p504s、ck5/6和p63表达水平在前列腺增生和前列腺癌中的诊断价值

张莹 王希喆 周露 丁粉干

[摘要] 目的 研究α甲酰基辅酶A消旋酶（p504s）、细胞角蛋白5/6（ck5/6）和p63在前列腺增生和前列腺癌中的诊断价值。 方法 采用免疫组织化学染色法检测江苏省无锡市惠山区人民医院及江苏省无锡市锡山人民医院病理科2012年1月～2017年12月收集的120例前列腺穿刺活检样本中p504s、ck5/6和p63的表达情况，其中前列腺癌70例（前列腺癌组）、前列腺增生50例（前列腺增生组）。将65例前列腺腺泡细胞癌按照Gleason分级标准分为≤6分组（20例）、7～8分组（26例）和≥9分组（19例）三个亚组。根据染色强度、阳性细胞百分数的乘积结果作为结果来进行比较。采用SPSS 15.0统计软件对结果进行统计学分析。 结果 前列腺癌组中p504s表达率为91.43%，其中64.28%（45/70）为强阳性。前列腺增生组仅5例为p504s弱阳性表达，表达率为10.00%。ck5/6在前列腺癌组中表达阳性率为11.43%（8/70），且均为弱阳性；前列腺增生组90.00%（45/50）为ck5/6阳性表达，且84.00%（42/50）为中等强度以上阳性表达。p63在前列腺癌组中表达阳性率为8.57%（6/70），且均为弱阳性；前列腺增生组中92.00%（46/50）为p63阳性表达，且82.00%（41/50）为中等强度以上阳性表达。两组p504s、ck5/6和p63表达情况比较，差异有统计学意义（P < 0.05）。Gleason分级≤6分组、7～8分组和≥9分组p504s表达强度差异有统计学意义（P < 0.05），其中7～8分组和≥9分组p504s表达强度显著高于≤6分组（P < 0.05），但7～8分组和≥9分组的p504s表达强度差异无统计学意义（P > 0.05）。腺体部分性萎缩、腺体完全性萎缩和基底细胞增生三种类型的前列腺增生组织中ck5/6、p63表达强度差异均无统计学意义（P > 0.05）。腺体部分性萎缩和腺体完全性萎缩中各有3例和2例ck5/6表达缺失，均有2例p63表达缺失。 结论 p504s在前列腺癌组织中明显高表达，而p63、ck5/6表达明显降低，且p504s表达强度随着Gleason分级的增高而增强，提示三者联合检测在前列腺癌和良性病變的诊断中有良好的应用价值。

[关键词] 前列腺癌；前列腺增生；p504s；ck5/6；p63

[中图分类号] R737.25 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2018）06（b）-0106-04

[Abstract] Objective To study the diagnostic value of alpha methylacyl coenzyme A racemase （p504s）， cytokeratin5/6 （ck5/6） and p63 in benign prostatic hyperplasia （BPH） and prostate cancer. Methods Immunohistochemical staining method was used to detect the expression of p504s， ck5/6 and p63 in 120 cases of prostate biopsy specimens that collected in Department of Pathology， Huishan People's Hospital of Wuxi City and Xishan People′s Hospital of Wuxi City from January 2012 to December 2017. In the 120 cases， 70 cases were prostate cancer （prostate cancer group）， 50 cases were BPH （BPH group）. 65 cases of patients with prostate acinic cell carcinoma were divided into three subgroups according to the Gleason classification standard： ≤6 scores group （20 cases）， 7-8 scores group （26 cases） and ≥9 scores group （19 cases）. The product of staining intensity and percentage of positive cells was compared among these groups. Statistical software SPSS 15.0 was used to analyze the results. Results The expression rate of p504s in the prostate cancer group was 91.43%， 64.28% （45/70） were strongly positive. Only 5 cases of BPH group were p504s weakly positive， and the expression rate was 10.00%. The positive rate of ck5/6 expression in prostate cancer group was 11.43% （8/70）， and all of them were weakly positive. 90.00% （45/50） of BPH group were ck5/6 positive expression， and 84.00% （42/50） were positive expression above medium intensity. The positive rate of p63 expression in prostate cancer group was 8.57% （6/70）， and all of them were weakly positive. 92.00% （46/50） of BPH group were p63 positive， and 82.00% （41/50） were positive expression above medium intensity. There was a significant difference in the expression of p504s， ck5/6 and p63 in the two groups （P < 0.05）. There was a significant difference in the expression intensity of p504s in ≤6 score group， 7-8 score group and ≥9 score group （P < 0.05）. The expression intensity of p504s in 7-8 score group and ≥9 score group were significantly higher than that in ≤6 score group （P < 0.05）. The expression intensity of p504s in 7-8 score group and ≥9 score group had no significant difference （P > 0.05）. There was no significant difference in the expression intensity of ck5/6 and p63 among three types of benign prostatic hyperplasia tissues， which included partial atrophy of glands， complete atrophy of glands， and hyperplasia of basal cells （P > 0.05）. There were 3 cases of ck5/6 deletion， and 2 cases of p63 expression deletion in the glandular partial atrophy. There were 2 cases of ck5/6 expression deletion， and 2 cases of p63 expression deletion in the complete atrophy of glands. Conclusion The expression of p504s is highly expressed in the prostate cancer tissue， while the expression of p63 and ck5/6 is decreased significantly. The expression intensity of p504s is enhanced with the degree increase of Gleason classification. It is suggested that the combined detection of p504s， ck5/6 and p63 has good application value in the diagnosis of prostate cancer and BPH.

[Key words] Prostate cancer； Benign prostatic hyperplasia； p504s； ck5/6； p63

前列腺癌是男性高发的恶性肿瘤之一，近几年来我国男性前列腺癌发病率逐年升高，目前是仅次于膀胱癌、肾癌的第三大男性泌尿生殖系统恶性肿瘤[1]。早期诊断和治疗是降低前列腺癌发生率和死亡率的重要手段，目前主要通过血清前列腺特异性抗原（PSA）、前列腺特异性膜抗原（PSMA）、前列腺干细胞抗原（PSCA）等血清学指标进行前列腺癌早期筛查，但均存在较高的假阳性和假阴性，造成误诊和漏诊[2-3]。细针多点穿刺活检是目前前列腺疾病最常采用的活检技术，具有创伤小的优点，但由于其取材较小，对于良性病变和肿瘤之间的病理诊断有一定的困难[4]。免疫组织化学染色法是病理科常用的病理诊断技术，已经在前列腺癌诊断和鉴别诊断中广泛应用。本研究通过免疫组织化学法检测前列腺穿刺活检样本中的α甲酰基辅酶A消旋酶（p504s）、细胞角蛋白5/6（ck5/6）和p63，分析这三种抗体在前列腺良恶性病变诊断和鉴别诊断与分级中的临床价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

以江苏省无锡市惠山区人民医院及江苏省无锡市锡山人民医院病理科于2012年1月～2017年12月收集的120例前列腺穿刺活检样本作为研究对象，其中前列腺癌70例（前列腺癌组）、前列腺增生50例（前列腺增生组）。前列腺癌组中，年龄42～72岁，平均（57.43±7.82）岁；其中腺泡细胞癌65例，泡沫细胞癌3例，导管癌1例，小细胞癌1例；将前列腺腺泡細胞癌按照Gleason评分标准分为≤6分组（20例）、7～8分组（26例）、≥9分组（19例）。前列腺增生组中，年龄40～70岁，平均（56.82±7.18）岁；伴腺体部分性萎缩15例，腺体完全性萎缩32例，基底细胞增生3例。两组患者一般资料比较差异无统计学意义（P > 0.05），具有可比性。

1.2 研究方法

采用免疫组织化学法[5]检测各样本p504s、ck5/6和p63蛋白表达情况，实验操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。采用PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照，已知抗体阳性标本作为阳性对照。染色结果判定标准：由病理医师随机抽取10个高倍镜视野进行观察，各抗体应表达于特定部位，p504s和ck5/6表达在细胞质中，p63表达定位于细胞核中，以特定部位出现明显高于背景的棕黄色颗粒状着色为阳性。计分标准：①染色强度：无着色计0分，浅黄色计1分，棕黄色计2分，棕褐色计3分；②阳性细胞百分数：在400×显微镜下随机选取10个视野计数，各计数100个细胞，取10个视野的积分平均值作为最终分；无阳性细胞计0分，<11%计1分，11%～<51%计2分，51%～<75%计3分，≥75%计4分。以上述两者乘积作为最后结果：0分为阴性（-），1～4分为弱阳性（+），5～8分为中等强度阳性（++），9～12分为强阳性（+++）。本研究所用小鼠抗人p504s单克隆抗体、小鼠抗人ck5/6单克隆抗体、小鼠抗人p63单克隆抗体、S-P免疫组化检测试剂盒均购自福州迈新生物技术开发有限公司。所有免疫组化切片和HE染色切片均由2位病理医师分别做出评定，评定结果不一致则由二人商议后做出最终判断。

1.3 统计学方法

采用SPSS 15.0软件进行统计学分析，计数资料比较采用χ2检验。等级资料用频数表示，多组间比较采用Kruskal-Wallis检验，两组间比较采用Mann-Whitney检验。以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组p504s、ck5/6和p63的表达比较

p504s在前列腺癌活检样本中与癌性腺体特异性结合，呈现为高表达，表达率为91.43%，且45例（64.28%）为强阳性，前列腺增生组仅5例为p504s弱阳性，表达率为10.00%。ck5/6在前列腺癌活检样本中表达阳性率为11.43%；前列腺增生组45例（90.00%）为ck5/6阳性表达。p63在前列腺癌活检样本中表达阳性率为8.57%；前列腺增生组样本中有46例（92.00%）为p63阳性表达。两组p504s、ck5/6和p63表达情况比较，差异有统计学意义（P < 0.05）。见表1。

2.2 前列腺腺泡细胞癌分级与p504s表达强度的关系

将前列腺腺泡细胞癌根据Gleason分级分为≤6分、7～8分和≥9分三个亚组，三组p504s表达强度比较，差异有统计学意义（P < 0.05）；其中Gleason分级7～8分组和≥9分组p504s表达强度显著高于≤6分组（P < 0.05），但Gleason分级7～8分和≥9分两组的p504s表达强度比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。见表2。

2.3 前列腺增生与ck5/6和p63表达强度的关系

腺体部分性萎缩、腺体完全性萎缩和基底细胞增生三种类型的前列腺增生组织中的ck5/6、p63表达强度比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。腺体部分性萎缩和腺体完全性萎缩中分别有3例和2例ck5/6表达缺失，均有2例p63表达缺失。见表3。

表3 前列腺增生与ck5/6和p63表达强度的关系（例）

3 讨论

p504s属于胞浆蛋白，主要存在于线粒体和过氧化物酶体中，参与脂肪酸和脂肪酸衍生物的β氧化过程[6]。2000年Xu等[7]通过基因芯片筛选确认p504s在前列腺癌组织中呈现高度表达，在正常前列腺组织中仅有少量表达或者无法检出。除了前列腺癌外，p504s也在神经系统、结肠、胃、胰腺等正常组织中表达，其过度表达往往预示癌前病变的发生[8-9]。p504s与其催化的支链脂肪酸氧化在前列腺癌的发生过程中发挥重要的作用[10]。植烷酸是一种存在于红色肉类和奶制品中的常见支链脂肪酸，降植烷酸是植烷酸经α-氧化途径分解的主要产物，也是p504s的主要作用底物[11]。研究表明前列腺癌发病与患者细胞质中支链脂肪酸水平长期处于较高水平有关，植烷酸代谢产生降植烷酸，降植烷酸能够激活过氧化物酶体增殖激活受体（peroxisome proliferator activated receptor，PPAR），而PPAR能够控制细胞增殖和分化[12]。大量研究证实p504s在前列腺肿瘤组织中均过度表达，其基因序列的多态性与前列腺癌的发病风险密切相关[13-14]。本研究结果显示，p504s在前列腺癌活检样本中与前列腺癌性腺体特异性结合，呈现出高表达，表达率为91.43%，前列腺增生组仅5例为p504s弱阳性，表达率为10.00%。Jiang等[15]针对4385例前列腺癌患者的Meta分析显示，免疫组化p504s表达与前列腺癌的诊断显著相关，但若将p504s作为前列腺癌早期诊断的标志物，则特异性较差，因此还需要联合应用其他的指标进行前列腺癌诊断。另一方面，不同级别前列腺腺泡细胞癌组织中p504s表达情况稍有不同，Gleason分级7～8分和≥9分两组p504s表达强度显著高于Gleason分级≤6分组，提示p504s在前列腺癌进展中也发挥重要作用。

细胞角蛋白ck5/6是目前免疫组织化学染色法检测中常用的一种基底细胞标志物，在正常组织中多为阳性表达，在肿瘤组织中则多为阴性[16-19]。本研究中，ck5/6在前列腺癌活检样本中表达阳性率为11.43%（8/70），且均为弱阳性；前列腺增生组90.00%（45/50）为ck5/6阳性表达，且84.00%（42/50）为中等强度以上阳性表达。p63是p53抑癌基因家族中的一员，表达于前列腺基底细胞的细胞核上，特异性较强，且着色较为稳定，是用于鉴别前列腺正常组织、良性病变和前列腺癌的重要指标[20-21]。本研究中p63在前列腺癌活检样本中表达阳性率为8.57%（6/70），且均为弱阳性；前列腺增生组样本中有92.00%（46/50）为p63阳性表达，且82.00%（41/50）为中等强度以上阳性表达。提示ck5/6和p63在少部分前列腺良性病变中仍有可能发生缺失，因此不能将ck5/6或者p63单独作为区别前列腺良性病变和前列腺癌的依据。

目前，多数学者联合采用多种指标用于前列腺癌的鉴别和诊断，p504s表达上调、ck5/6和p63表达下调能够从正、反两个方面对是否发生前列腺癌进行判断，具有较高的临床应用价值。

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