血清 GP73、AFP、AFU 检测对AFP低水平原发性肝癌的诊断价值

陈旭东 王倩倩 陈巧巧

315020 宁波大学医学院附属医院检验科（陈旭东，王倩倩，陈巧巧）

糖原发性肝癌（primary hepatocellular carcinoma，PHC）是指由肝细胞或肝内胆管上皮细胞发生的恶性肿瘤，是我国常见恶性肿瘤之一，其病死率在恶性肿瘤中居第2位[1]，且呈逐年上升趋势。目前，本病早期缺乏有效的监测指标，确诊时大多数属于中期甚至晚期，延误了最佳治疗时机。PHC的诊断方法除了病理学、影像学等检查外，其血清标志物检测也为临床早发现、早治疗提供一条重要途径[2]。血清甲胎蛋白（AFP）是诊断PHC特异性的标志物，现已广泛用于筛查、诊断、判断、疗效及预测复发。α-L-岩藻糖苷酶（AFU）也被认为是辅助诊断PHC的一项血清学指标。高尔基体蛋白73（GP73）则有望成为继AFP、AFU后早期诊断PHC及判断预后的新标志物[3]。笔者通过测定血清GP73、AFP、AFU水平，探讨3者单独及联合检测对AFP低水平PHC的辅助诊断价值。

1 对象和方法

1.1 对象 选择2015年7月至2017年2月在我院住院的53例PHC患者（PHC组），其中男35例，女18例，年龄 41～70（57.3± 9.6）岁。纳入标准：（1）所有患者均经B超、螺旋CT、肝活检及病理检查确诊，符合中国抗癌协会制定的《原发性肝癌的临床诊断与分期标准》。（2）所有PHC患者血清AFP检测浓度＜200ng/ml。排除标准：排除PHC以外的其他恶性肿瘤患者。选择同期良性肝病患者81例（良性组），其中男58例，女23例，年龄39～69（56.7±10.3）岁。其中肝硬化 35 例，慢性乙肝患者46例，均符合中华医学会制定的《慢性乙型肝炎防治指南》[4]中肝炎和肝硬化的诊断标准。另选择同期在本院行健康体检者142例作为对照组，其中男90例，女52例，年龄 42～71（58.2±7.5）岁。经检测 AFP及各型肝炎病毒标志物均为阴性，无肝、心、肺、肾功能异常。3组对象性别、年龄比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。本研究所有对象均知情同意。

1.2 试剂与仪器 AFU检测试剂由安徽伊普诺康生物技术股份有限公司提供（批号：20160928，60ml/瓶）。使用贝克曼库尔特公司生产的AU5831全自动生化分析仪。AFP检测试剂由贝克曼库尔特商贸（中国）有限公司提供（批号：622454）；使用贝克曼库尔特公司生产的DXI 800。GP73检测试剂由北京热景生物技术有限公司生产（批号：20160502）。使用北京拓普分析仪器有限责任公司生产的DEM－3洗板机、TECAN酶标仪。

1.3 标本采集 所有研究对象均空腹12h后，于次日清晨抽取空腹静脉血5ml，室温下静置20min后以3 000r/min离心10min，取血清置于－20℃冰箱备用。

1.4 检测方法

1.4.1 制备检测GP73的标准曲线 利用试剂盒提供的系列 GP73 标准液 0、45、90、200、450ng/ml，以获取的吸光度为横坐标，以GP73标准浓度为纵坐标绘制标准曲线，见图1。进行直线回归得到方程式：y=233.87x+13.338，决定系数 r2=0.9952。

1.4.2 GP73、AFP、AFU 检测 GP73、AFP、AFU 均严格按照试剂盒说明书进行操作，采用ELISA法测定血清GP73水平，采用微粒子酶联免疫法检测AFP，采用化学比色速率法检测AFU。参考范围：AFP＜20 ng/ml，AFU 11.3～40.0U/L，GP73＜150ng/ml。

图1 ELISA法检测G P73所使用的标准曲线

1.5 统计学处理 采用SPSS 17.0统计软件，正态分布的计量资料以表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用SNK－q方法；计数资料用百分率表示，组间比较采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。灵敏度=真阳性数（/真阳性数+假阴性数）×100%；特异度=真阴性数（/真阴性数+假阳性数）×100%。

2 结果

2.1 3组对象血清GP73、AFP、AFU水平的比较 各组间血清GP73、AFP水平比较差异均有统计学意义（均P＜0.05），均为PHC＞良性组＞对照组；PHC组和良性组间血清AFU水平比较无统计学差异（P＞0.05），但均高于对照组（均 P＜0.05），见表 1。

表1 3组对象血清G P73、A F P、A F U水平的比较

2.2 GP73、AFP、AFU单独检测和联合检测对AFP低水平PHC的诊断效能比较 单独使用GP73、AFP、AFU对低水平PHC组进行辅助诊断的灵敏度依次为：62.3%、43.4%、22.6%，特异度依次为：72.6%、70.0%、66.8%，3者联合检测的灵敏度和特异度分别为88.7%、40.8%。可见GP73联合AFP、AFU测定诊断PHC的灵敏度高于单一指标，特异度有所降低，见表2。

3 讨论

血清AFP作为临床上辅助诊断肝癌常用的血清标志物，其灵敏度较低，只有40%～65%[5]，因此临床有30%以上的PHC患者血清AFP并不升高，即所谓AFP阴性PHC，易漏诊、误诊。对早期肝癌，AFP的漏诊率可达40%以上，进展期肝癌漏诊率达15%～20%。单独使用血清AFP诊断肝癌，其低值甚至阴性表达，易导致临床医生的忽视，在一定程度上影响了该指标的使用。而AFP在肝癌、胃癌、肺癌、胰腺癌、胆道肿瘤及睾丸肿瘤等多种临床疾病的患者血清中也会升高。因此寻求新的更加敏感或特异的血清标志物或血清诊断模式显得越来越有必要[6]。

表2 3项指标单独检测和联合检测对A F P低水平P H C的诊断效能比较（%）

GP73是一种较新的血清学指标，该蛋白编码基因位于人染色体的9q21.33，它可调节蛋白酶从多肽链的N端水解碱性氨基酸[7]。当肝脏发生癌变后，肝脏细胞中GP73的表达上调，从而使血清GP73水平的增高，推测其可能是由于GP73蛋白扩散进入血液循环导致[8]。GP73现已被证实为临床上用于肝癌筛查的一种新的血清标志物。许多研究表明GP73的表达与PHC的发生有密切关联，其灵敏度和特异度均超过了AFP[9－10]，本研究亦证实了该观点。

AFU是一种溶酶体酸性水解酶，广泛存在于哺乳动物的细胞和体液中，特别是在肝、肾组织中的含量最高[11]。近年研究发现PHC患者血清中AFU亦明显升高，可作为PHC的预测指标[12－13]，对AFP检测结果阴性和小细胞肝癌患者的诊断价值较大，可作为血清AFP未增高时早期筛查PHC的一个辅助指标。

本研究发现各组对象血清GP73水平比较有统计学差异，其升高水平PHC组高于良性组，而良性组有高于对照组；血清AFP检测指标不同组间和GP73也有类似的分布；而对于血清AFU检测指标，PHC组和良性组差异无统计学意义（P＞0.05），但均高于对照组（P＜0.05）；单独使用GP73、AFP、AFU对PHC组进行辅助诊断的灵敏度依次为：GP73＞AFP＞AFU，特异度依次为：GP73＞AFP＞AFU，3者联合辅助诊断低水平PHC的灵敏度最高，有助于PHC的早期诊断。与临床上常用的AFP相比，GP73有更高的灵敏度，在血清AFP检测结果为阴性的患者临床意义尤为显著，故GP73和AFP有较好的互补性。本研究证实血清GP73检测指标可独立用于AFP低水平PHC的辅助诊断，但3者联合检测能获得最佳的诊断灵敏度，该研究成果值得广大临床实验室推广使用，以减少临床对AFP低水平PHC患者的漏检率。

综上所述，GP73水平的测定可以作为AFP低水平PHC临床诊断分子标志物。GP73、AFP及AFU 3者联合检测有助于提高低浓度AFP肝癌的诊断率，为肝癌的早期诊断提供可靠依据。本研究与其他文献稍有差异[14]，可能与本实验测量误差及研究例数不足有关，有待于完善实验方法进一步研究。