妇科再造丸的体外溶出度测定

郑晓霞 徐剑 田洪星 胡蝶 刘慧

中图分类号 R283.6；R284.1 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2018）18-2497-04

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.18.12

摘 要 目的：建立测定妇科再造丸体外溶出度的方法。方法：采用高效液相色谱法测定制剂中黄芩苷和橙皮苷的含量，色谱柱为WondaSil-C18，流动相为0.2%甲酸溶液-乙腈（梯度洗脱），流速为1.0 mL/min，检测波长为280 nm，柱温为30 ℃，进样量为10 μL；采用桨法测定制剂的累积溶出度，溶出介质为磷酸盐缓冲液（pH 6.8），转速为100 r/min，温度为（37±0.5）℃，取样量为2 mL。结果：黄芩苷和橙皮苷检测质量浓度线性范围分别为6.936～23.12 μg/mL（r=0.999 8）、0.620～3.10 μg/mL（r=0.999 0）；定量限分别为4.624、0.620 μg/mL，检测限分别为2.312、0.155 μg/mL；精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于2%；加样回收率分别为95.28%～99.22%（RSD=0.97%，n=9）、96.10%～99.84%（RSD=1.98%，n=9）。样品中黄芩苷和橙皮苷10 h时的平均累积溶出度分别为（97.10±0.09）%、（78.50±0.08）%；溶出63.2%所需时间（TD）分别为（1.88±0.12）、（3.26±0.10）h，溶出50%所需时间（T50）分别为（0.88±0.09）、（1.67±0.14）h。结论：该方法操作简便、准确，可用于妇科再造丸的体外溶出度测定。

关键词 妇科再造丸；桨法；体外溶出度

ABSTRACT OBJECTIVE： To establish a method for the determination of in vitro dissolution of Fuke zaizao pills. METHODS： HPLC method was adopted to determine the contents of baicalin and hesperidin in preparation. The determination was performed on WondaSil-C18 column with mobile phase consisted of 0.2% formic acid-acetonitrile （gradient elution） at the flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was set at 280 nm， and column temperature was 30 ℃. The sample size was 10 μL. The dissolution of the preparation was determined by paddle method using phosphate buffer solution （pH 6.8） as dissolution medium with rotate speed of 100 r/min，temperature was （37±0.5）℃， sample size was 2 mL. RESULTS： The linear range of baicalin and hesperidin were 6.936-23.12 μg/mL （r=0.999 8） and 0.620-3.10 μg/mL （r=0.999 0）， respectively. Limits of quantitation were 4.624， 0.620 μg/mL， limits of detection were 2.312， 0.155 μg/mL， respectively. RSDs of precision， stability and repeatability tests were all lower than 2%； the recoveries were 95.28%-99.22% （RSD=0.97%，n=9） and 96.10%-99.84% （RSD=1.98%，n=9）， respectively. The accumulative dissolution rates of baicalin and hesperidin in sample were （97.10±0.09）% and （78.50±0.08）% at 10 h， respectively. TD were （1.88±0.12）、（3.26±0.10）h，T50 were （0.88±0.09）、（1.67±0.14）h， respectively. CONCLUSIONS： The method is simple and accurate， and can be used for the determination of in vitro dissolution of Fuke zaizao pills.

KEYWORDS Fuke zaizao pill； Paddle method； in vitro dissolution rate

婦科再造丸主要由当归、白芍、地黄、益母草、阿胶、杜仲等42味中药材组合而成，可养血调经、补益肝肾、暖宫止痛，在临床上常用于治疗月经不调等妇科慢性病。近年来研究表明，妇科再造丸对子宫肌瘤[1-2]、乳腺增生、黄褐斑、不孕、妇科炎症复发[3]等有一定的改善效果，并且还对黑色素细胞的生长具有一定的抑制作用[4-6]。目前，评价中药口服固体制剂质量的方法主要是体外溶出度试验，其不仅可用于指导处方筛选和产品开发以获得最佳处方、制剂工艺和剂型，还可用于评价中药口服固体制剂的体内生物利用度。妇科再造丸现行质量标准相关研究尚不全面，仅有个别药材的薄层鉴别[7-8]、显微鉴定[9]及少数成分的含量测定[10-12]，尚无溶出度测定的研究。因此，有必要建立符合妇科再造丸特点的溶出度测定方法。本试验以黄芩苷、橙皮苷为指标成分，以不同溶出介质模拟体内环境，优选妇科再造丸的最佳溶出介质，并考察该制剂中上述指标成分的体外溶出特征，旨在为提高和完善其质量标准提供借鉴。

1 材料

1.1 仪器

1260型高效液相色谱仪，包括紫外检测器等（美国Agilent公司）；SK8200型超声波清洗仪（上海科导超声仪器有限公司）；AE240型电子分析天平（瑞士Mettler-Toledo公司）；JA2003型电子分析天平（上海良平仪器仪表有限公司）；TGL-16C型台式离心机（上海安亭科学仪器厂）；RC-3型溶出度测试仪（天津市国铭医药设备有限公司）。

1.2 药品与试剂

妇科再造丸（贵阳德昌祥药业有限公司，批准文号：国药准字Z20025056，批号：20111247，规格：0.26 g/丸）；黄芩苷对照品（批号：H-016-140729，纯度：99.9%）、橙皮苷对照品（批号：C-006-140728，纯度：99.9%）均购自成都瑞芬思生物科技有限公司；甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：WondaSil-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：0.2%甲酸溶液（A）-乙腈（B），梯度洗脱（0～22 min，2% B→20% B；22～30 min，20% B→28% B；30～36 min，28% B→35% B）；流速：1.0 mL/min；检测波长：280 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 缓冲液 制备磷酸盐缓冲液（pH 6.8）[13]，室温静置，备用。

2.2.2 对照品溶液 精密称取黄芩苷对照品、橙皮苷对照品各适量，分别置于25 mL棕色量瓶中，加甲醇溶解并定容，即得单一对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液 取不同时间点的溶出液各适量，以10 000 r/min离心10 min，上清液经0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.2.4 阴性对照溶液 按妇科再造丸处方和工艺分别制备缺黄芩或陈皮的阴性样品，并按“2.2.3”项下方法制成各自阴性对照溶液。

2.3 系统适用性试验

取“2.2”项下对照品溶液和供试品溶液各适量，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图，详见图1。结果，理论板数按黄芩苷、橙皮苷峰计均不低于3 000；基线分离良好，分离度均大于1.5。

2.4 专属性试验

取“2.2”项下对照品溶液和阴性对照溶液各适量，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图，详见图1。结果，阴性对照在与黄芩苷、橙皮苷对照品保留时间相同处无干扰峰，表明本方法专属性良好。

2.5 线性关系考察

分别精密量取“2.2.2”项下对照品溶液各适量，置于10 mL量瓶中，加甲醇定容，制成黄芩苷质量浓度为6.936、9.248、11.560、13.872、18.496、23.120 μg/mL，橙皮苷质量浓度为0.155、0.31、0.62、0.93、1.24、1.55、1.86、2.48、3.10 μg/mL的系列对照品溶液。精密量取上述系列对照品溶液各10 μL，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以黄芩苷和橙皮苷质量浓度（x，μg/mL）为横坐标、峰面积（y）为纵坐标进行线性回归，得黄芩苷和橙皮苷回归方程分别为y=17.426x-11.563（r=0.999 8）、y=189.51x-1.315 6（r=0.999 0）。结果表明，黄芩苷和橙皮苷检测质量浓度线性范围分别为6.936～23.12、0.620～3.10 μg/mL。

2.6 定量限与检测限考察

分别精密量取“2.2.2”项下对照品溶液各适量，倍比稀释，并按“2.1”项下色谱条件进样测定，以信噪比10 ∶ 1、3 ∶ 1分别计算定量限与检测限[13]。结果，黄芩苷和橙皮苷的定量限分别为4.624、0.620 μg/mL，检测限分别为2.312、0.155 μg/mL。

2.7 精密度试验

取“2.2.2”项下对照品溶液各适量，按“2.1”项下色谱条件连续进样测定6次，记录峰面积。结果，黄芩苷和橙皮苷峰面积的RSD分别为1.20%、0.51%（n=6），表明仪器精密度良好。

2.8 稳定性试验

取“2.2.3”项下供试品溶液适量，分别于室温下放置0、2、4、8、12、24 h时按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，黄芩苷和橙皮苷峰面积的RSD分别为0.20%、0.30%（n=6），表明供试品溶液在室温下放置24 h内基本稳定。

2.9 重复性试验

精密称取样品适量，共6份，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算样品含量。结果，黄芩苷和橙皮苷含量平均值分别为0.9、5.0 μg/mL，RSD分别为0.17%、0.30%（n=6），表明本方法重复性良好。

2.10 加样回收率试验

取已知含量的样品9份，每份1 g，分别加入低、中、高质量浓度的待测成分对照品溶液适量，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算加样回收率，结果见表1。

2.11 溶出度测定

2.11.1 溶出介质考察 按2015年版《中国药典》（四部）通则“溶出度与释放度测定法”项下桨法[13]进行操作，选择4种经超声（功率：250 W，频率：40 kHz）脱气处理的不同溶出介质[磷酸盐缓冲液（pH 6.8）、蒸馏水、人工胃液、人工腸液][13]，转速为100 r/min，温度为（37±0.5）℃，分别于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10 h时取样2 mL，并补加等量同温溶出介质，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定黄芩苷和橙皮苷在不同溶出介质中各取样时间点的含量，并计算累积溶出度：累积溶出度=（ρ1+ρ2+………ρn+ρn+1）V取/（ρ0V总）（式中，ρn为第n个取样时间点的质量浓度，V总为溶出体积，V取为取样体积，ρ0为取样前溶液的质量浓度），结果见图2。

由图2可知，黄芩苷和橙皮苷在人工肠液中未被检出，而在磷酸盐缓冲液（pH 6.8）中的总体累积溶出度最大，因此，确定磷酸盐缓冲液（pH 6.8）为样品的溶出介质。

2.11.2 样品溶出度测定 称取样品6份，每份约为2.6 g（1次给药剂量），按2015年版《中国药典》（四部）通则“溶出度与释放度测定法”项下桨法[13]进行操作，溶出介质为磷酸盐缓冲液（pH 6.8），转速为100 r/min，温度为（37±0.5）℃，分别于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10 h时取样2 mL，并补加等量同温溶出介质，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，平行操作6次，记录峰面积，计算样品含量并计算平均累积溶出度，结果见表2。

2.11.3 样品体外溶出动力学分析 将样品中黄芩苷和橙皮苷的平均累积溶出度数据分别以零级动力学、一级动力学、Weibull、Higuchi、Retger-peppas模型进行拟合[14-15]，结果见表3（表中，Q为平均累积溶出度，t为取样时间）。

由表3可知，样品中黄芩苷和橙皮苷的体外溶出动力学均符合Weibull模型，将所得数据带入回归方程进行计算，得黄芩苷和橙皮苷溶出63.2%所需时间（TD）分别为（1.88±0.12）、（3.26±0.10）h；溶出50%所需时间（T50）分别为（0.88±0.09）、（1.67±0.14）h。

3 讨论

影响口服固体制剂溶出度的因素有溶出方法、转速及溶出介质等，因此，预试验中笔者考察了样品在不同方法（桨法、篮法）、不同转速（50、75、100、125 r/min）、不同溶出介质[蒸馏水、磷酸盐缓冲液（pH 6.8）、人工胃液、人工肠液]条件下的溶出情况。结果表明，在桨法、转速100 r/min、磷酸盐缓冲液（pH 6.8）条件下，样品中黄芩苷和橙皮苷的溶出度最佳；而在人工肠液中未检出上述成分，可能是由于两种成分在其中不稳定造成的。

通过对样品体外溶出度的测定发现，以黄芩苷和橙皮苷为指标成分的妇科再造丸的体外溶出动力学符合Weibull模型。此结论可为该药在体内的生物利用度评价提供一定参考。

综上所述，该方法操作简便、准确，可用于妇科再造丸的体外溶出度测定。

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（收稿日期：2017-12-07 修回日期：2018-03-19）

（编辑：张 静）