3种水产药物对鲈鲤和白甲鱼的急性毒性试验

张建明，姜 华，田 甜，姜 伟，胡亚平

( 中国长江三峡集团公司 中华鲟研究所，三峡工程鱼类资源保护湖北省重点实验室, 湖北 宜昌 443100 )

鲈鲤(Percocyprispingi)，又称花鱼、金甲鱼，属鲤科、鲃亚科、鲈鲤属，主要分布于宜昌以西的长江上游的干支流、西江流域、南盘江等水系[1]。鲈鲤是产区的大型经济鱼类，长江上游产量较大，但受到环境污染、过度捕捞等人为因素的影响，近年来鲈鲤数量急剧下降，现已被评为长江一级急切保护动物[2]和四川省珍稀保护鱼类[3]。白甲鱼(Onychostomasima)，又称毛白甲、突吻鱼，属鲤科、鲃亚科、白甲鱼属，是长江重要的经济鱼类之一，自然分布于长江水系的干流、支流[4]。近年来，由于江河生态环境破坏、过度捕捞等因素的影响，白甲鱼资源急剧下降[5]，已成为长江流域重点保护物种之一。

目前，鲈鲤、白甲鱼的研究主要集中在驯养繁育、胚胎发育、苗种培育、生理特性等方面[6-9]，尚未见有关鲈鲤幼鱼和白甲鱼幼鱼药物急性毒性试验的报道。笔者通过对鲈鲤和白甲鱼幼鱼开展水产药物急性毒性试验研究，旨在为鲈鲤和白甲鱼幼鱼培育阶段用药提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

试验鱼来自中国长江三峡集团公司中华鲟研究所乌东德增殖放流站人工培育的鲈鲤和白甲鱼幼鱼，规格整齐、行动敏捷、无病无伤。鲈鲤体长(14.07±1.29) cm，体质量(36.71±4.91) g；白甲鱼体长(10.40±1.14) cm，体质量(21.55±4.68) g。试验前在圆形暂养池(直径3.0 m，水深0.7 m)中暂养5 d，试验开始前2 d及试验期间停食。

试验用药规格及生产厂家见表1。

表1 试验药物规格与成分

1.2 试验条件

试验在容积为20 L的塑料桶内进行，试验用水为经过曝气和沉淀后的金沙江水，水温(22±1) ℃，pH 7.9±0.2，溶解氧(6.7±0.5) mg/L。试验期间保持试验场所安静。

1.3 试验方法

试验采用静态急性毒性试验法[10-12]，试验过程中为保持溶解氧含量，各试验组微充气。

1.3.1 预试验

为确定正式试验所需药物质量浓度范围，在正式试验前根据鱼病防治的药物常用量[13]，适当调整质量浓度比例进行预试验，观察试验鱼活动情况和存活情况，预试验持续观察96 h，每日观察并记录死亡鱼数量。

1.3.2 正式试验

根据预试验得出的结果，在试验鱼24 h全致死质量浓度和96 h无死亡质量浓度间按等对数间距设置5个质量浓度组(表2～表3)，每个质量浓度组设2个平行，另设1个空白对照组，每个试验组放幼鱼10尾。

配制好试验药物后，随机放入试验鱼，同一试验的试验用鱼在10 min内完成分组，由低质量浓度组到高质量浓度组依次进行，试验过程中不更换药液。试验开始后，分别于24、48、72、96 h时记录和统计鱼的存活情况，当试验鱼停止呼吸、对外界刺激无反应时可判定为死亡。

表2 鲈鲤幼鱼试验药物的质量浓度梯度 mg/L

表3 白甲鱼幼鱼试验药物的质量浓度梯度 mg/L

1.4 数据处理与分析

采用寇氏法估算半致死质量浓度(LC50)、安全质量浓度(SC)[14-15]：

LogLC50=Xm-d(p-0.5)

SC=48 hLC50×0.3/(24 hLC50/48 hLC50)2

式中，Xm为最大质量浓度的对数，d为相邻质量浓度组比值的对数，p为死亡率。

2 结 果

2.1 聚维酮碘对鲈鲤和白甲鱼幼鱼的急性毒性试验结果

将鲈鲤和白甲鱼幼鱼按照设定的聚维酮碘药物质量浓度梯度放入各试验组后，试验初期各试验组中鲈鲤呼吸正常，对外界刺激反应迅速，然而各试验组白甲鱼却表现出了不同程度狂躁不安、上下窜游的现象，高质量浓度试验组甚至狂游撞击试验桶，个别出现跃出桶外的现象。63.39、79.80、100.00 mg/L试验组中的鲈鲤和77.45、88.00、100.00 mg/L试验组中的白甲鱼分别于3 h后和2 h后开始出现异常反应，主要症状相似，均呈现初期游动缓慢、漂浮于水面、对外界刺激反应迟钝的现象，随后试验鱼出现失衡、侧翻、呼吸缓慢等症状，随着试验时间的增加，各试验组开始陆续出现死亡，死亡的鲈鲤和白甲鱼体表黏液增多，体色发白。鲈鲤对照组和40.00 mg/L试验组在试验过程中未出现死亡现象，50.35、63.39 mg/L和79.80 mg/L试验组的鲈鲤24 h死亡率分别为0、5%和55%，48 h死亡率分别为0、15%和70%，72 h死亡率分别为0、20%和75%，96 h死亡率分别为10%、45%和85%。鲈鲤100.00 mg/L试验组24 h死亡率为100%。白甲鱼对照组和60.00 mg/L试验组在试验过程中未出现死亡现象。68.47、77.45 mg/L和88.00 mg/L试验组的白甲鱼24 h死亡率分别为0、0和5%，48 h死亡率分别为0、0和35%，72 h死亡率分别为0、5%和50%，96 h死亡率分别为15%、35%和75%。白甲鱼100.00 mg/L试验组的24 h死亡率为100%。

2.2 敌百虫对鲈鲤和白甲鱼幼鱼的急性毒性试验结果

将鲈鲤和白甲鱼幼鱼按照设定的敌百虫药物质量浓度梯度放入各试验组后，试验初期，各试验组中鲈鲤和白甲鱼均未出现异常反应。5 h后，3.85、6.00 mg/L试验组中的鲈鲤和2.00、2.83、4.00 mg/L试验组中的白甲鱼均开始出现相似的异常行为，即反应迟钝、游动迟缓，进而鱼体出现侧翻，间歇性呼吸，随后各试验组出现死亡现象，死亡的鲈鲤和白甲鱼体表附有大量黏液，体色变浅发白。对照组和1.00 mg/L试验组在整个试验过程中未出现死亡现象。1.57、2.45 mg/L和3.85 mg/L试验组的鲈鲤24 h死亡率分别为0、5%和30%，48 h死亡率分别为0、5%和55%，72 h死亡率分别为5%、10%和80%，96 h死亡率分别为10%、20%和85%。鲈鲤6.00 mg/L试验组24 h死亡率为100%。白甲鱼对照组和1.00 mg/L试验组在整个试验过程中未出现死亡现象。1.41、2.00 mg/L和2.83 mg/L试验组的白甲鱼24 h死亡率分别为0、0和15%，48 h死亡率分别为0、55%和85%，72 h死亡率分别为15%、90%和100%，96 h死亡率分别为35%、100%和100%。白甲鱼4.00 mg/L试验组24 h死亡率为100%。

2.3 氯胺T对鲈鲤和白甲鱼幼鱼的急性毒性试验结果

将鲈鲤和白甲鱼幼鱼按照设定的氯胺T药物质量浓度梯度放入各试验组后，试验初期各试验组鲈鲤均表现出了不同程度狂躁不安、上下窜游的现象，高质量浓度试验组甚至出现狂游，个别试验鱼出现跳出桶外的现象。而各试验组白甲鱼无明显的异常行为。12.27、19.23、30.00 mg/L试验组中的鲈鲤和15.81、19.88、25.00 mg/L试验组中的白甲鱼分别于2 h和7 h后，开始表现出反应迟缓、游动无力、漂浮水面等异常行为，进而身体失去平衡、侧翻、呼吸缓慢，随着试验时间的增加，各试验组陆续出现死亡，死亡的鲈鲤和白甲鱼体表黏液增多，体色变浅发白。对照组和5.00 mg/L组的鲈鲤幼鱼在试验过程中未出现死亡现象。7.83、12.27 mg/L和19.23 mg/L试验组的鲈鲤24 h死亡率分别为5%、20%和55%，48 h死亡率分别为10%、35%和75%，72 h死亡率分别为10%、55%和80%，96 h死亡率分别25%、60%和95%。30.00 mg/L试验组的鲈鲤24 h死亡率为100%。对照组和10.00 mg/L组的白甲鱼在试验过程中未出现死亡现象。12.57、15.81 mg/L和19.88 mg/L试验组的白甲鱼24 h死亡率分别为0、10%和35%，48 h死亡率分别为0、50%和75%，72 h死亡率分别为15%、70%和90%，96 h死亡率分别为20%、95%和100%。25.00 mg/L试验组的白甲鱼24 h死亡率为100%。

2.4 3种水产药物对鲈鲤和白甲鱼幼鱼的半致死质量浓度和安全质量浓度

3种水产药物对鲈鲤幼鱼的半致死质量浓度和安全质量浓度见表4。由表4可见，聚维酮碘、敌百虫和氯胺T对鲈鲤幼鱼的24 h半致死质量浓度分别为78.02、4.11 mg/L和16.83 mg/L；48 h半致死质量浓度分别为73.74、3.68 mg/L和14.09 mg/L；72 h半致死质量浓度分别为72.10、3.15 mg/L和12.60 mg/L；96 h半致死质量浓度分别为65.13、2.89 mg/L和10.79 mg/L；安全质量浓度分别为19.76、0.89 mg/L和2.96 mg/L。3种水产药物对白甲鱼幼鱼的半致死质量浓度和安全质量浓度见表5。由表5可见，聚维酮碘、敌百虫和氯胺T对白甲鱼幼鱼的24 h半致死质量浓度分别为93.21、3.19 mg/L和20.11 mg/L ；48 h半致死质量浓度分别为89.70、2.07 mg/L和16.74 mg/L；72 h半致死质量浓度分别为87.44、1.66 mg/L和14.93 mg/L；96 h半致死质量浓度分别为79.95、1.49 mg/L和13.62 mg/L；安全质量浓度分别为24.92、0.26 mg/L和3.48 mg/L。

表4 3种药物对鲈鲤幼鱼的半致死质量浓度和安全质量浓度

表5 3种药物对白甲鱼幼鱼的半致死质量浓度和安全质量浓度

3 讨 论

3.1 3种水产药物对鲈鲤和白甲鱼幼鱼的毒性评价

半致死质量浓度常用来衡量药物对试验鱼毒性的大小，半致死质量浓度值与药物的毒性呈负相关，即半致死质量浓度值越小，药物的毒性越大[15]。常以96 h半致死质量浓度值作为药物毒性评价的指标，根据有毒物质对鱼类急性毒性的评价标准，可分为4个等级[16](药物96 h半致死质量浓度<0.1 mg/L，属剧毒药物；96 h半致死质量浓度为0.1～1，属高毒药物；96 h半致死质量浓度为1～10，属中毒药物；96 h半致死质量浓度>10，属低毒药物)。本试验结果显示，聚维酮碘、敌百虫、氯胺T对鲈鲤幼鱼的96 h半致死质量浓度为65.13、2.89 mg/L和10.79 mg/L，对白甲鱼幼鱼的96 h半致死质量浓度为79.95、1.49 mg/L和13.62 mg/L。参考有毒物质的评价标准，敌百虫对鲈鲤和白甲鱼幼鱼是中毒药物，氯胺T和聚维酮碘对二者是低毒药物。

3.2 鲈鲤和白甲鱼幼鱼对3种药物的耐受性差异

3.3 生产过程中3种药物的用药安全及注意事项

聚维酮碘为广谱消毒剂，主要用于鱼卵、水生动物体表消毒。聚维酮碘常规使用量因疾病种类、水生动物种类、药浴时间和频次而差别较大，如草鱼出血病预防用药30 mg/L浸浴15～20 min，鳗鲡(Anguillajaponica)烂鳃病治疗用药0.8～1.5 mg/L浸浴24 h，连用2次，红头病用药1～2 mg/L浸浴24 h，连续2～3次[13]。聚维酮碘对鲈鲤和白甲鱼幼鱼的安全质量浓度分别为19.76 mg/L和24.92 mg/L，远高于长时间低用药量，稍低于短时间高用药量，但40 mg/L试验组鲈鲤和60 mg/L试验组白甲鱼在96 h内未发生死亡现象，说明在实际生产过程中可按常用量使用。

敌百虫，可防治鱼体外寄生指环虫(Dactylogyrus)、三代虫(Gyrodactylus)等吸虫，肠内寄生的绦虫、棘头虫等蠕虫，此外还可驱杀锚头蚤(Lernaea)、鱼虱(Argulus)等甲壳动物、剑水蚤(Cyclops)、龙虱(Dytiscus)幼虫和蚌壳虫(Cyzicus)等。敌百虫常规药浴用量为0.2～0.5 mg/L[13]。敌百虫对鲈鲤和白甲鱼幼鱼的安全质量浓度分别为0.89 mg/L和0.26 mg/L，鲈鲤安全质量浓度高于常用量，白甲鱼安全质量浓度处于常用量中间值，但白甲鱼1.0 mg/L试验组96 h内未出现死亡现象，表明对鲈鲤和白甲鱼寄生虫性疾病可按常规用药量开展防治工作。此外在实际使用过程中，敌百虫除与碳酸钠合用外，不得与其他碱性药物合用，且操作过程中不宜采用金属器皿。

氯胺T，可用于治疗三代虫病、小瓜虫(Ichthyophthirius)病等寄生虫性疾病，同时是一种较强的杀菌消毒剂，具有杀菌谱广，消毒作用缓慢而持久，刺激性小的特点，主要用于防治细菌烂鳃病和真菌病。氯胺T常规用量为1～10 mg/L、常规消毒药浴用量为4～20 mg/L[13]。氯胺T对鲈鲤和白甲鱼幼鱼的安全质量浓度分别为2.96 mg/L和3.48 mg/L，低于消毒用量的最低值，但处于杀虫用量的中间值。试验结果显示，5 mg/L试验组鲈鲤96 h未出现死亡现象，但7.835 mg/L试验组鲈鲤24 h的死亡率为5%，10 mg/L试验组白甲鱼96 h未出现死亡，但12.57 mg/L试验组白甲鱼72 h死亡率为15%。故在实际生产过程中为保障鱼类的用药安全，氯胺T对鲈鲤幼鱼无论是消毒还是杀虫，其用量不可高于5 mg/L；氯胺T对白甲鱼幼鱼可按常规杀虫用量进行寄生虫性疾病防治，但消毒用量不应高于10 mg/L，且在施药过程中不可使用金属容器。

4 结 论

合理使用药物是控制水生动物病害蔓延的重要环节，药物用量过低无法达到药效而使病情恶化，药物用量过高对机体产生毒害作用而出现新的征兆。因此，选择药物时要注意其安全性和有效性。本次试验结果表明，敌百虫对鲈鲤和白甲鱼幼鱼是中毒药物，氯胺T和聚维酮碘对其是低毒药物。在鲈鲤和白甲鱼幼鱼培育过程中，要做到科学诊断，对症下药。细菌性疾病和日常消毒操作建议首选聚维酮碘，推荐使用方法为：(1)0.8～2.0 mg/L浸浴24 h，连用2～3次(二者相同)；(2)15～30 mg/L浸浴15～30 min(二者相同)。备选氯胺T，推荐使用剂量为：鲈鲤，3～5 mg/L浸浴24～72 h；白甲鱼，4～10 mg/L浸浴24～72 h。治疗蠕虫和甲壳动物建议使用敌百虫，推荐使用方法为：0.2～0.5 mg/L浸浴1～2 h，连用2～3次(二者相同)。治疗小瓜虫、三代虫等建议使用氯胺T，推荐使用方法为：鲈鲤，1～5 mg/L浸浴24 h；白甲鱼，1～10 mg/L浸浴24 h。