广西地区人工饲养食蟹猴不同顺位睾酮 和雌二醇含量的研究

曾素先 黎宗强

(1.南宁市江南区沙井街道办事处水产畜牧兽医站，广西 530045； 2.广西大学动物科学技术学院，南宁 530004)

随着近年来灵长类动物医学和生物学研究的快速发展，对实验用猴的数量需求增多的同时对质量的要求也越来越高，但是随着人类活动范围的扩大和捕猎的增多，野生灵长类动物的栖息地不断减少，数量则日趋减少，因此对笼养猴进行人工繁殖来补充科学实验用猴的数量已经十分迫切[1,2 ]。虽然性激素调控着大多数哺乳动物的交配能力，但在灵长类动物中性激素对性行为的控制力已经被削弱，甚至不起作用了[3]。因此灵长类动物的第二性征性的维持是主要由性激素完成[4]。灵长类动物无需性激素控制性行为的表现，使灵长类动物的性行为的表现受其社会环境和个体的社会经历的影响成为可能，因此性激素将对个体的交配动机产生影响[5,6]，基于广西地区食蟹猴资源丰富，取材方便，立足于有效利用食蟹猴资源的研究和推进灵长类动物实验室需求的需要，文章探讨广西地区人工饲养食蟹猴不同顺位的生殖激素的变化特征，为了解食蟹猴的生殖激素分泌特点提供重要的基础研究资料。

1 材料与方法

1.1 研究动物

选用广西玮美生物科技有限公司饲养的2岁4月龄、2岁10月龄、3岁9月龄的健康雌性食蟹猴各2只，单笼饲养，并分别编组为A、B、C三组；同样选用2岁11月龄、3岁2月龄、3岁10月龄的健康雄性食蟹猴各2只，单笼饲养，并分别编组为E、F、G三组，采集血清样本时间共150天。

利用攻击—屈服对研究群6只雌性食蟹猴在连续6个月间的社会等级确定结果表明：研究期间食蟹猴在群体中雌性个体等级关系即顺位高低依次为C2、C1、B2、B1、A2、A1；研究群体中雄性个体等级关系即顺位高低依次为G1、F1、F2、G2、E1、E2。

1.2 设备与仪器

放射性计数仪(美国PE公司生产的1450，有Y计数、闪烁计数和发光测定的功能)，低速自动平衡离心机(北京医用离心机厂)，恒温水浴锅(英国Grant公司)，超纯水装置(美国Millipore公司)，微型振荡仪(江苏其林贝尔仪器制造有限公司)，低温冰箱(瑞典伊莱克斯公司)，-86℃超低温冰箱(美国Forma公司)，超低温离心机(上海安亭科学仪器厂)，漩涡混合器(上海医科大学仪器设备厂)等。

1.3 主要试剂

试剂盒：雌二醇(E2)和睾酮(T)放免试剂盒(购自北方生物技术研究所)，100管/盒，2～8℃保存，按试剂盒使用说明书操作。

闪烁液：1200-436 OPTI HISAFE 2 型闪烁液，由中国同位素公司代理销售。

1.4 血样采集和处理

1.4.1 血样的采集 经过顺位确认的食蟹猴单笼单只饲养第10天开始采集血样，采血部位为隐大静脉，采血量为3.5ml/次，每隔15天采血样一次，采集血样时间均为每天早上7：00-8：00。

1.4.2 血样的处理 采集的血样在4℃环境下静置2h，然后以3000r/m离心10min，将上清液置于3.5ml冻存管中，并对冻存管进行标号，放置-85℃的冰箱保存。

1.5 血样生殖激素浓度的测定方法

分别在广西医科大学放免室和广西大学动物繁殖研究所进行血样测定。采用放射免疫测定法(RIA)分别检测血样中雌二醇(E2)和睾酮(T)含量。具体检测方法和程序均按照试剂盒说明书进行操作，全部血样进行双管检测。

1.5.1 血样激素含量的计算方法 ①Logit值计算方法：各血样和标准点的logit值用公式计算：

Logit=Ln{(B/B0%)/(100-(B/B0%))}

②百分结合率计算方法：各血样计数为B，并设S0管的计数为B0，其中空白管为NSB，利用如下公式计算：

B/B0(%)={B(cpm)-NSB(cpm)}/(B0-NSB)×100%

1.5.2 制定激素标准曲线 设定横坐标为标准浓度log值，纵坐标为对应的logit，进行绘图后合成标准直线，据此获得标准曲线的回归方程：Y=aX+b

血样浓度计算方法：通过测定血样的计数，并利用上述血样激素含量的计算方法计算样品的logit值和百分结合率，最后根据logit值制定的标准曲线方程求得血样的激素浓度。

1.6 统计方法

所测雌二醇(E2)和睾酮(T)浓度值均用平均值(Mean)±标准差(SD)表示，用SPSS17.1统计软件中的方差分析程序进行各类数据间差异显著性检验。

2 试验结果

2.1 广西地区人工饲养雌性食蟹猴在不同顺位之间雌二醇的含量

表1 雌性食蟹猴雌二醇分泌与顺位的关系(pg/ml)

检验组间差异显著情况(从上到下顺位依次下降)

2.2 广西地区人工饲养雌性食蟹猴不同顺位之睾酮含量

表2 雌性食蟹猴睾酮分泌与顺位的关系(ng/ml)

检验组间差异显著情况(从上到下顺位依次下降)

2.3 广西地区人工饲养雄性食蟹猴不同顺位个体睾酮分泌水平

表3 雄性食蟹猴睾酮分泌与顺位的关系(ng/ml)

检验组间差异显著情况(从上到下顺位依次下降)

3 分析与讨论

根据统计检验结果，广西地区人工笼养雌性食蟹猴不同顺位间雌二醇分泌水平差异较大，但是雌二醇浓度并没有随着个体顺位由高到低或者是由低到高而呈一致性的变化，顺位高，雌二醇浓度不一定高，相反，顺位低也并不意味着雌二醇浓度低。C1与B1、B2、A1、A2睾酮的分泌量差异极显著(P<0.01)，与C2睾酮的浓度分泌量差异不显著(P>0.05)，B1与B2、A2差异显著(P<0.05)，与其他组差异极显著(P<0.01)。广西地区人工饲养雌性食蟹猴不同顺位间睾酮分泌水平差异很大，但是睾酮浓度并没有随着个体顺位又高到低或者是由低到高而呈一致性的变化，顺位高者(C1、C2)，睾酮浓度也高，但是顺位低也并不意味睾酮浓度依次降低，B2睾酮的浓度小于顺位低的B1，B1睾酮的浓度小于顺位低的A1睾酮分泌量。雄性食蟹猴不同顺位个体的睾酮分泌量之间差异极显著(P<0.01)，个体食蟹猴睾酮的分泌量不是随着顺位的升高和降低而升高和降低的，由表可知F1、F2的顺位高于G2，而睾酮的分泌量低于G2，说明顺位高的个体睾酮的分泌量不一定高于顺位低的个体睾酮的分泌量，顺位低的个体睾酮的分泌量也不一定低于顺位高的个体。

雌二醇的释放由中枢神经系统调控，在短时间内分泌量变化较大是它的特点[7]。在排卵前期E2分泌量可达最高峰，随后逐渐减退，青年组食蟹猴正处在生理旺盛的时期，争夺配偶的欲望较为强烈，这或许提示是性激素分泌浓度支配的结果。本试验中雌二醇在顺位之间差异显著，其中顺位低的B2雌二醇的含量为170.23±25.23ng/ml，高顺位的C2的含量为97.94±15.33 ng/ml.据以上实验结果，雌性食蟹猴的卵巢功能全年都有周期性变化，但在不同的月份和不同的顺位和年龄，其雌二醇和孕酮的分泌水平均有极显著的差异。灵长类中，高序位雌性开始繁殖的时间较早[8]。社会性动物中的社会等级影响到发情状态[9]。本研究中，C1、C2、B1在等级中处于优势地位。

人们对非人灵长类动物中顺位对其生殖机能的影响的机制尚不够清晰，但是研究表明，肾上腺皮质素的分泌差异对生殖机能的影响是一个重要的原因[10]。但是本研究结果显示雄性食蟹猴睾酮浓度与顺位关系不是完全符合上述研究结果，G1睾酮浓度大于低顺位的F1、F2，而顺位低于F1、F2的G2的睾酮浓度高于它们，从而说明雄性食蟹猴睾酮分泌水平受到年龄和顺位的共同制约。任宝平等[4]在报道：雄性川金丝猴血清中的睾酮分泌量与群体的稳定性有一定的关系；本研究群体中C1是处在最高顺位，所以睾酮的分泌量最高，但是C2的顺位低与B1、B2个体，而睾酮的分泌量高于它们，这种情况与野性黄山短尾猴结果一直，可能是由于低顺位个体在群体中情绪紧张、遭受攻击等促使睾酮分泌[10]。

在灵长类中，性行为的表现往往不但受性激素调控外，还会受到社群结构、等级排序等的影响[11]。C1处于在顺位的第一位，享有取食的优先权和交配权，它的睾酮的浓度明显高于C2、B1、B2、A1、A2，这可能是高等级猴受高性激素浓度支配的结果，社群等级地位越高其性激素浓度也会越高，摄食能力强，争夺配偶能力越强，因而其后代保存机率越高，因此其较高繁殖率以及高传递率可以保证高品质后代在社群中占优势，有利于种群的繁衍[12]。

本试验是人工饲养的情况下，解决了样品在野外采集时间不易控制，并选择正确的血液处理和保存方法以确保样品中生殖激素的水平不受影响。根据本实验的经验，由于食蟹猴体型小，惧怕人类抓捕，而采血过程的抓捕行为可能引起食蟹猴产生较大应激，因此血样的采集时间不能太过于集中，不然也许会影响试验的效果；另外，本试验中使用的试验动物食蟹猴较为珍贵，动物养殖场无法大量提供实验动物，因此实验动物偏少，所以本次结果只是反映了广西地区人工饲养条件下食蟹猴生殖激素水平变化的大体趋势，更精确的研究有待进一步研究完善。