绵羊传染性胸膜肺炎的诊断与防治

赵洁雅　夏俊　杨会国　郝耿　马文戈　陈世军

摘 要：以新疆某羊场疑似传染性胸膜肺炎的绵羊为研究对象，对羊只病情和症状进行跟踪记录，对死亡羊只进行剖检；无菌采集病料后通过绵羊支原体PCR和细菌培养的方法进行实验室病原诊断。结果显示，死亡羊只肺部发生实变、黏连、胸膜壁粗糙增厚、气管内有大量白色泡沫，具有典型的纤维素性胸膜肺炎的剖检特征；此外绵羊支原体PCR检测结果为阳性，而细菌培养结果阴性，最终确诊该疫情为绵羊支原体引起的传染性胸膜肺炎。本文通过对绵羊支原体肺炎的临床症状、病理变化、实验室诊断等方面的介绍，以期为今后该病的防控工作提供指导和借鉴。

关键词：绵羊；支原体；诊断；防控

中图分类号：S858.26 文献标识码：A DOI 编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2018.07.007

Diagnosis and Prevention of Infectious Pleuropneumonia in Sheep

ZHAO Jieya1， XIA Jun2， YANG Huiguo3， HAO Geng3， MA Wen'ge2， CHEN Shijun2

（1. College of Animal Madicine， Xinjiang Agricultural University， Urumqi， Xinjiang 830000，China； 2.Institute of Veterinary Science， Xinjiang Academy of Animal Science， Urumqi， Xinjiang 830000，China； 3.Institute of Animal Science， Xinjiang Academy of Animal Science， Urumqi， Xinjiang 830000，China）

Abstract： The author took the sheep suspected of infectious pleural pneumonia in a sheep farm in Xinjiang as the research object， recorded the condition and symptoms of the sheep， and dissected the dead sheep. The pathogens were diagnosed by PCR and bacterial culture. The results showed that the lungs of the dead sheep were thickened and clung， the pleural wall was coarse and thickened， there were a lot of white foams in the trachea， which had the characteristic of typical cellulose pleural pneumonia. The PCR test of mycoplasma ovis was positive，while the bacterial culture result was negative， finally confirmed that the epidemic situation was the sheep infectious pleuropneumonia caused by Mycoplasma ovis. The paper introduced the clinical symptoms， pathologic changes and laboratory diagnosis of sheep mycoplasma pneumonia in order to provide guidance and reference for the prevention and control of the disease in the future.

Key words： sheep； Mycoplasma ovis； diagnosis； prevention and control

支原體是目前已知能独立生活的缺乏细胞壁的最小原核微生物[1]，绵羊传染性胸膜肺炎是由绵羊肺炎支原体（Mycoplasma ovipneumoniae，MO）引起的绵羊特有的接触性传染病，该病原微生物由MACKEY等[2]于1963年在英格兰首次从绵羊体内分离得到，以后相继在其他国家和地区均有报道[3]。GEORGE等[4]在澳大利亚昆士兰从间质性肺炎的绵羊中分离到了支原体，后被CARMICHAEL描述并正式命名绵羊肺炎支原体。之后在世界多个国家和地区均有该病的报道，我国四川、新疆、甘肃、河北、云南等多个省区都有该病的发生[5]。此病1～3月龄羔羊易感，以高热、咳嗽、肺和胸膜发生浆液性及纤维素性炎症为主要特征[6]，病变多发生于肺组织的心叶、尖叶、隔叶，病程可达数月至数年。绵羊肺炎支原体的感染一般需要通过实验室的方法确诊，但因该支原体在临床上分离培养比较困难，且许多健康羊只也携带有低水平的绵羊肺炎支原体，因此病原分离只能作为诊断的辅助手段[7]。支原体感染对外来品种及羔羊的危害较大，可引起高的发病率和死亡率，间接损失是使羊慢性营养消耗、体重减轻、毛质及毛量下降、上市推迟、繁殖率降低，并造成饲料和人力的浪费[8]，这种疫病严重影响养羊业的健康发展。因此，采取有效的防治措施，控制绵羊传染性胸膜肺炎的发生和流行，对养羊业的可持续发展和提高养殖场（户）及农牧民的经济收入具有十分重要的意义。

本研究通过对病料进行剖检、病原鉴定和实验室诊断，最终确定该病情的病原为支原体，为绵羊健康养殖生产和对支原体感染的诊断和治疗提供一定的参考。

1 材料和方法

2017年8月20日，于新疆某羊场开展试验，对疑似传染性胸膜肺炎的绵羊进行病情和症状跟踪记录，并对死亡羊只进行剖检、病原鉴定和实验室诊断。

1.1 病原鉴定

在无菌条件下，取病羊肺和肝组织涂片分别接种于普通LB培养平板和BHI培养平板，置37 ℃培养12～24 h。

1.2 实验室诊断—PCR鉴定

参照已报道的绵羊传染性胸膜肺炎基因的保守序列及文献[9]，用生物软件DNAstar设计了鉴定引物，扩增片段长度为400 bp，引物由上海生工生物工程有限公司合成。PCR扩增体系为50 μL，2×Taq PCR Master Mix 25 μL，引物各2 μL，超纯水补至50 μL，离心混合均匀后置PCR扩增仪中。反应条件为：94 ℃预变性5 min；94 ℃循环变性30 s，56 ℃退火复性30 s，72 ℃延伸40 s，进行30个循环；72 ℃终延伸10 min，最后4 ℃保存。反应结束后，产物经1%琼脂糖凝胶电泳，参照标准DNA 2000 Marker，对待检样品目的DNA片段进行鉴定。用琼脂凝胶回收试剂盒将PCR产物回收后，送上海生工生物工程有限公司进行测序。

2 结果与分析

2.1 发病情况及临床症状

2017年8月20日，羊场共计7只断奶羔羊出现咳嗽、有浆液性鼻液，口腔内有泡沫状稀薄黏液，不爱运动，喜卧，驱赶后常出现咳嗽、呼吸困难、头颈伸直、腰背弓起、眼睑浮肿等症状，急性病例的病羊来不及治疗，于当日发病并死亡；慢性病例的病羊精神沉郁、消瘦、食欲减退或废绝。病初体温41 ℃左右，2～3 d后咳嗽加重，鼻液变为黏液性、浆液性，并呈铁锈红色或红棕色，黏附在鼻孔周围和上唇，形成污垢块。按压胸部时病羊表现敏感、疼痛，听诊肺部出现支气管呼吸音和喘呜声，有的发生严重腹泻。

2.2 剖检结果

对死亡的羊只进行剖检，可见大量淡黄色胸腔积液，并有腐臭味。病变主要表现在胸腔：肺肿大，色泽不均，部分发生肝变，肝变区与正常肺组织界限明显，病程较长者部分肺叶萎缩坏死，切面呈大理石样变，小叶间质增宽，小叶之间界限明显；胸膜厚而粗，上有黄色纤维素样物附着，胸膜与心外膜、肺浆膜、横隔胸膜相互粘连；纵隔淋巴结肿大，切面多汁并有出血点；心包有大量淡黄色液体，暴露空气后形成纤维蛋白凝块。个别有明显的肠炎症状，肠黏膜潮红且肠系膜淋巴结明显肿大。肺脏呈白色，发生实变（图1），有肺气肿，气管中有大量的白色泡沫（图2）。

2.3 病原鉴定

在无菌条件下，取病羊肺和肝组织分别涂片接种于普通LB培养平板和BHI培养基中，置37 ℃培养24 h，结果发现平板中未长菌落。

2.4 PCR鉴定结果

待检泳道扩增出大小约400 bp的目的条带，结果为阳性；对PCR扩增产物进行了测序，并对测序结果进行BLAST分析，结果显示，该菌16S RNA基因序列与支原体16S rRNA 基因序列的同源性为99%，则该病原确诊为绵羊支原体。

3 结论与讨论

绵羊支原体属于内源性致病菌，寄居于健康羊体上呼吸道，也普遍存在于养殖环境中，在羊只受到应激刺激（如断奶、寒冷、疫苗免疫、拥挤、运输等）或营养不良等情况下，绵羊支原体大量繁殖、毒力增强，引起羊群发病。近年来，有关绵羊支原体肺炎的研究多集中在丝状支原体簇，特别是丝状支原体山羊亚种[10]，我国则主要集中在人类呼吸道病原方面，而在绵羊肺炎病原研究方面的报道较少。目前，随着养羊业规模化程度提高，呼吸道疾病的发病率及危害也日益严重。本试验根据培养特性、理化特征和16S RNA保守区的序列分析，对新疆某羊场绵羊疑似传染性胸膜肺炎的羊只进行判定和诊断，判定此次病原为绵羊肺炎支原体。该方法较传统的细菌涂片染色后形态学观察、生化试验、动物試验等更加快速、准确，为绵羊健康养殖生产和对绵羊肺炎支原体感染的诊断和治疗提供参考。

结合跟踪试验过程和该病的特征，建议临床上选用高敏药物或中敏药物进行治疗，避免滥用抗生素而引起的病原菌对大量药物产生耐药性，并按照“以管理为主、治疗为辅、防治结合”的原则提出如下防治措施：（1）如发现病羊，必须马上隔离且认真消毒一切用具及场地，同时加强对羊群的观察和药物预防；（2）症状较轻的慢性感染羊或耐过后的羊只会在很长一段时间内向外界排毒，感染健康羊群，所以病羊康复或症状明显缓解后不可立即转回健康羊群，有条件的情况下，需终生饲养在治疗圈内；（3）加强妊娠母羊的饲养管理，羔羊出生后要及时吃到初乳，从母乳中获得多种母源抗体以增强抗病力，使羔羊出生时就有一副“好身板”；（4）引进外地羊只时，要先隔离、观察30 d，因为很多羊病潜伏期比较长，没有临床症状不代表没有感染，有可能已经感染只是不在发病期；（5）由于规模化养羊场普遍存在广泛使用抗生素的情况，使病原菌存在普遍的耐药性，当需要用药治疗或预防流行病时，要先对病原进行实验室确诊，再进行高效药物的筛选（药敏试验），否则可能使疫情蔓延，造成不必要的、更大的经济损失。

参考文献：

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[3]MARTRENCHAR A，BOUCHEL D，ZOYEM N.Isolation and experimental studies of Mycoplasma mycoides subsp.mycoides LC and Mycoplasma ovip neumoniae in goats in northern Cameroon [J].Small- rumin- res，1996，16（2）：179-184.

[4]GEORGE T D，SULLIVAN N D，LOVE J A，et al.Experimental transmission of pneumonia in sheep with a mycoplasm isolated from pneumonic sheep lung [J].Australian veterinary journal， 1971， 47： 282-283.

[5]储岳峰， 赵萍， 高鹏程， 等. 绵羊和山羊霉形体病研究概述[J]. 畜牧兽医科技信息， 2008（6）： 8-10.

[6]中国农业科学院哈尔滨兽医研究所. 动物传染病学[M]. 北京： 中国农业出版社，2008： 14-18.

[7]党斌， 潘玉坤， 吴禹熹.山羊主要支原体感染的研究[J].黑龙江畜牧兽医， 2016（1）： 155-158.

[8]白永平.绵羊肺炎支原体的分离鉴定与敏感药物试验的研究[D]. 雅安： 四川农业大学， 2007.

[9]MCAULIFFE L， HATEHELL F M， AYLING R D， et al.Detection of Mycoplasma ov/pneumon/ae in Pasteure Ua-vaccinated sheep flocks with respiratory disease in England [J].Vet rec，2003，153：687-688.

[10]杨发龙， 王华， 岳华， 等.山羊中绵羊肺炎支原体的分离及鉴定[J]. 中国畜牧兽医， 2010， 37（8）： 177-180.