中药竹黄不同提取部位抗炎镇痛活性的研究

张启浩，雷雨露，朱晓兰，孙春龙，2，，杜 文，张韩杰，姚志刚，吴 涛，2，

(1.滨州学院生物与环境工程学院，山东 滨州 256603；2.山东省黄河三角洲生态环境科学重点实验室，山东 滨州 256603；3.山东省黄河三角洲野生植物资源开发利用工程技术研究中心，山东 滨州 256603)

竹黄(Shiraia bambusicola)，别称竹参、竹三七、竹花等，为肉座菌科(Hypocreaceae)真菌竹黄的子实体，一般寄生于竹的幼茎或者枝条上，是我国较为传统的中药材。其地理分布主要在四川、江苏、安徽、浙江、福建等我国南方地区[1-2]。竹黄本身性味淡温，具活血化淤、通经活络、镇惊、化痰止咳和补中益气等的作用，民间常用竹黄泡酒治疗虚寒胃痛、类风湿性关节炎、气管炎、跌打损伤、贫血头痛等症，是我国一种重要的中药资源[3-4]。但是，竹黄发挥抗炎镇痛的活性部位及其物质基础仍不明确。因此，本实验通过用乙醇提取竹黄的有效成分，再利用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇三种有机溶剂进行分段萃取，剩余部位作为水提物(母液部分)，对竹黄不同极性提取物抗炎镇痛活性进行考察，以初步筛选出竹黄抗炎镇痛的最佳活性部位，为明确竹黄物质基础提供依据[5-8]。

1 材料

1.1 实验动物

清洁级ICR昆明小鼠，160只，体重30±2g，雌雄各半，由山东绿都生物科技有限公司提供。在温度(25±2)℃，10h光照下条件下正常饲养3d后开始实验。

1.2 药品与试剂

95%乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二甲苯、冰醋酸、二甲基亚砜均为分析纯、(于天津福晨化学试剂有限公司购买)；阿司匹林肠溶片(拜耳医药保健有限公司)，规格100mg×30片，国药准字J20130078；罗通定片(上海罗福太康药业有限公司)，规格30mg×36片，国药准字H41023586。

1.3 仪器

循环水式真空泵、旋转蒸发仪、热板仪、电子天平等。

1.4 药材

药材竹黄于2017年10月购自安徽亳州，经滨州学院生物与环境工程学院杜文副教授鉴定为中药竹黄。

2 实验方法

2.1 样品的制备

2.1.1 醇提物的制备

将竹黄去除杂物，粉碎，称取1kg，加入15倍乙醇进行浸提，浸提3次，每次24h，将每次浸提液中的固体残留抽滤出来，合并滤液，旋转蒸发回收溶剂，浓缩为浸膏(无醇味)，待用。

2.1.2 不同极性部位灌胃药剂的制备

将醇提后浓缩的浸膏依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，为再分别减压回收溶剂，得到不同极性部位的浸膏；剩余部分为水提物(母液部分)，减压浓缩为浸膏。分别称取三种不同的极性提取物，以二甲基亚砜(DMSO)为增溶剂，加蒸馏水溶解，制成0.01g/mL的灌胃剂，待用。

2.2 灌胃剂的抗炎、镇痛作用

2.2.1 二甲苯致小鼠急性耳廓肿试验[9]

选取健康ICR小鼠120只，雌雄各半，随机分6组，每组10只。空白对照组灌胃生理盐水20 mL/kg，阳性对照组用阿司匹林0.5 g/kg，灌胃，提取物按0.5 g/kg剂量给药，连续7d，末次给药30 min后，用二甲苯0.1 mL均匀涂布于各小鼠右耳的正反面，30 min后脱臼处死，用6 mm打孔器在两耳同一部位扎下左右耳片，精密称重，以右耳的重量减去左耳的重量作为耳廓炎性肿胀度，计算右耳肿胀度及抑制率。

2.2.2 棉球肉芽肿致小鼠炎症模型试验[10]

选取健康ICR小鼠120只，雌雄各半，随机分6组，每组10只。在乙醚浅麻醉下腹部切口，将已高压灭菌的5.0 mg棉球植入小鼠右侧腋窝皮下，缝合。空白对照组灌胃生理盐水20 mL/kg，阳性对照组用阿司匹林0.5 g/kg，提取物按0.5 g/kg剂量给药，连续7 d。末次给药1 h后处死小鼠，取出棉球，在70 ℃烘箱中干燥2 d后称重，减去原棉球重量即为肉芽肿重量，计算小鼠肉芽肿胀抑制率。

2.2.3 小鼠热板法痛阈测定试验[11]

选择雌性健康小鼠120只，置于(55.0±0.1)℃分别测定其痛阈，挑选出痛阈值在5～30s的小鼠，随机分6组，空白对照组灌胃生理盐水20 mL/kg，提取物按0.5 g/kg剂量给药，连续给药7d，罗通定组灌胃给药0.5 g/kg，各组末次给药1h后，将小鼠置于(55.0±0.1)℃的热板仪中，记录小鼠自投入热板仪后第一次舔足所用的时间，作为该鼠的痛阈值。

2.2.4 醋酸致小鼠扭体试验

选择健康小鼠120只，雌雄各半，随机分为6组。空白对照组灌胃生理盐水20mL/kg；提取物灌胃1次/d，连续7 d，给药量为0.5g/kg，罗通定组灌胃给药0.5 g/kg，各组末次给药1h后，腹腔注射0.5 %冰醋酸10mL/kg，记录各组小鼠给药后15 min内的扭体(伸缩后肢、蠕行、臀部抬高、腹部收缩内凹)的次数。

2.3 数据处理

数据采用SPSS(13.0)进行单因素方差分析，Excel统计软件进行统计分析。

3 结果

3.1 竹黄不同提取部位对二甲苯致小鼠急性耳廓肿的影响

与空白对照组相比较，竹黄的乙酸乙酯和水的极性提取部位对二甲苯引起的小鼠的耳肿胀有显著抑制作用(P<0.05)；而正丁醇部位和石油醚部位与生理盐水相比较，组间差异P>0.05，不具统计学意义。其中，水提物的肿胀抑制率达到81.45%，阿司匹林也有显著的抑制作用(P<0.01)，见表1。

表1 竹黄不同提取部位对二甲苯致 小鼠急性耳廓肿的影响

注：与空白对照比较，**P<0.01，*P<0.05

3.2 竹黄不同提取部位对棉球肉芽肿致小鼠炎症模型的影响

与空白对照组相比较，阿司匹林阳性对照和各极性提取部位均P>0.05，无统计学意义。但从抑制率看来，各极性提取部位和阿司匹林的抑制率不相上下。存在两种情况，一是药物对肉芽肿胀度无影响，二是各药物对肉芽肿胀度影响一致，见表2。

表2 竹黄不同提取部位对棉球肉芽肿 致小鼠炎症模型的影响

3.3 竹黄不同提取部位对热刺激小鼠痛阈值的影响

从表3可知，相对于罗通定组阳性对照，石油醚极性部位对热刺激小鼠的痛阈率影响较大；除石油醚极性提取部位之外，其他的极性提取部位也都具有提高痛阈的活性成分。

表3 竹黄不同提取部位对热刺激小鼠、 痛阈值的影响

3.4 竹黄不同提取部位对醋酸致小鼠扭体的影响

与空白对照组相比较，阳性对照组罗通定对小鼠的扭体次数影响差异显著(P<0.05)，而竹黄其他极性提取部位与生理盐水相比较，组间差异P>0.05，无统计学意义。但是乙酸乙酯部位和水提物部位均有一定的抑制率，而石油醚部位和正丁醇部位抑制率为负值，无数学意义，见表4。

表4 竹黄不同提取部位对醋酸致小鼠扭体的影响

注：与空白对照比较，**P<0.01，*P<0.05

4 讨论

中药的化学组成成分非常复杂，药理活性成分的作用是综合性的，有些成分既具有治疗作用，也具有一定的毒性。本实验通过采用传统的抗炎镇痛模型对竹黄醇提物的不同萃取部位进行探究，初步确定极性水提物为竹黄抗炎镇痛的最佳活性部位，为以后的应用提供了理论依据，但是，其活性成分并没有完全明确，因此，竹黄的研究有待更进一步。