血清检测简单方便，可为临床诊断提供一条新的途径。但本研究样本量存在一定局限性，可能带来一定误差，下一步需要扩大样本进行随机对照研究来进一步验证PAF与NAFTc1对冠心病的诊断价值。