浅析水产品中硝基呋喃类代谢物能力验证

2018-10-10邰晓亮张建平刘淑华

新疆农业科技 2018年3期

邰晓亮，张建平，魏丽，刘淑华＊

1.乌鲁木齐市农产品质量安全检测中心，乌鲁木齐 830000 2.奇台县农业技术推广中心，新疆昌吉 831800

关键字：水产品；硝基呋喃；代谢物；验证

能力验证是按照预先制订的准则，通过实验室间的比对来评价参加者的能力[1]，也是为确保实验室维持较高的检测水平而对其能力进行考核、监督和确认的一种验证活动，它可以补充实验室内部的质量控制程序，增加实验室客户对实验室能力的信任，有利于实验室整体水平的提高[2]。每年各级农业部门下达相应监测任务时，除了考察农产品质量安全检测机构必须具备的资质外，能力验证结果也成为政府做出选择的重要参考，通过参加能力验证，发现机构自身在质量控制过程中的问题和漏洞，得以及时制定相应的纠正措施，进行纠正和改进，进入良性循环，持续提高机构的管理水平。

自2004年起，农业部组织开展了水产品中药物残留、重金属及贝类毒素等3大方面检测能力验证，涉及的考核的项目为硝基呋喃类代谢物、孔雀石绿、磺胺类和氯霉素等。农业部历年来考核项目如下表1，可以看出硝基呋喃类代谢物项目是水产品药物残留检测能力验证的重点[3]。

表1 水产品药物残留检测能力验证考核项目

农业部硝基呋喃类代谢物能力考核采用《水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定液相色谱－串联质谱法》（农业部783号公告-1-2006），考核方式为集中制样、定点发样。由能力验证参加单位至指定地点随机抽取包括考核样品、基质样品后，在96小时内上报检测结果[4]。检测结果须报3个平行样的结果、平均值和相对标准偏差，并附原始记录、谱图和标准曲线、加标记录表，采用真值法进行评判，检测结果回收率在70.0%～120.0%之间为合格，有任1项结果超过上述范围及存在定性错误的，判为不合格。

1 能力验证前的准备工作

1.1 标准溶液的配制

重新配制标准溶液或购置有证标准物质，确认标准物质的有效期、纯度、结构和分子量，使用移液管配制至所需浓度。SEM、AHD标准品因是盐酸盐，称取时，应根据分子量和纯度进行折算，配制时可借助超声波助溶，标准储备液低温放置后应恢复至室温。混合标准工作液和混合内标标准工作液现配现用。

1.2 选择合适的标准溶液线性范围

线性范围过宽影响定量结果的准确性，过窄影响线性系数。通常选择做5～7个浓度点，具体跨度则根据需要检测的样品浓度决定，建议标准曲线的最低点为检出限浓度点附近为宜，待测样品的浓度最好在曲线的中间左右位置，同时必须保证标准曲线相关系数在0.999以上。硝基呋喃类代谢物的标准曲线需要衍生化，因此要与测试样品同时进行前处理。

1.3 仪器条件的优化

对实验过程中涉及的仪器设备进行核查，检测设备的准确性是影响能力验证结果的关键因素之一，必须确保在检定或校准有效期内，并且满足实验要求，如达不到检测要求，需查找原因并优化仪器和检测条件，包括更换色谱柱，清洗质谱仪的离子源、喷雾传输管。可将新配置的标准溶液与以前的标准溶液同时上机测定，比较响应值，正常情况下响应值应一致，或有所提高，如果新配的标准溶液灵敏度不如以前，需要查找原因。

1.4 实验器皿的清洗

所用的实验器皿在使用前按照规定要求进行洗涤，必要时用甲醇润洗，对于进样瓶等较难清洗的器皿，建议使用甲醇等试剂超声清洗，尽量减少外来污染因素的引入。为确保实验过程中对所用试剂的控制，必须做试剂空白，除不加样品外，所有的试剂都必须参与前处理过程，包括添加内标等，并且确保试剂空白中待测物的检出值在方法检出限以下。

2 领样及样品前处理

检查编号是否准确，包装是否完整、无破损，填写领样记录表，领考核细则及证明文件。将样品装入加干冰的泡沫箱中。开始实验前严禁用微波等加热方式对样品解冻，应在室温下自然解冻后再进行前处理。样品前处理过程中，应尽量避光操作。提取过程如下：

（1）加入衍生试剂之前需用玻璃棒将样品分散，以提高酸解效率，有利于衍生。

（2）将盐酸溶液浓度提高至0.3 mol/L（移取27 mL浓盐酸，用水定容至1 000 mL），调节pH约为1。

（3）衍生化后加入磷酸氢二钾浓度为1.0 mol/L（加入25 mL 30%的氢氧化钠溶液），调节PH值至7.0～7.5，只需每个品种调试1个样品即可。

（4）乙酸乙酯提取时要充分振荡，提高萃取效率，如发生乳化可将离心转速提高至10 000 r/min，或者增加离心时间。

（5）氮吹浓缩后若溶解液浑浊，可以加2 mL正己烷混匀后放入冰箱中冷冻0.5～1 h，高速（8 000～10 000 r/min）离心6 min，直接取下层溶液过0.22 μm滤膜测定。

空白实验包括试剂空白和对应的基质空白，除不加标准溶液外，其他步骤按照已确定的前处理方法进行，上机比较本底是否在目标物出峰处有干扰。

质控样品和待测样品必须在相同条件下进行前处理并测定[5]。添加浓度通常为2～5倍定量限，尽量与待检样品的浓度保持一致。质控样品可以选择在空白样品的基础上进行加标，也可把已知量值的阳性样品当作质控样品，包括以往实验室参加能力验证多余的阳性样品、多家实验室进行比对过的样品或可购买的有证标准样品。同时确保质控样品和待检样品检测时每个步骤操作的一致性，降低误差。

采用C18色谱柱进行测试，推荐进样量为10 μL。流动相中的有机相推荐使用甲醇，因为其灵敏度和分离效果更好。不同厂家的仪器对水相的选择有差别，通常采用2 mmol/L醋酸铵或者0.1%甲酸。SEM是呋喃西林药物的特征性代谢产物，但是它作为内源性物质在甲壳类产品中普遍存在，因此在对这类样品进行测试时，应考查该药物的带入途径。

3 结果分析

3.1 平均值法计算检测结果

取平均值的目的是避免偶然误差、降低操作误差、提高可信度。在检测过程中有时会发现3个能力验证样品中有2个的结果平行性较好，有1个数值偏离，无法确认哪个数值更接近真值，建议取数据的平均值，减少误差[6]。忌讳人为剔除平行性差的样品结果，将自认为平行性好的样品重复测定多次后取平均值上报，有时反将真实结果排除在外。