猪葡萄球菌分离鉴定及药敏试验
2018-10-10王宏燕
张 健，梁 乔，王宏燕
（1.辽宁省动物疫病预防控制中心，辽宁 沈阳 110164；2.辽宁省动物医学研究院，辽宁 沈阳 110164）
猪葡萄球菌主要引起猪的渗出性皮炎，又称仔猪油皮病[1]，是最常见的葡萄球菌感染。该病的发生和流行无明显的季节性，一年四季均可发生。此病需要特别注意皮肤损伤，防止外伤是关键[2]。感染病猪还可能会出现败血性多发性关节炎。猪葡萄球菌为条件致病菌、革兰氏阳性菌，常寄居在皮肤、黏膜上。当动物机体抵抗力降低或皮肤、黏膜破损时，病原便乘虚而入[3]。猪葡萄球菌是导致猪渗出性皮炎的病原，有资料显示从患有渗出性皮炎的猪分离到该菌的几率是100%[4]。猪葡萄球菌对生长条件要求不高，可以在普通营养琼脂上生长。
1 材料与方法
1.1 材料
（1）采集具有典型临床患病症状的患病猪的肝、脾、心、肺等组织脏器各3份。
（2）培养基、试剂。营养琼脂培养基（产品批号20150608），购于北京奥博星生物技术有限公司；麦康凯培养基（产品批号20150708），购于北京奥博星生物技术有限公司；药敏纸片，购于杭州微生物试剂有限公司；微量生化鉴定管，购于杭州微生物试剂有限公司；VITEX2革兰氏阳性细菌鉴定卡；其他为实验室常规试剂。
（3）试验于2018年1月18—24日在辽宁省动物疫病预防控制中心实验室进行。
1.2 方法
1.2.1 细菌分离、纯培养 无菌操作采集病猪的肝、脾、肺等组织脏器划线分区分别接种于普通营养琼脂和麦康凯琼脂平板培养基上，放入恒温培养箱37℃培养24 h后，观察细菌的生长状况及菌落特征，在普通营养琼脂平板挑取中等大小的灰白色菌落（所对应划线区内麦康凯上无菌落生长）进行涂片、染色、镜检。革兰氏染色、形态、大小及菌落形态符合猪葡萄球菌特征描述，用普通营养琼脂培养基平板纯培养。
1.2.2 细菌生化试验 采用微量生化反应管，将纯培养的菌株接种于生化反应管中，按照说明书要求的不同时间观察试验结果并记录。
1.2.3 细菌鉴定仪 应用梅里埃的细菌鉴定仪，选取革兰氏阳性细菌鉴定卡，挑取18～24 h营养琼脂纯培养的菌落于0.45%的NaCl（3 mL）中，将菌浊度调至0.5～0.63之间，放入阳性卡，上机。6～8 h查看结果。1.2.4 药敏试验 采取常规药敏纸片法，参照文献[5]挑取已分离鉴定的菌落划线接种于MH琼脂培养基后，将病原菌纯培养18～24 h，挑取纯培养的菌落放置于无菌的生理盐水中，制成菌浊液相当于0.5麦氏单位，用灭菌棉签蘸取适量菌浊液，均匀涂抹到MH琼脂培养基表面，反复几次，最后用镊子夹取药敏片沿平皿周围贴好药片，完成后置于37℃恒温培养箱中，培养18～24 h后观察结果。测量抑菌环直径，并记录结果。
2 试验结果
2.1 细菌分离与培养结果
2.1.1 细菌纯培养结果 无菌采集，划线分区接种，接种在营养琼脂和麦康凯琼脂平板上，37℃18～24 h恒温培养箱培养，发现普通营养琼脂平板上长出灰白色不透明的圆形菌落，相对划线区麦康凯平板上不生长。挑取一个菌落后纯培于普通营养琼脂和麦康凯平板上，37℃18～24 h恒温培养箱培养，营养琼脂平板上长出边缘光滑，突起，湿润，不透明的灰白色菌落，4℃放置，部分菌落呈圆润的点状，菌落颜色变白黄。麦康凯平板上不长。
2.1.2 染色镜检 将菌落涂片，革兰氏染色后镜检。菌落镜检呈革兰氏阳性紫色，镜检可见菌落呈球形，单个，成对或聚集呈葡萄串状，无芽孢或荚膜（图1）。
图1 镜检图像
2.2 生化试验
猪葡萄球菌的生化试验结果见表1。
表1 猪葡萄球菌生化试验结果
2.3 细菌鉴定仪
应用梅里埃的细菌鉴定仪，细菌鉴定仪结果显示为95%的猪葡萄球菌。
2.4 药敏试验
测量抑菌圈直径，并记录结果。检测结果根据NCCLS标准进行判定，分 3级：敏感（S）、中敏（I）和耐药（R），见表2。
目前对猪葡萄球菌进行治疗可选用头孢类药物，但对青霉素的敏感性正在逐年降低。治疗的同时，应给予病猪充足的饮水。
表2 猪葡萄球菌药敏试验结果
3 讨论
（1）葡萄球菌广泛分布于自然界，葡萄球菌病的发生和流行有许多诱发因素，如饲养管理差，卫生条件不好，营养不良及机体抵抗力下降等[6]。猪群发生本病，一要早诊断，快治疗，并要立即采取防控措施控制该病；二要加强生猪的饲养管理，防止因圈舍环境脏乱而降低生猪抗病力，及时调整生猪饲养密度，降低感染几率；三要做好猪圈舍的卫生外，还应要严格控制和隔离有受传染病菌威胁的病猪，以便减少其与健康猪的接触；四要对被污染的圈舍和物品及各种器械用具消毒。猪渗出性皮炎在临床上经常发生，对猪场的生产影响较大[7]。
（2）近年来，仔猪渗出血性皮炎的发生与流行有增加趋势[8]。本试验的药敏试验显示，该菌对青霉素类、林可酰胺类、大环内酯类、氨基糖苷类、喹诺酮类、四环素类药物均耐药，对头孢类药物较敏感，建议用作仔猪渗出性皮炎的治疗。同时采取对症治疗，给予发病猪足够的体液替代品[9]。目前抗生素的普遍使用和滥用极易使细菌产生耐药性，尤其一些散养户缺少一定的药理知识。本试验表明猪葡萄球菌耐药性在上升，耐药性的产生直接影响疾病的治疗和控制[10]。
