不同温度及保存时间对糖化血红蛋白检测结果的影响

黄艳萍，祝 峰

HbA1c作为糖尿病血糖控制、干预治疗、疗效观察及并发症预测风险的有效指标[1]，检测结果的准确性至关重要。近年来，HbA1c检测方法和标准化已逐渐完善。实际工作中，笔者发现HbA1c的检测不仅要依靠标准化操作[2]，标本的溶血时间、保存条件也起着重要的作用[3]。文献[4]发现反复冻融对检测结果没有显著影响。不同仪器对标本溶血时间、保存温度、保存时间有不同的要求，本研究以OLIMPO特定蛋白分析仪为研究对象，探讨预处理(溶血处理)标本不同溶血时间，未经预处理的标本在不同温度及不同保存时间的条件下，测定结果的稳定性。

1 材料与方法

1.1 标本采集及保存 选取我院门诊糖尿病患者10例，各抽取EDTA-k2抗凝全血2 ml。均无脂血、溶血、凝血及血红蛋白变异体。每份标本充分混匀后立即溶血处理(取5 μl全血加入900 μl溶血液)后，分装成6份，每份150 μl。在室温下分装成6组，每组共10个标本。A组立即检测，B、C、D、E、F组分别在分装后1、2、3、4、5 h检测。同时，取上述新鲜标本5例各2 ml充分混匀后，每管分装0.5 ml，共20管，分4组保存。A1组室温(18～22 ℃)、B1组冷藏(2～8 ℃)、C1组冷冻(-18～-20 ℃) 、D1组低温冷冻(-80 ℃以下)下保存，在1、2、3、8、10、15、16、40、80、180 d进行检测。

1.2 试剂与仪器 OLIMPO特定蛋白分析仪及配套试剂(包括抗血清、溶血液和乳胶)、HbA1c校准品及质控品。OLIMPO特定蛋白分析仪先进行定标，然后将室内质控与待测标本同时上机检测。

1.4 统计学处理 采用SPSS22.0 统计软件，不同溶血时间组与立即测定组的比较采用t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 HbA1c检测结果 溶血后不同时间HbA1c检测结果：A组(7.98±1.61)%；B组(7.97±1.61)%；C组(7.95±1.60)%；D组(7.94±1.61)%；E组(7.77±1.61)%；F组(7.46±1.57)%。与A组比较，F组差异有统计学意义(t=1.57,P<0.05)，其他各组与A组比较差异无统计学意义。表明预处理标本随着溶血时间的延长，检测结果逐渐降低。

2.2 -80 ℃以下保存标本HbA1c的检测结果 -80 ℃条件下保存标本，HbA1c检测结果的稳定性好。标本1～5可接受范围分别是6.45～6.73，6.77～7.08，5.05～5.39，7.20～7.47，8.27～8.59，见表1。

表1 -80 ℃以下保存不同时间标本HbA1c的检测结果 (%)

2.3 室温、冷冻条件下不同时间HbA1c结果 室温保存标本，前2 d 5例标本检测结果均在可接受范围内，第3天有2例不在可接受范围内，因此OLIMP检测糖化血红蛋白室温下保存标本的结果可稳定2 d。冷冻保存标本，前3 d 5例标本检测结果均在可接受范围内，第4天有2例不在可接受范围内，因此OLIMP检测糖化血红蛋白冷冻保存标本的结果可稳定3 d。见表2。

2.4 冷藏条件下不同时间HbA1c结果 冷藏(2～8 ℃)保存标本，前15 d 5例标本检测结果均在可接受范围内，第16天有2例不在可接受范围内，因此OLIMP检测糖化血红蛋白冷藏保存标本的结果可稳定15 d。

表2 室温、冷冻条件下5例保存标本不同时间HbA1c检测结果 (%)

注：表中打①为不可接受结果

表3 冷藏保存标本不同时间HbA1c检测结果 (%)

注：表中打①为不可接受结果

3 讨 论

目前，我国使用的糖尿病诊断标准是1999年世界卫生组织(WHO)公布的基于血糖水平的诊断标准[6]，葡萄糖代谢水平受到进食、应激等多种因素的影响。中老年糖尿病患者普遍存在血脂代谢紊乱、各器官功能下降等现象，血糖水平波动较大[7,8]，对糖尿病治疗效果产生较大的影响。美国糖尿病协会(ADA)于2010年首次正式批准HbA1c作为糖尿病诊断标准之一[9]，其诊断界值为≥6.5%。目前HbA1c检测已高度标准化，不需禁食，检测便利且较血糖结果更为稳定。ADA将HbA1c水平为5.7%～6.4%的患者归类为“糖尿病高危人群”，用以取代“糖尿病前期诊断”。 在我国，虽然反对HbA1c作为糖尿病诊断标准的观点依然存在，但HbA1c仍是糖尿病患者血糖控制的金标准[10，11]。HbA1c的形成是不可逆的，其浓度与红细胞寿命和该时期内血糖的平均浓度有关，不受血浆葡萄糖浓度波动而变化，也不受运动或食物的影响。HbA1c可反映过去6～8周的平均血糖浓度，为评估血糖的控制情况提供了可靠的实验室指标。因此我们在实际工作中要高度重视HbA1c检测结果的准确性，如需备检，应充分考虑标本预处理的溶血时间、保存温度、保存时间等因素对结果的影响。

本研究发现，HbA1c预处理标本检测结果室温下可稳定4 h；OLIMPO检测HbA1c结果标本保存的时间分别为，室温2 d，冷藏15 d，冷冻3 d，低温冷冻稳定半年以上。一般认为保存温度越低，结果稳定时间越长，但冷冻组比冷藏组结果的稳定时间要短得多，可能由于冷冻温度不够低，导致血红蛋白在冰冻过程中发生轻微的蛋白质变性，再次复融时造成蛋白质结构改变，致使结果的稳定性降低。而-80 ℃是一个极冻的过程，不会造成血红蛋白的变性，复融后依然保持蛋白质的活性。另外，血红蛋白变异体、铁、维生素B12、叶酸缺乏引起贫血等因素可导致HbA1c测定结果出现假性升高或降低[12]，不能真实反映患者的平均血糖水平。